Effect of a liquid with a negative redox potential on the indicators of blood and humoral immunity after resection thin gut

Анализ научной литературы свидетельствует о том, что для обеспечения состоятельности кишечного шва необходимо использовать не только совершенную хирургическую технику, но и воздействия, обеспечивающие защиту от микробной агрессии и обладающих свойствами активировать репаративную регенерацю. Такие свойства имеет жидкость с отрицательным (-500-550 мВ) ОВП — католит, обладающий, антиоксидантным действием и стимулирующий процессы репаративной регенерации, в то время как жидкость с положительным (+680 — +720 мВ) ОВП — анолит, оказывает выраженное антимикробное действие [1; 2]. Известно (Колесниченко П.Д.), что при приеме внутрь анолита и католита отрицательного воздействия на слизистые оболочки полости рта, желудка, кишечника, печени и поджелудочной железы не происходит. [3; 4], Безвредность этих растворов для живого организма была доказана Брездынюк А.Д., (2009 и др.) [5]. В ряде работ, например, Девятов В.А., 2001 [8], Резников К.М. 2012 [1], Гайдарова А.П., 2012 [6], Расчипеев Д.А. и др., 2014 [7] и др. доказаны лечебные свойства анолита и католита. Указанные экспериментальные и клинические разработки свидетельствуют о возможности применения жидкостей с различным ОВП для обоснования возможности их использования с целью совершенствования подходов к повышению эффективности операционного вмешательства на кишечнике.

Цель исследования : выявить изменения показателей крови и гуморального иммунитета у крыс в послеопе-рацинном периоде на кишечнике после использования католита и анолита.

Материалы и методы

Содержание животных осуществлялось в соответствии со стандартом ГОСТ 33216-2014, от 9.11.2015 г. Животные содержались в обычных условиях вивария на стандартном рационе по 5 особей в клетке при естественном освещении и со свободным доступом к воде и пище. Проведение экспериментов проводилось с учетом требований комиссии по проблемам этики отношения к лабораторным животным Российского национального Комитета по биоэтике наук и этическими нормами «Международных рекомендаций по проведению медикобиологических исследований с использованием животных» (1989 г.). Все манипуляции в ходе содержания и постановки эксперимента проводили в соответствии с биоэтическими принципами, изложенными в «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов и других научных целей» (Страсбург, 2005) и в соответствии с Национальным

Желудев А.А., Пархисенко Ю.А.

ВЛИЯНИЕ ЖИДКОСТИ С ОТРИЦАТЕЛЬНЫМ РЕДОКС-ПОТЕНЦИАЛОМ НА ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПОСЛЕ РЕЗЕКЦИИ ТОНКОЙ КИШКИ стандартом РФ «Принципы надлежащей лабораторной практики» (ГОСТ Р 53434-2009 — идентичен GLP OECD).

Биохимические исследования проводились на биохимическом полуавтоматическом анализаторе Stat Fax 1904 (США), с применением наборов реактивов фирмы «DiaSys» (Германия), на базе НИИ экспериментальной биологии и медицины ВГМУ им. Н.Н. Бурденко).

При проведении экспериментальной работы было использовано 45 крыс — самцов, массой 290–320 г, распределенных на три группы:

• •    1-я группа контрольные животные — 15 крыс, операция которым не проводилась.

• •    2-я группа животных — 15 крыс, которым была проведена операция на кишечнике, без применения католита.

• •    3-я группа — 15 крыс, прооперированные животные, которым с лечебной целью назначался католит.

Проведение хирургического вмешательства: животным перед операцией подкожно водили цефтриаксон 0,002, а для наркоза — внутрибрюшинно применяли золетил 0,04 на 300 г/массы. Передняя брюшная стенка двухкратно обрабатывалась антисептиком аналитом, затем серединная лапаротомия, извлекался участок тонкой кишки, который резицировали на протяжении 1–2 см. Затем формировался кишечный анастомоз «конец в конец» по Альберту-Ламберу. При формировании первого ряда швов использовался викрил 7/0, второй ряд швов применялся полипропилен 7/0, а затем брюшная стенка ушивалась непрерывно обвивным брюшинно-апоневротическим, а затем и кожными швами. Брюшина и зона операции обрабатывалась анолитом.

