Алкалоиды Berberis. XXУI. Исследование

Из молодых побегов В. аmurensis Rupr., кроме ранее выделенных алкалоидов, получены берберрубин, оксиакантин, псевдопальматин и новое апорфиновое основание амуренин. На основании спектральных данных и химического превращения установлено его строение.

Berberis amurensis Rupr. относится к семейству Berberidасеае и произрастает на Дальнем Востоке. Плоды, листья и корни этого растения издавна применяются в народной медицине при лечении гипертонии, заболевании печени, а также как кровоостанавливающее средство. В научной медицине настойка листьев применяется при маточном кровотечении /I/.

Ранее из этого растения быль выделены берберин, ятроррицин, пальматин, магнофлорин, бербамин и бербамунин /2-6/.

В настоящей работе приводятся результаты исследования алкалоидов молодых побегов В. аmurensis произрастающих в окрестностях села Барабаш (Приморский край, Хасанский район). Экстракцией этанолом изолировали 0,34 % суммы алкалоидов. Хроматографированием полученной суммы на колонке с силикагелем выделили берберин, берберубин, псевдопальматин, ятрорритцин и новое основание амуренин(I)

в виде хлоридов. Из третичных суммы алкалоидов выделили оксиакантин и бербамунин. Известные алкалоиды, выделенные из этого растения, идентифицировали путем сравнения физико – химических констант, спектральных данных, а также сравнением с подлинными образцами /7/. Среди них берберрубин, оксиакантин и псевдопальматин были выделены из данного растения впервые.

Амуренин(I) – оптически активное, кристаллическое основание, обладает фенольными свойствами, дает кристаллическое 0 – ацетилпроизводное (II). В ИК – спектре I имеются полосы поглощения при 3200 см \ активный водород). 1470, 1580, 1610 см ^J ( бифенильная система) /6/. УФ – спектр I имеют максимумы при 265, 275, 305,( Ig E 4,23; 4,25; 4,16), характерные для монозамещенных апорфиновых алкалоидов в кольце D /8/.

При масс – фрагментации I, под электронным ударом, наряду с образованием ионов с m/z 326( М) 325(М-1), 309(М-15), 296 268(М-58), образуется максимальный ион с m/z 58, что характерно для четвертичных апорфинов /9/. Данные спектров ПМР I и II, снятые в CD ₃ OD и отнесение сигналов протонов приводятся в таблице.

По значению химического сдвига трехпротонный синглет в спектре ПМР I при 3,60 и однопротонный синглет при 6,82 м.д. отнесены к С₁ — ОСН₃ и СН₃- H , соответственно. Сигналы трех ароматических протонов проявляются в виде АВС – системы. Метоксильная группа при 3,82 м.д. и гидроксильная группа может находиться при С-2, С-9 или С-10. Для установления расположения гидроксильной и метоксильной группы в кольцах А и Д мы сравнительно изучали спектры ПМР I и II, а также был измерен внутримолекулярний ядерный эффект Оверхаузера (ЯЭО), для о – ацетиламуренина (II), между метоксилами ароматическими и метиленовыми протонами.

При облучении радиочастотным полем метоксила при 3,82 м.д., наблюдался ЯЭО (18%) на уширенный синглет при 6,88 м.д., которые соответствуют расположению метоксила при положении С-2 и ароматического протона при С-3. Это подтверждается также увеличением интенсивности сигнала Н-3 на 76 % при мощном облучении области метиленовых протонов 2,90-3,85 м.д за счет ЯЭО и подавления малых КССВ от Н-4-протонов. Измерение ЯЭО (2%) от второго метоксила ( 3,60 м.д ) на ароматический дублет ( 7,95 м.д.: j=I,8 Гц) показала, что второй метоксил и дублетний ароматический протон находятся при положениях С-I и C-II соответственно. Величина константы j=I.8 Гц свидетельствует о метарасположении ближайшего протона ароматической АBC- системы. Этим партнёром может быть только Н-9 протон. Сигнал этого протона представлен хорошо разрешенным дублет-дублетом при 6,96 м.д. с константами 8,5 Гц и I,8 Гц. Третий ароматический сигнал ABC системы проявляется при 7,35 м.д. с константами 8,5 Гц и I.0 Гц который соответствует Н-8 протону.

