Морфофункциональное состояние буккальных эпителиоцитов у больных раком легкого

Входными воротами для многих возбудителей инфекционно-воспалительных процессов является слизистая оболочка ротовой полости. Эпителию слизистой оболочки рта принадлежит важная роль в реализации ряда защитных механизмов, к которым относятся высокая ферментативная активность, наличие в эпителии большого количества гликогена, высокая интенсивность обменных процессов и их способность к быстрой перестройке. Мукозит в полости рта – опасное осложнение, отягощающее состояние онкологических больных [4–6]. Частота патологии слизистой оболочки полости рта у онкологических больных очень высока, даже в условиях стандартной химиотерапии (ХТ), колеблясь в очень широких пределаx [1, 3]. В связи с этим изучение факторов противоинфекционной защиты полости рта у пациентов с онкологической рованная смешанная слюна. Мазки фиксировали

патологией в условиях противоопухолевой химиотерапии является весьма актуальным.

Цель исследования – изучить морфофункциональное состояние буккальных эпителиоцитов как факторов колонизационной резистентности слизистых оболочек полости рта у больных раком легкого.

Материал и методы

Исследование проводилось на базе кафедры микробиологии и вирусологии Сибирского государственного медицинского университета и отделения химиотерапии ФГБУ «НИИ онкологии» СО РАМН. Обследовали 39 мужчин и 5 женщин с морфологически подтвержденным диагнозом рака легкого II - IV стадии, находившихся на лечении в отделении химиотерапии для проведения цикловой противоопухолевой терапии. Группу сравнения составили здоровые добровольцы без онкологической патологии (n=20).

Материалом для исследования явились мазки со слизистой оболочки полости рта и нестимули- и окрашивали по методу Романовского–Гимза. Микроскопически вели учет клеток эпителия. В каждом мазке подсчитывали 200 клеток плоского эпителия с учетом степени дифференцировки и деструкции. В цитограмме мазков подсчитывали индексы созревания – процентное соотношение в мазке поверхностных и промежуточных клеток, кератинизации – процент безъядерных клеток, определяли индекс колонизации буккального эпителия – среднее количество адгезированных бактериальных клеток на одном эпителиоците. Степень деструкции эпителиальных клеток оценивали с учетом следующих морфологических критериев:

0 класс деструкции – клетки с нормальной структурой ядра и цитоплазмы;

1-й класс – клетки с частичным (не более 1/2), деструктивным повреждением цитоплазмы и нормальной структурой ядра;

2-й класс – клетки со значительной (более 1/2), но не полной деструкцией цитоплазмы и частичным деструктивным повреждением ядра;

3-й класс – клетки с полной деструкцией цитоплазмы и значительным, но не полным деструктивным повреждением ядра;

4-й класс – клетки с полной деструкцией ядра и цитоплазмы.

Для оценки состояния местного иммунитета полости рта определяли коэффициент сбалансированности факторов местного иммунитета (Ксб), который является математически интегрированным показателем сбалансированности изучаемых параметров. Формула для определения Ксб составлена с учетом функциональных связей лизоцима с иммуноглобулинами:

Кеб =^^^^, IgA х 0,6 х Liz где IgG и IgA – концентрация иммуноглобулинов в г/л; Liz – активность лизоцима смешанной слюны в %; 40 % – условная норма активности лизоцима; 0,6 — соотношение IgG/IgA у здоровых.

Количественное определение IgG и IgA в слюне проводили методом радиальной иммунодиффузии по G. Mancini, A.O. Carbonaro, в модификации Е.В. Чернохвостовой, С.И. Гольдерман. Активность лизоцима смешанной слюны определяли фотоне-фелометрическим методом В.Г. Дорофейчук.

Математическая обработка результатов проводилась с помощью пакета программ «Statistica for Windows 6,0».

