10-10М GP-Sh2 - модификатор МЛУ in vitro, in vivo

В химиотерапии рака, наиболее типичный фенотип множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) связан с повышенной активностью трансмембранного транспортного белка P-гликопротеина (Pgp), выводящего противоопухолевые препараты из резистентной клетки. Ранее нами из ауксотрофного штамма дрожжей семейства Saccharomyces был выделен водорастворимый гликопротеин с молекулярной массой около 160 кДа, названный GP-Sh2. Препарат GP-Sh2 обладает свойствами блокатора кальциевых каналов и иммуномодулятора с противоопухолевым действием (Ибрагимов А.А. и др., 1998–2009). In vitro, GP-Sh2: в концентрации 10-11М преодолевает МЛУ (посредством ингибирования Р-гликопротеина/Pdr5p, активации ДНК-РК и PTEN) и повышает до 70% эффект противоопухолевых антибиотиков при повторном их применении на модели клеток штамма XII7 Saccharomyces cerevisiae, резистентных к винкристину, доксорубицину, метотрексату или этопозиду; в концентрации 10µM на мышиных позитивных клетках линии лейкоза ML-1/DOX наблюдается повышение экспрессии проте-инкиназы АТМAb-1 на 70% и экспрессия белка опухолевого супрессора pp53Ser-15 на 50% выше, чем в контроле. In vivo GP-Sh2 в дозе 25мкг/кг на мышах с прививной опухолью молочной железы (Adenocarcinoma-755) подавляет рост опухолей на 75%, стимулирует гемопоэз, при отсутствии его токсичности. В клинике GP-Sh2 был успешно применен перорально в дозе 220 мкг/60кг, через день 7-кратно на добровольцах, инкурабельных больных раком молочной железы. Клинические испытания показали, что GP-Sh2 не обладает токсичностью и кумулятивным эффектом, и он способствует заметной нормализации работы сердечно-сосудистой системы, кровяного давления, формулы крови и иммунологического статуса, снижению болевых синдромов; повышению аппетита; заметному повышению терапевтического эффекта на опухоль химиотерапии; улучшению и продлению качества жизни онкологических больных. Известно, что блокатор кальциевых каналов верапамил понижает активность Pgp in vitro, но в клинике для преодоления МЛУ, в плазме крови требуется его концентрация 2-6µM, которая вызывает кардиотоксичность, (Borges M.I., 2003).

Цель исследования – сравнительный анализ влияния различных концентраций GP-Sh2 и верапамила на гипотензивный эффект.

Материал и методы. В работе использовали ³Н-нитрендипин, ³Н-верапамил, Fura-2M и т.д. Методы C. Bellucci (1989) на отрезках аорты и O. Chude O. (1979) на синаптосомах мозга белых беспородных крыс.

Результаты. Показано, что GP-Sh2 не вызывал сократительной активности отрезков аорты, но в концентрациях 10^-10-10^-9М, подобно верапамилу и нифедипину отменял сократительную активность препаратов аорты, индуцированную гиперкалиевыми растворами. При этом верапамил и нифедипин действовали в концентрациях 10^-7-10^-6М. С целью дальнейшего изучения механизма сосудорасслабляющего действия GP-Sh2 он был исследован в экспериментах по связыванию радиоактивно меченых ³Н-верапамила и ³Н-нифедипина с синаптическими мембранами из мозга крыс. Было показано, что GP-Sh2 конкурирует с верапамилом за его связывающий сайт с K_dis ≈ 3х10^-11M и конкурирует с нитрендипином за его связывающий сайт с K_dis ≈ 3х10^-10M. При этом константы сродства верапамила и нифедипина к их связывающим сайтам были около 3х10^-8М.

Выводы. Гипотензивное действие GP-Sh2 можно объяснить, его способностью блокировать подобно верапамилу и нифедипину, потенциал-чувствительные кальциевые каналы. GP-Sh2 позитивно влияет на сердечнососудистую систему; на повышение терапевтического эффекта химиотерапии посредством модификации активности транспортера Pgp/ МЛУ клеток опухоли у онкологических больных по сравнению с верапамилом и его аналогами нарушающими фармакинетику химиотерапии рака.

СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2009. Приложение № 2