Characterization of CD82/KAI1 expression in tumor and stromal cells of tongue squamous cell carcinoma

Ежегодно в мире от рака ротовой полости умирают 145 тыс. больных [7]. Плоскоклеточный рак языка составляет 25–40 % наблюдений рака ротовой полости и является наиболее частой его локализацией [3].

Белки семейства тетраспанинов вовлечены в процессы клеточной пролиферации, движения, сигнального взаимодействия, регуляцию функций иммунной системы [14]. Изменение экспрессии тетраспанина KAI-1/CD82 в опухолевых клетках связано с прогрессированием рака различных локализаций [2, 10], однако, несмотря на многочисленные исследования, касающиеся экспрессии и функции тетраспанинов в опухолевых клетках, экспрессия и функция тетраспанинов в иммунных клетках остается недостаточно изученной [4].

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Оценить экспрессию KAI-1/CD82 в клетках паренхимы и стромы плоскоклеточного рака языка.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Нами было изучено 81 наблюдение плоскоклеточного рака языка без предшествующей противоопухолевой терапии, полученное в радиологическом отделении Медицинского радиологического научного центра им. А. Ф. Цы-ба, в период с 1990 по 2019 г. Материал 54 наблюдений (67 %) принадлежал лицам мужского пола и 27 наблюдений (33 %) – женщинам. Средний возраст мужчин составил (57,7 ± 9,3) г., средний возраст женщин – (59,4 ± 13,4) г.

Количество наблюдений плоскоклеточного рака языка, в зависимости от степени дифференцировки опухоли, составило: высокодифференцированный – 30, умереннодифференцированный – 39, низкодифференцированный – 12. Количество наблюдений, в зависимости от стадии опухоли, составило: Т1 – 13, Т2 – 33, Т3 – 31, Т4 – 4. Для статистической обработки все наблюдения были разделены на две группы – с регионарными метастазами (n = 45) и без метастазов (n = 36). Операционно-биопсийный материал фиксировали и подвергали гистологической проводке согласно общепринятым методикам.

С помощью иммуногистохимического метода в клетках паренхимы и стромы опухоли проведена оценка экспрессии KAI-1/CD82 (клон EP 160, «Epitomics», разведение 1:200). Для общей характеристики экспрессии в зависимости от количества опухолевых клеток, экспрессирующих KAI-1/CD82, наблюдениям присвоены следующие баллы: <10 % клеток с экспрессией KAI-1/CD82 – 1 балл, 10–50 % – 2 балла, >50 % – 3 балла. В зависимости от количества клеток стромы, экспрессирующих KAI-1/CD82, наблюдениям присвоены следующие баллы: с низким содержанием KAI-1/CD82 клеток стромы (0–10 %) – 1 балл, умеренным содержанием KAI-1/CD82 клеток стромы (11–54 %) – 2 балла, высоким содержанием KAI-1/CD82 клеток стро- мы (55–100 %) – 3 балла. Для межгруппового сравнения площади занимаемой KAI-1/CD82 позитивными клетками опухоли и стромы с помощью программы Image J 1.4.3.67 провели подсчет изучаемых клеток в «горячих точках» – участках с самой высокой в количественном отношении экспрессией. Учитывая, что выборки являлись независимыми, для сравнительного межгруппового анализа применяли U-критерий Манна – Уитни. Для определения связи между клетками опухоли и стромы применялся корреляционный анализ по методу Спирмена. При значении коэффициента корреляции:

• 1)    при r = ±0,7–1,0 связь считалась сильной;

• 2)    при r = ±0,3–0,699 связь считалась умеренной;

• 3)    при r = 0–0,299 связь считалась слабой;

Уровень значимости α для всех вычислений принимали равным 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯИ ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Характеристика экспрессии KAI-1/CD82 клетками паренхимы и стромы плоскоклеточного рака языка в группе без регионарных метастазов показана в табл. 1. Характеристика экспрессии KAI-1/CD82 клетками паренхимы и стромы плоскоклеточного рака языка в группе с регионарными метастазами показана в табл. 2.

Таблица 1

Клетки	Баллы
	1	2	3
Клетки опухоли (количество наблюдений)	34	2	0
Клетки стромы (количество наблюдений)	27	6	3

Таблица 2

Клетки	Баллы
	1	2	3
Клетки опухоли (количество наблюдений)	38	6	1
Клетки стромы (количество наблюдений)	26	12	7

Характеристика экспрессии KAI-1/CD82 клетками паренхимы и стромы плоскоклеточного рака языка в группе без регионарных метастазов

Характеристика экспрессии KAI-1/CD82 клетками паренхимы и стромы плоскоклеточного рака языка в группе с регионарными метастазами

Таким образом, в 34 (94 %) из 36 наблюдений рака языка без регионарных метастазов количество опухолевых клеток с экспрессией KAI-1/CD82 можно расценить как низкое (<10 %, рис. 1). В 27 (75 %) из 36 наблюдений этой же группы количество клеток стромы с экспрессией KAI-1/CD82 также можно расценить как низкое (0– 10 %, рис. 2). При раке языка с регионарными ме- тастазами количество опухолевых клеток и клеток стромы с аналогичной низкой экспрессией составило 84 % (38 из 45 наблюдений) и 58 % (26 из 45 наблюдений) соответственно. Показатели центральной тенденции распределения площади KAI-1/CD82 позитивных клеток паренхимы и стромы плоскоклеточного рака языка в «горячих точках» изучаемых групп приведены в табл. 3.