Результаты и обсуждение

Результаты исследования показали, что индекс созревания буккальных эпителиоцитов (БЭ) был более чем в 2 раза выше у больных раком легкого (39,35 ± 15,2) по сравнению с группой сравнения (13,19 ± 3,93) и значительно возрастал у них после проведения курса химиотерапии (50,04 ± 3,95). Изменения данного показателя связаны с уменьшением в этих группах процента поверхностных клеток и повышенным содержанием промежуточных клеточных форм (табл. 1). У больных раком легкого (РЛ) обнаружено увеличение числа безъядерных клеток (3,32 ± 0,87), особенно после химиотерапии (индекс кератинизации 16,7 ± 0,3; в группе сравнения 2,1 ± 0,38). Среднее число бактерий, колонизирующих эпителиальную клетку – индекс колонизации, - у больных РЛ был в 1,5 раза выше, чем в группе сравнения, и в дальнейшем увеличивался после химиотерапии (79,06 ± 3,01).

Проведенные цитологические исследования показали, что количество эпителиальных клеток с 0 классом деструкции контрольной группы составило 64,4 ± 1,3 %, в то время как у больных раком легкого этот показатель был достоверно снижен - 45,0 ± 2,40 % (табл. 2). Количество эпителиальных клеток с 1-й классом деструкции у больных раком легкого составило 12,5 ± 1,25 %, тогда как в группе сравнения средние значения равнялись 16,9 ± 0,8 %. Содержание эпителиальных клеток со 2-м классом деструкции у больных раком легкого не отличалось от показателей в группе сравнения, а количество эпителиоцитов с 3-м классом деструкции находилось в пределах 15,0 ± 0,8 %, в контроле – 6,1 ± 0,45 %. Содержание БЭ с 4-м классом деструкции было высоким – 23,0 ± 1,2 %

Таблица 1

Цитологические параметры буккальных эпителиоцитов в сравниваемых группах (М ±m)

Группы обследуемых	Индекс созревания	Индекс кератинизации	Индекс колонизации
Группа сравнения (n=20)	13,19 ± 3,93	2,1 ± 0,38	36,75 ± 4,56
Больные РЛ до химиотерапии (n=19)	39,35 ± 15,2; p<0,05	3,32 ± 0,87; p > 0,05	52,32 ± 2,534 p<0,05
Больные РЛ после химиотерапии (n=18)	50,04 ± 9,35; р*<0,05	16,7 ± 0,3; р*<0,05	79,06 ± 3,01; р*<0,05

(контроль – 6,3 ± 0,95 %). После проведения курса ХТ количество эпителиальных клеток с 0 классом деструкции достоверно снижалось по сравнению с группой больных до лечения и равнялось (28,8 ± 2,98 %). Количество эпителиальных клеток с 3-м и 4-м классами деструкции у больных раком легкого увеличивалось после ХТ – 23,69 ± 2,10 % и 36,98 ± 2,31 %. Таким образом, для больных раком легкого характерно повышенное содержание БЭ с высокой степенью деструкции. После проведения противоопухолевой химиотерапии отмечается более выраженное снижение количества клеток с малой степенью деструкции (0, 1, 2-й классы) и увеличение количества клеток с максимальной степенью деструкции (3-й, 4-й классы).

В настоящее время признана координирующая роль мукозального эпителия, в том числе и буккальных эпителиоцитов, во взаимодействии врожденного и приобретенного иммунитета. Для оценки состояния мукозального иммунитета полости рта определяли в слюне уровень иммуноглобулина G, секреторного иммуноглобулина А, лизоцима и подсчитывали коэффициент сбалансированности факторов иммунитета. Отмечена более высокая концентрация IgG в слюне у больных раком легкого (0,045 ± 0,001) по сравнению с группой без онкологической патологии (табл. 3). Химиотерапия вызывала дальнейшее повышение IgG, при этом содержание секреторного иммуноглобулина, напротив, отчетливо снижалось (0,038–0,022–0,018). Лизоцимная активность слюны была менее выражена у онкобольных, чем в группе сравнения. Соответственно. коэффициент сбалансированности показателей местного иммунитета приобретал высокие значения – 4,24 (норма до 2,0) у онкологических больных, особенно в условиях применения цитостатиков (6,93), что указывает на снижение защитной функции ротовой жидкости, вследствие уменьшения содержания лизоцима и секреторного иммуноглобулина.