Биологический материал извлекали на 5 и 15 сутки: венозную кровь помещали в пробирки Vacuette», «Greiner bio-one» (Австрия). Фрагменты стенки тонкой кишки помещали в нейтральный 10% формалин3 с последующим изготовлением парафиновых срезов и их окраской гематоксилин-эозином и по Ван-Гизон.

Католит- электроактивированный раствор с отрицательным ОВП (-500-550 мВ) и анолит электроактивиро-ванный раствор с положительным ОВП (+680 — +720 мВ) получали с помощью сертифицированного электролизера «Карат».

Статистическая обработка данных проводилась с помощью пакета программ Ехсеl 2007, Statistica 7.0, с использованием параметрических (по Стьюденту) и непа-раметрческих (критерий Т- Вилькоксона) [9] подходов.

Результаты исследования и их обсуждение

Полученные результаты, общего анализа крови во всех группах эксперимента, представлены в таблице 1.

При введении католита уровень гемоглобина на 5-е сутки увеличился в 1,2 раза по сравнению с животными 2-й группы. Уровень лейкоцитов во 2 группе был снижен на 37,5% (в 1,6 раза) по сравнению с 1 группой. Уровень лимфоцитов у крыс группы 2 снизился на 28% на 15 сутки по сравнению с 1 группой и в 3 группе на 5 сутки уровень лимфоцитов снизился на 23% по сравнению с 1 группой. Использование католита в 3 группе на 15-е сутки привел

Табл. 1. Показатели общего анализа крови (M± m , n = 45) при медикаментозной коррекции процесса заживления кишечного анастомоза

Показатели	2 группа			3 группа
	1 группа	5 сутки	15 сутки	5 сутки	15 сутки
Эритроциты 10*11/л	5,9±0,4	4,9 ±0,9	5,8±0,5	5,7±1	5, 4±0,4
Гемоглобин г/л	124±7,1	109,5±7,9	129,3±7	131±10,7#	134±3,9
Лейкоциты 10*9/л	10,4±1,9	7,7±4,3*	10,5±2,9	7,6±1,5*	7,1±0,8*#
Палочкоядерные %	1,1±0,6	1,8±0,8	3,3±1,6	1±1,01	1,43±0,4
Сегментоядерные %	29,5±4,9	34,6±12,1	41,7±7,49	39,4±8,37	32,1±3,8*
Лимфоциты %	67,8±2,9	59,4±10,62	48,9±18,7*	52,1±8,5*	62,4±4,5#
СОЭ мм/час.	1, 25±0,49	2,7±1,05*	2,6±1,4*	1,75±0,32#	1,7±0,4#

Примечание : * — Р<0,05 по сравнению с 1 группой; # — Р<0,05 по сравнении с 2-й группой.

к увеличению количества лимфоцитов по сравнению со 2 группой на 27%. Значения СОЭ во 2 группе на 5-е сутки увеличилось в 2,5 раза, а на 15-е сутки во 2 группе в 2,3 раза по сравнению с животными 1 группы. В 3 опытной группе на 5-е сутки наблюдается снижение уровня СОЭ на 57% по сравнению с соответствующим показателем 2-й группы и снижение на 15 сутки в 3-й группе на 55% по сравнению с изменениями у животных 2-й, группы, соответственно.

Эти материалы свидетельствуют о том, что наибольшее снижение величины показателей, характеризующих воспаление, отмечается при применении католита в послеоперационном периоде.

В таблицах 2, 3 представлены характеристики иммунитета при формировании анастомоза кишечника без и с использованием католита.

Было выявлено, что на 5-е сутки у животных 2-й группы фагоцитарный индекс уменьшился в 13,7 раза, тогда как уровень фагоцитарной активности увеличился в 4,1 раза, а на 15 сутки у животных этой группы, фагоцитарный индекса возрастает по сравнению с 1 группой в 1,3 раза, а фагоцитарная активность увеличилась в 56 раз. В третьей группе на 5-е сутки фагоцитарный индекс уменьшается в 42 раза по сравнению с первой группой при использовании католита в послеоперационном периоде, а фагоцитарная активность увеличивается по сравнению с 1 группой в 12,3 раза, тогда как, на 15 сутки в этой группе уровень фагоцитарного индекса уменьшается в 2,6 раза, в то время как фагоцитарная активность в этот срок, увеличивается в 14,5 раз.

