Diagnosis of limbal stem cells deficiency in eyes with total vascular bellams by impression cytology

По данным отечественных авторов удельный вес патологии роговицы среди слепых и слабовидящих людей находится в диапазоне от 4 до 5%, что коррелирует с данными ВОЗ [1; 2].

В последние десятилетия установлено, что одной из причин сосудистого помутнения роговицы является гибель стволовых клеток роговичного эпителия, которая получила название лимбальная недостаточность (ЛН) [3–5].

Основными причинами возникновения ЛН на глазах с сосудистыми бельмами являются ожоги, травмы, хроническое воспаление, процессы рубцевания, нарушения увлажнения глазной поверхности, излишняя хирургическая активность в лимбальной зоне и т.п. [6].

На международном роговичном обществе в 2012 г. предложили определение ЛН. ЛН — это заболевание глазной поверхности, вызванное снижением популяции и/или функции лимбальных стволовых клеток, приводящим к нарушению процессов репарации эпителия роговицы. Данное состояние характеризуется развитием конъюнктивализации роговицы и/или наличием других признаков эпителиальной дисфункции, таких как персистирующие или рецидивирующие эрозии роговицы с неоваскуляризацией или без нее, воспаление и рубцевание глазной поверхности [7].

Ответ на вопрос о фенотипе эпителия, покрывающего бельмо роговицы, могут дать морфологические методы исследования [8; 9]. В связи со своей доступностью, простотой и экономичностью в нашей клинике широкое распространение получил метод импрессионной цитологии (ИЦ), известный еще с исследований Egbert P.R. с соавт. (1977), как минимально агрессивный метод изучения поверхностного эпителия роговицы и конъюнктивы [10–12].

Данная работа посвящена изучению возможности ИЦ в морфологической диагностике ЛН и зрительной реабилитации пациентов с тотальными сосудистыми бельмами роговицы.

Цель исследования. Дать оценку информативности метода ИЦ в диагностике лимбальной недостаточности на глазах с сосудистыми бельмами роговицы.

Материалы и методы

Под наблюдением находилось 35 пациентов (35 глаза) в возрасте от 25 до 80 лет с тотальными сосудистыми бельмами роговицы.

Причинами формирования сосудистых бельм на глазах были: эндотелиально-эпителиальная дистрофия (ЭЭД) в IV стадии (n = 10); рецидивирующий метагер-петический кератит (n = 5); рецидив бельма после традиционной оптической сквозной кератопластики (n = 10); тяжелые химические ожоги (n = 10).

Чурашов С.В., Злобин И.А., Черныш В.Ф., Малафеева А.Ю. ДИАГНОСТИКА ЛИМБАЛЬНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ НА ГЛАЗАХ С ТОТАЛЬНЫМИ СОСУДИСТЫМИ БЕЛЬМАМИ МЕТОДОМ ИМПРЕССИОННОЙ ЦИТОЛОГИИ

Всем пациентам было выполнено рутинное офтальмологическое обследование с обязательным измерением суммарной слезопродукции и исследованием времени разрыва прероговичной слезной пленки.

Для определения фенотипа эпителия поверхности бельм применяли усовершенствованный метод ИЦ. [13] Забор клеточного материала осуществляли как с поверхности бельма роговицы, так и с назальной части бульбарной конъюнктивы, в месте наиболее плотной концентрации бокаловидных клеток (БК) [14].

Забор клеточного материала выполняли с помощью ацетатцеллюлозного диска «Mce membrane» 0,45 µm диаметром 8 мм. Предварительно выполнялась эпибуль-барная анестезия 0,4% раствором инокаина. Экспозиция аппликации — 10 с.

Фиксацию материала осуществляли в 96% этиловом спирте с последующем окрашиванием гематоксилином и альциановым синим. С помощью световой микроскопии определяли наличие в препарате БК. Наличие таковых в микропрепаратах эпителия бельма, а также в составе эпителия конъюнктивы свидетельствовало о фенотипе поверхностного эпителия бельма роговицы.