Малая константа (I,0 Гц ) Н-8 протона возникает от взаимодействия с Н-7 протонами метиленовой группы. Это подтверждается увеличением интенсивности сигнала Н-8 протона на 62% при мощном облучении области метиленовых протонов за счет подавления малой константы от Н-7 протонов и ЯЭО.

Следовательно, ацетил замещенным положением в цикле Д является С- I 0-углерод, при котором располагается гидроксильная группа а амуренине (I).

Сигналы N-метильных групп находятся при 3,00 и 3,36 м.д они представляют собой два слабоуширенных синглета.

Смещение в слабое поле сигналов ароматический протонов в цикле Д при переходе от спектра I к II также соответствует вышеописанному расположению заместителей. Для дублетов при 7,72; 7,11; 6,65 м.д. сдвиг в слабое поле равен 0,23; 0,24 и 0,31 м.д соответственно, а для синглета при 6,82 м.д. сдвиг в слабое поле лишь на 0,06 м.д.

Ранее было показано, что в апорфиновых алкалоидах знак удельного вращения определяет абсолютную конфигурацию /8/. Следовательно в амуренине асимметрический центр при С-6а имеет R-конфигурацию.

При ионизирующем напряжении 60-70 ЭВ и температуре I60-I70, ПМР – на спектрометре Bs-567 A Tesla ( ЧСФР) в дейтерометаноле. Химические сдвиги приведены относительно внутреннего этанола ГМДС в сигма-шкале.

Для ТСХ использовали марки LS 5/40 (ЧСФР) для колочной хроматографии – силикагель марки КСК с размерами частиц I25-I60 мм и системы растворителей: I) хлороформ-метанол (9:I. 4:I) ; 2) хлороформметанол-конц. НСI (50:50:0.I) ; 3) хлороформ-этанол (4:I).

ЭКСТРАКЦИЯ МОЛОДЫХ ПОБЕГОВ В. AMURENSIS RUPR.

I240 г измельченных молодых побегов трехкратно экстрагидровали этонолом. Обьединенные спиртовне экстракты упарили. густой остаток обработали 5%-ным раствором соляной кислоты. Кислый раствор фильтровали двухкратно промыли эфиром. Затем подщелочили 25%-ным раствором аммиака до pH 9 и алкалоыди последовательно извлекали эфиром, хлороформ и смесью хлороформ с этанолом (4:I). После отгонки растворителей получили 0,68 г эфирной, 2,II г хлороформной суммы и I,34 г суммы четвертичных алкалоидов. Общая суммы алкалоидов составляет 0,34 % от веса сухого растения.

РАЗДЕЛЕНИЕ СУММЫ АЛКАЛОИДОВ

0,68 г эфирной суммы хроматографировали на колонке с силикагелем (20г). Алкалоицы элюировал хлороформ и смесью хлороформа с метанолом в разлычних соотношениях. При элюировании смесью хлороформ-метонолом (97:3) выделили 0,23 г оксиакантина, а при 96:4 – 0,34 г бербамунина.

2,I5 г хлороформной суммы хроматографировали на колонке с силикагелем аналогично эфирой суммы. При этом выделили 0,72 г берберина, 0,14 г псевдопальматина. 0,24 г берберрубина, 0,12 г ятроррицина и 0,07 г амуренина в вице хлорид.

Разделением четвертичной суммы, алкалоидов на колонке с силикагелем аналогично хлороформной суммы, выделили дополнительно 0,31 г берберина, 0,26 г ятроррицина и 0,12 г псевдопальматина в виде хлорид.

Амуренин хлорид. Т.пл.194-195 (ацетон). /а! D-164 (c. 0,03. СН3ОН).

АЦЕТИЛИРОВАНИЕ АМУРЕНИН ХЛОРИДА

К 0,04 г амуренина хлорида добавили 2 мл уксусного ангидрид и 0,5 мл придина. Смесь кипятили до полного растворения основания. Затем упарили на водяной бане досуха. К остатку прибавили 5 мл ацетон и нагревали до полного растворения. При охлаждении выпали бородавчастые кристаллы 0-ацетил амуренина хлорида (II). Т.пл.168-187. Масс: м/z 268 (M+). 367, 359, 352, 325, 58(100). ИК: 1760 см –I).