При сравнении показателей иммунитета животных 3-й группы со 2-й группой на 5-е сутки фагоцитарный индекс уменьшается в 3,1 раза, а фагоцитарная активность увеличивается в 3 раза. На 15-е сутки у животных 3-й группы фагоцитарный индекс уменьшается в 2,6 раза и фагоцитарная активность — в 3,8 раза, по сравнению с животными 2-й группы.

Участие гуморальной системы в формировании саногенетических звеньев заживления после операцион-

Желудев А.А., Пархисенко Ю.А.

ВЛИЯНИЕ ЖИДКОСТИ С ОТРИЦАТЕЛЬНЫМ РЕДОКС-ПОТЕНЦИАЛОМ НА ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПОСЛЕ РЕЗЕКЦИИ ТОНКОЙ КИШКИ

Табл. 2. Изменение показателей фагоцитарной активности (M± m , n = 45) при медикаментозной коррекции процесса заживления кишечного анастомоза

Показатели	1 группа (n = 15)	2 группа (n = 15)		3 группа (n = 15)
		5 сут.	15 сут.	5 сут.	15 сут.
фагоцитарный индекс	58,8±10,6	33,1±13,2*	49,6±11,4*#	9,7±10,3*#	17,8±12,8*#
фагоцитарная активность	8,1±1,8	5,5±1,2	7,4±2,8	1,4±0,3*#	2,5±1,7*#

Примечание : * — Р<0,05 по сравнению с контролем; # — Р<0,05 по сравнении с 2-й группой.

Табл. 3. Показателей гуморального иммунитета (M± m , n = 45) при медикаментозной коррекции заживления кишечного анастомоза

Показатели мг/дл	1 группа (n = 15)	2 группа (n = 15)		3 группа (n = 15)
		5 сут.	15 сут.	5 сут.	15 сут.
Ig G	40,2±0,8	99,3±2,9*	66,67±7,2*	55±7,4*#	83±4,3*#
IgA	13,5±0,5	8±0,7 *	10,33±1,4 *	8,67±1,4 *	4,67±2,9*#
IgM	3,2±0,1	20± 4,8*	22,67±5,6*	9±2,5*#	30±4,9 *

Примечание : * — Р<0,05 по сравнению с животными 1 группы; # — Р<0,05 по сравнению с животными 2-й группы.

ного анастомоза тонкой кишки можно проанализировать по таблице 3.

Изменения IgG у животных контрольной группы остаются высокими: на 5-е сутки в 3 — 1,7 раза и на 15-е сутки — в 1,4 раза. В группе животных, получавших католит после операции, уровень IgG также оставался на высоком уровне: на 5-е сутки он был в 1,4 раза выше, а на 15-е сутки в 2,1 раза выше, чем в контрольной группе животных.

Уровень IgA в контрольной группе животных снизился на 1,7 на 5-е сутки и в 1,3 раза — на 15-е сутки. В группе животных, получавших католит, также в послеоперационном периоде произошло снижение в 2,2 раза на 15 сутки.

Во 2-й группе животных уровень IgM увеличился в 6,2 раза на 5-е сутки и в 7 раз — на 15-е сутки по сравнению со здоровыми животными. В группе животных, получавших католит, индекс IgM увеличился в 3 раза на 5-е сутки и в 9,3 раза — на 15-е сутки по сравнению с контрольной группой.

Таким образом, католит, оказывает позитивное влияние на показатели иммунитета на протяжении всего послеоперационного периода. Анализ изменений всех изученных показателей даёт возможность рекомендовать применение католита и анолита при проведении операций на кишечнике.

Выводы

• 1.    Католит положительно влияет в послеоперационном периоде на показатели иммунитета после резекции тонкой кишки.

• 2.    В послеоперационном периоде применение католита стимулирует фагоцитарную активность и предотвращает появление признаков несостоятельности кишечного шва.

• 3.    Использование в качестве антисептика анолита в до и послеоперационном периоде приводит к снижению процессов воспаления в зоне анастомоза.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов (The authors declare no conflict of interest).

(In Russ).]