Рис. 1. Низкая экспрессия KAI-1/CD82 опухолевыми клетками плоскоклеточного рака языка; ув. х400 (окуляр х10, объектив х40)

Рис. 2. Низкая экспрессия KAI-1/CD82 клетками стромы плоскоклеточного рака языка; ув. х400 (окуляр х10, объектив х 40)

Таблица 3

Показатели центральной тенденции распределения KAI-1/CD82 клеток паренхимы и стромы плоскоклеточного рака языка

Клетки	Нижний квартиль	Медиана	Верхний квартиль
KAI-1/CD82 паренхима опухоли, группа без метастазов	0	5,5	25
KAI-1/CD82 паренхима опухоли, группа с метастазами	4	17	37
KAI-1/CD82 строма опухоли, группа без метастазов	2,5	8,3	26
KAI-1/CD82 строма опухоли, группа с метастазами	9,7	20,6	46,4

Из таблицы следует, что более высокие цифры центрального распределения KAI-1/CD82 позитивных клеток паренхимы и стромы опухоли в «горячих точках» (рис. 3, рис. 4) приходятся на наблюдения с регионарными метастазами. Для сравнения пощади KAI-1/CD82 позитивных клеток опухоли и стромы в изучаемых группах после их подсчета с помощью программы Image J 1.4.3.67 проведен анализ Манна – Уитни, который не выявил значимых различий между клетками опухоли (р > 0,05), однако показал, что площадь KAI-1/CD82 пози- тивных клеток стромы при раке языка с регионарными метастазами значимо больше, чем площадь аналогичных клеток стромы в группе без метастазов (р = 0,02). Для анализа связи между KAI-1/CD82 позитивными клетками опухоли и стромы проведен корреляционный анализ, который показал умеренную положительную корреляционную связь (r = 0,42, р < 0,05) при плоскоклеточном раке языка без метастазов и умеренную положительную корреляционную связь (r = 0,35, р < 0,05) при плоскоклеточном раке языка с метастазами.

Рис. 3. Площадь KAI-1/CD82 позитивных клеток опухоли в «горячих точках» (окуляр х10, объектив х 40)

Рис. 4. Площадь KAI-1/CD82 клеток стромы в «горячих точках» (окуляр х10, объектив х 40)

Экспрессия тетраспанина KAI-1/CD82 показана практически во всех тканях [8]. В гема-поэтических клетках экспрессия KAI-1/CD82 выявлена на моноцитах, лимфоцитах, дендритных клетках [14]. Прогрессирование опухоли может происходить как при снижении экспрессии тет-распанинов (KAI-1/CD82, CD9), так при ее увеличении (CD151, Tspan8) [5]. Некоторые исследователи показали, что экспрессия KAI-1/CD82 обратно пропорциональна опухолевой прогрессии и, таким образом, может быть использована как прогностический индикатор [11]. При ра- ке ротовой полости выявлено, что снижение экспрессии KAI1/CD82 клетками опухоли сопровождалось повышением ее метастатического потенциала [9], хотя другие исследователи не получили такой связи [13]. В проведенном нами исследовании низкая экспрессия KAI-1/CD82 (<10 %) как в клетках паренхимы, так и в клетках стромы преобладала в обеих изучаемых группах. В исследуемых группах мы не выявили значимых различий при сравнении площади KAI-1/CD82 позитивных клеток опухоли (р > 0,05), но показали, что площадь KAI-1/CD82 позитивных клеток стромы при раке языка с регионарными метастазами значимо больше, чем площадь аналогичных клеток стромы в группе без метастазов (р = 0,02). Исследования, проведенные на лейкоцитах, выявили важные иммунологические функции тетраспанинов и показали, что они могут быть вовлечены в противоопухолевый иммунный ответ, хотя влияние тетраспани-нов в иммунных клетках в противоопухолевом ответе остается недостаточно изученным [4]. Показано, что тетраспанины способны взаимодействовать с белками своего семейства, формируя «тетраспаниновую сеть» [12]. Кроме того, эти белки являются модуляторами сигнальной трансдукции, обеспечивая организацию мембранных доменов через взаимодействие с другими белками, включая интегрины, рецепторы на иммунных клетках [6]. Иммунологическая значимость этих взаимодействий была продемонстрирована на тетраспанин-дефицитных мышах (CD37, CD53, CD81, CD82, Tssc6, CD151), которые имели дефекты гуморального и/или клеточного иммунного ответа [11]. В нашем исследовании с помощью корреляционного анализа показана умеренная положительная связь между KAI-1/CD82 позитивными опухолевыми клетками и аналогичными клетками стромы, следовательно, при увеличении количества KAI-1/CD82 позитивных опухолевых клеток, количество KAI-1/CD82 позитивных клеток стромы также увеличивается, а при уменьшении, соответственно – уменьшается. В то же время, в связи с взаимодействием между клетками паренхимы опухоли и ее стромы, данную связь можно рассмотреть иначе: при увеличении количества KAI-1/CD82 позитивных клеток стромы количество KAI-1/CD82 позитивных опухолевых клеток возрастает, а при уменьшении – уменьшается. Учитывая, что опухолевое микроокружение является существенным компонентом опухоли, показанная связь может являться отражением взаимного паракринного влияния клеток опухолевого микроокружения и опухолевых клеток и свидетельствует о важности дальнейшего детального исследования этого взаимодействия.