Для морфологического подтверждения достоверности метода ИЦ эпителий трепанированного при сквозной кератопластике (СКП) диска сосудистого бельма или удаленного в ходе поверхностной кератотомии фиброваскулярного паннуса роговицы проводили гистологическое исследование. Приготовление гистологических препаратов выполняли по стандартной методике. Для выявления мукополисахаридов как маркера бокаловидных клеток в эпителии роговицы (трансплантата) проводили ШИК-реакцию.

Результаты

По результатам ИЦ пациенты были разделены на 3 группы:

Группа «А» — 23 пациентов, у которых БК в эпителии бельма не были обнаружены, но они были выявлены в назальной части бульбарной конъюнктивы.

Группа «Б» — 9 пациентов с наличием БК как в эпителии бельма роговицы, так и назальной части бульбарной конъюнктивы.

Группа «В» — 3 пациента, у которых БК не были выявлены ни в эпителии бельма роговицы, ни в назальной части бульбарной конъюнктивы.

Также при гистологическом исследование эпителия роговичных дисков, иссеченных при СКП у всех пациентов группы «А», бокаловидных клеток в его составе также обнаружено не было. У пациентов группы «Б» в эпителии иссеченного в ходе лимбальной трансплантации и поверхностной кератэктомии фиброваскулярного паннуса роговицы, по данным гистологического исследования, в составе цилиндрического эпителия были обнаружены БК. Группа «В» была исключена из исследования, поскольку у пациентов данной группы был выявлен синдром сухого глаза средней тяжести по классификации Е.Е. Сомова

(2008), были даны рекомендации по дальнейшему лечению, а пациенты взяты под наблюдение.

Усовершенствованная методика ИЦ при проведении морфологического, визуально-количественного анализа позволяет определить морфологический статус эпителия роговичного бельма и по его характеру разделить пациентов на три группы. Оказалось, что из 35 глаз с сосудистыми бельмами роговицы роговичный фенотип имел место на 23 (65%) глазах.

Случаи с конъюнктивальным эпителием составили 9 (25%) глаз. Данные ИЦ во всех случаях были подтверждены как при цитологическом исследовании назальной части бульбарной конъюнктивы у пациентов групп «А» и «Б», так и при гистологическом исследовании эпителия роговичных дисков, иссеченных из бельм при сквозной кератопластике, и эпителия фиброваскулярного паннуса, удаленного при лимбальной трансплантации (ЛТ) в ходе поверхностной кератэктомии.

Случаи, в которых по данным ИЦ фенотип эпителия установить не удалось составили 3 (10%) глаз.

Результаты ИЦ являются основанием для разделения пациентов по показаниям к выполнению СКП (на глазах с роговичным эпителием бельма) или ЛТ (при бельмах с эпителием конъюнктивального фенотипа). Проведенное пациентам оперативное лечение подтвердило правильность выделения этих групп.

Полученные данные подтвердили возможность исследования характера эпителия на глазах с сосудистыми бельмами с помощью ИЦ при решении вопроса о показаниях к оптическо-реконструктивным операциям на глазах с тотальными сосудистыми бельмами.

Выводы

• 1.    ИЦ является доступной и достаточно точной методикой диагностики, позволяющей производить оценку фенотипа эпителия, покрывающего роговицу.

• 2.    Результаты ИЦ позволяют разделять пациентов по показаниям к выполнению СКП (на глазах с роговичным эпителием бельма) или ЛТ (при бельмах с эпителием конъюнктивального фенотипа).

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов (The authors declare no conflict of interest).

ДИАГНОСТИКА ЛИМБАЛЬНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ НА ГЛАЗАХ С ТОТАЛЬНЫМИ СОСУДИСТЫМИ БЕЛЬМАМИ МЕТОДОМ ИМПРЕССИОННОЙ ЦИТОЛОГИИ