Активация Р-450-зависимых монооксигеназ изменяет иммунотоксичность фосфорорганических соединений в зависимости от характера их метаболизма

Тел.: (845-2) 22-76-25, сот. 8(905)3232751,

E-mail: pz@renet. com. ru также бензпиренгидроксилаза, этоксирезоруфин-О-деэтилаза, аминопирин-н-деметилаза [5].

Данные литературы позволяют полагать, что под влиянием индукторов МС токсичные химические вещества (ТХВ), не метаболирующиеся по типу «летального синтеза» (а это большинство токсикантов), могут ослаблять их иммунотоксические эффекты, в то же время, образование более токсичных продуктов в процессе биотрансформации, может приводить к обратному эффекту [3, 4].

Целью исследования являлось изучение влияния индукторов Р-450-зависимых монооксигеназ (фенобарбитала, бензонала) на иммунотоксические свойства метаболитов фосфорорганических соединений – хлорофоса и диметилдихлорвинилфосфата (ДДВФ), которые метаболизируются до более (хлорофос) и менее (диметилдихлорвинилфосфата (ДДВФ) токсичных веществ.

Методы. Опыты проводили на неинбредных крысах обоих полов массой 180-250 г. В течение трех суток до острой интоксикации ФОС животным вну- трижелудочно вводили индукторы микросомальных энзимов печени фенобарбитал (ФБ) или бензонал (БЗ) в дозах 50 и 70 мг/кг соответственно. После введения хлорофоса и ДДВФ подкожно в дозе 1,0 DL50, которая для данных токсикантов составляла соответственно 430+27,2 и 64,5+2,3 мг/кг, показатели системы иммунитета оценивали общепринятыми методами в экспериментальной иммунотоксикологии [3]. Гуморальную иммунную реакцию к тимусзависимому (эритроцитам барана — ЭБ) и тимуснезависимому (брюшнотифозному Vi-антигену — Vi-Ag) антигенам оценивали через 5 суток по числу АОК в селезенке после острой интоксикации ТХВ с одновременной внутрибрюшинной иммунизацией крыс данными антигенами в дозах 2·108 клеток и 8 мкг/кг соответственно. В использованном тесте гуморальная иммунная реакция на введение ЭБ характеризует способность Т-хелперов типа 1 (Th1) участвовать в продукции В-лимфоцитами (плазматическими клетками) IgM, а гуморальный иммунный ответ на Vi-Ag отражает активность синтеза этими клетками IgM без участия Th1 [3]. Активность естественных клеток-киллеров (ЕКК) определяли по показателю естественной цитотоксичности (ЕЦ) через 48 ч после острого отравления ФОС спектрофотометрически. Функцию К-клеток оценивали по показателю антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ) через 5 суток после иммунизации крыс 108 ЭБ, используя их спленоци-ты, спектрофотометрическим методом. Формирование гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) определяли у животных по приросту массы стопы задней лапы (в %). При этом крыс внутрибрюшинно иммунизировали 108 ЭБ через 30 мин после введения ТХВ. Разрешающую дозу ЭБ (5·108) вводили под апоневроз стопы задней лапы через 4 суток Реакцию ГЗТ определяли через 24 ч.

Ферментиндуцирующие свойства ФБ и БЗ оценивали по длительности сна, вызванного гексобарбита-лом в дозе 80 мг/кг. По методикам, описанным [7, 8], в микросомальной фракции печени определяли содержание белка и цитохромов Р-450 и b-5 через 3 суток после применения индукторов МС.

Полученные данные обрабатывали статистически с использованием t-критерия достоверности Стьюдента.

Результаты. Применение ФБ (табл. 1) приводило к несущественному увеличению гуморального иммунного ответа к Т-зависимому и Т-независимому антигенам, АЗКЦ и реакции ГЗТ соответственно в 1,26; 1,20; 1,25 и 1,17 раза (p>0,05), а после использования БЗ – соответственно в 1,24; 1,16; 1,31 и 1,22 раза (p>0,05). Под влиянием ФБ и БЗ активность ЕКК повышалась соответственно в 1,24 и 1,36 раза (p<0,05). Иммуностимулирующие эффекты ФБ и БЗ практически не отличались.

Острая интоксикация ДДВФ вызывала снижение Т-зависимого, Т-независимомого ответа гуморальной иммунной реакции, ЕЦ, АЗКЦ и реакции ГЗТ соответственно в 1,77; 1,38; 1,71; 1,69 и 1,98 раза (p<0,05), а хлорофосом соответственно в 2,10; 1,75; 1,49; 1,59 и 2,07 раза (p<0,05).

После действия ФОС с различным характером метаболизма (хлорофос и ДДВФ) после трехдневного введения ФБ и БЗ вызывали статистически значимую редукцию показателей системы иммунитета по сравнению с контролем и параметрами иммунного статуса только после интоксикации ТХВ без применения индукторов МС (p<0,05). При этом хлорофос, метаболизирующийся до более токсичного ДДВФ [6], после применения ФБ вызывал супрессию антитело-продукции (к Т-зависимому и Т-независимому антигенам), активности ЕКК, уменьшение АЗКЦ и функции Th1-лимфоцитов (реакции ГЗТ) соответственно в 3,43; 2,72; 1,82; 2,64 и 3,23 раза (p<0,05), а после использования БЗ – в 3,24; 3,19; 2,57; 2,49 и 3,71 раза (p<0,05) соответственно. Полученные данные свидетельствуют о том, что редукция параметров иммунного статуса под влиянием ферментиндуцирующих средств (ФБ и БЗ) после острой интоксикации ТХВ, в частности хлорофосом, метаболизирующимися до более токсичных соединений (феномен «летального синтеза») более выражена, чем при остром действии ДДВФ (метаболита хлорофоса) (p<0,05).