Результаты исследования цитологического статуса буккальных эпителиоцитов у больных раком легкого указывают на нарушение нормального течения процесса созревания и дифференцировки эпителия слизистой полости рта. Эти нарушения могут возникать в качестве реакции на микробную колонизацию поверхности эпителия или на инвазию микроорганизмов в его пласт. Почти все

Таблица 2

Степень деструкции буккальных эпителиоцитов в сравниваемых группах (М ± m)

Показатели сбалансированности факторов местного иммунитета полости рта в сравниваемых группах (М ±m)

Группы	Степень деструкции эпителиальных клеток
	0 класс	1-й класс	2-й класс	3-й класс	4-й класс
Группа сравнения (n=20)	64,4 ± 1,3 %	16,90 ± 0,8 %	6,30 ±1,10 %	6,10 ± 0,45 %	6,30 ± 0,95 %
Больные РЛ до ХТ (n=19)	45,0 ± 2,40 % р<0,05	12,5 ± 1,25 % p<0,05	4,5 ± 1,1 % p > 0,05	15,0 ± 0,80 p<0,05	23,0 ± 1,20 % p<0,05
Больные РЛ после ХТ (n=18)	28,80 ± 2,98 % р*<0,05	7,70 ± 0,62 % р*<0,05	2,83 ± 0,18 % р*<0,05	23,69 ± 2,1 % р*<0,05	36,98 ± 2,31 % р*<0,05

Примечание: p – уровень значимости различий результатов между группой сравнения и группой больных раком легкого до лечения; р* – уровень значимости различий результатов между группой сравнения и группой больных раком легкого после химиотерапии.

Таблица 3

Группы обследуемых	Ig G, г/л	sIg A, г/л	Лизоцим, мкг/мл	Ксб
Группа сравнения (n=19)	0,028 ± 0,001	0,038 ± 0,001	45,37 ± 0,7	1,08 ± 0,05
Больные РЛ до ХТ (n=19)	0,045 ± 0,001; p<0,05	0,022 ± 0,001; p<0,05	32,78 ± 0,71; p<0,05	4,24 ± 0,21; p<0,05
Больные РЛ после ХТ (n=19)	0,053 ± 0,001; р*<0,05	0,018 ± 0,001; р*<0,05	29,05 ± 1,27; р*<0,05	6,93 ± 0,414 р*<0,05

Примечание: p – уровень значимости различий результатов между группой сравнения и группой больных раком легкого до лечения; р* – уровень значимости различий результатов между группой сравнения и группой больных раком легкого после химиотерапии.

противоопухолевые препараты повреждают эпителиальную ткань [2], обладающую повышенной пролиферативной реакцией на повреждающие факторы.

Длительное воздействие повреждающих факторов приводит к значительным структурным изменениям слизистой оболочки, сущность которых сводится к нарушениям фаз клеточного обновления и замещению нормальных эпителиоцитов функционально неполноценными. Снижается способность БЭ к адгезивным взаимодействиям с микроорганизмами, постоянно находящимися в полости рта, что приводит к их накоплению. Нарушение регенерации клеток плоского эпителия ведет к угнетению сборки sIgА и синтеза его секреторного компонента. Длительное антигенное раздражение служит пусковым моментом для включения интенсивного синтеза IgG при подавлении пролиферации клона IgA-продуцирующих клеток. Угнетение процес- сов регенерации слизистой оболочки полости рта больных раком легкого, усиление деструктивных процессов ведут к нарушению барьерных свойств эпителиального пласта.