Иммунотоксичность при остром действии ДДВФ, который биотрансформируется до менее токсич-

Таблица 1

Действие острого отравления хлорофосом и ДДВФ на показатели системы иммунитета у крыс после применения индукторов монооксигеназной системы печени (M±m, n=9-12)

Серии опытов	АОК к ЭБ, 103	АОК к Vi-Ag, 103	ЕЦ,%	АЗКЦ, %	ГЗТ, %
Контроль	30,5±3,0	22,3+2,4	27,0+ 2,0	13,2+ 1,4	33,0+2,6
Фенобарбитал	38,4±3,1	26,8+2,2	33,9+ 2,5 *	16,5+1,7	38,7+2,5
Бензонал	37,9±3,2	25,9+2,8	36,8+2,7 *	17,3+1,6	40,2+3,1
ДДВФ	17,2±2,3 *	16,2±2,0 *	15,7+1,7 *	7,8±1,5 *	16,7±1,9 *
Хлорофос	14,4±2,1 *	12,6±1,4 *	18,0+1,8 *	8,4±1,3 *	16,0±1,7 *
Фенобарбитал + хлорофос	8,8±1,3 **	8,1±1,3 **	14,7+1,4 *	4,9±1,1 *	10,1±2,0 **
Бензонал + Хлорофос	9,3±1,2 **	6,9±1,5 **	10,4+1,1 **	5,5±1,0	8,8 +1,3 **
Фенобарбитал + ДДВФ	24,1±2,4	17,9±2,3	22,8+1,9	9,2±1,3	27,5±2,3
Бензонал + ДДВФ	26,7±2,6	20,0±2,1	25,5+2,2	10,5±1,4	28,0±2,7

Примечание: *p<0,05 по сравнению с контролем; **p<0,05 по сравнению с контролем и показателем после интоксикации ТХВ без применения индукторов МС.

Таблица 2

Влияние фенобарбитала и бензонала на содержание белка и цитохромов в микросомах печени крыс (M±m, n=9-12)

Показатели	Контроль	Фенобарбитал	Бензонал
Гексобарбиталовый сон, мин	21,4±2,5	5,3±1,8*	9,1±2,1*
Белок, мг/орган	54,7±6,1	145,2±14,3*	135,3±12,9*
Цитохром Р-450, нмоль/г белка	0,92±0,05*	4,41±0,43*	3,36±0,35*
Цитохром b5, нмоль/г белка	0,38±0,03	0,63±0,04*	0,78±0,07*

Примечание: *p<0,05 по сравнению с контролем.

ных или нетоксичных веществ (диметилфосфата, дихлорвинилового спирта, дихлорацетальдегида, а также дихлорэтанола, дихлоруксусной кислоты) [6] после индукции ФБ и БЗ цитохром Р-450-зависимых монооксигеназ значительно снижалась по сравнению с действием диметилдихлорвинилфосфата без применения индукторов МС и была несущественно ниже контрольных значений (p>0,05). Под влиянием ФБ и БЗ статистически значимо уменьшилось время гексе-налового сна, содержание белка и цитохромов Р-450 и b5 в печени (табл. 2), что, вероятно, обусловливает повышение показателей системы иммунитета.

Обсуждение. Увеличение показателей, характеризующих состояние иммунного статуса у животных, при назначении ФБ и БЗ, может быть обусловлено индукцией цитохром Р-450-зависимых монооксигеназ в лимфоидной ткани (иммунокомпетентных клетках - ИКК). Известно, что витамин А, левамизол, фенобарбитал и другие вещества, индуцирующие МС, способны повышать активность Т-лимфоцитов, ЕКК в результате индукции в ИКК цитохром-Р-450-зависимых монооксигеназ [4].

Цитохром Р-450-зависимые монооксигены печени и лимфоидной ткани, значительно повышая биотрансформацию хлорофоса, превращают его в более токсичный ДДВФ (феномен «летального синтеза») [2, 6], что существенно увеличивает иммунотоксичность подвергшегося биотрансформации хлорофоса.

Угнетение реакций иммунной системы ДДВФ, снижается предварительной индукцией МС, энзимы которой приводят к образованию менее ядовитых (или нетоксичных) соединений. Следует отметить, что при действии хлорофоса иммунотоксичность обусловлена как самим ФОС, так и его метаболитом ДДВФ, а при интоксикации ДДВФ супрессия иммунных реакций связана только с действием диметилдихлорвинилфосфатом (его метаболиты малотоксичны или нетоксичны) [3, 6].

Таким образом, в зависимости от характера метаболизма ФОС (образующихся при их биотрансформации продуктов) цитохром Р-450-зависимые монооксигеназы могут повышать или снижать их иммунотоксичность.

Заключение.

• 1.    Использование индукторов монооксигеназной системы фенобарбитала и бензонала перорально в течение трех суток в дозах соответственно 50 и 70 мг/кг до острого отравления животных хлорофосом, метаболизирующегося в организме до высокотоксичного соединения диметилдихлорвинилфосфата (ДДВФ), вызывает увеличение его иммунотоксических свойств.

• 2.    Применение индукторов цитохром Р-450-зависимых монооксигеназ до острой интоксикации диметилдихлорвинилфосфата (ДДВФ), который био-трансформируется в организме до малотоксичных или нетоксичных веществ, существенно уменьшают его супрессирующее действие на показатели системы иммунитета.