Алкалоиды Berberis.хуп. исследование алкалоидов Berberis heteropoda Schrenk

Продолжая исследование алкалоидного состава растений рода Вerberis, мы изучали молодые побеги и листья В.heteropoda, собранные в фазу плодоношения на Джунгарском Алатау, в окрестностях селения Сарыбель (Алматинская обл.) /I/. Этанольной экастрацией молодых побегов выделили 2,5 % суммы алкалоидов.

Разделением эфирной суммы на колонке с силикагелем выделили лауданозин     /2/ оксиакантин, бербамунин и аромалин /3/, идентифицированные по физико – химическим свойством, спектральным данным, а также сравнением с подлинными образцами. Разделением по растворимости и хроматографированием на колонке с окисью алюминия из четвертичной суммы выделили берберин, магнофлорин, колумбамин, ятроррицин, в виде хлоридов /4/. Кроме выше перечисленных алкалоидов выделили еще два алкалоида: основание I с т.пл. 212-2130 (хлороформ) и основаные П с т.пл. 210-212 Основание I в Уф-спектре имеет поглощения при λС2H5OH/max нм: 263, 288, 307 (плечо), 330, 379, (1g 4,14; 4,45; 4,32; 4,10; 3,66), характерные для протобербериновых солей /5/. В ПМР-спектре I снятом в СDC I3 проявляются cигнали при (б-шкала) м.д.: 3,97 (3Н.С.ОСН3), 3,99 (3Н.С.ОСН3). 4, 14 (3Н.С.OCH3), (3I.C.OCH3), 3.25 (2H.T.CH2), 4.97 (2H.T.CH2) 6.85 (IH.C.). 7.43 (IH.C.). 7.90 (2H.C.).8.65 (IH.C.). 9.75 (IH.C.). Основание I по ТСХ и ИК- спектру отличается от пальматин хлорида /4/. Приведенные данные позволяют идентифицировать I с псевдопальматин хлоридом /5/.

Основание I I в Уф-спектре имеет поглошения при λ С2H5OH/max

241.350 (1g 4,37: 3,92) . характерные для дигидропротоберберинов /6/. В его масс-спектре проявляются пики ионов с 352, 351, 337, 337, 336, 321, 320, 303, 307, 292, 278. В ПМР- спектре снятом проявляются сигналы при (сигма- шкала) м.д.: 6,05 (3Р. vш.с.N*/CH 3 ). 3.22- 4.48 (бн.т) , 6,49 (IH.C.). 7,44 (2H.C.).7,85 (IH.C.). Восстановлением I I NаВН 4 получили (+) –N – метил – тетрагидроберберин (III), который при термическом деметилировании, при 300⁰ в вакууме дает (+) – тетрагидроберберина (IУ) /7/, идентирицированное с подлинным образцом.

Таким образом основание I I – является метилдигидроберберином, который ранее было синтезирован /3/.

Хлороформной экстракцией листьев выделили 0,24 % суммы алколоидов. Хроматографированнием на колонке с силикагелем выделили глауцин, оксиокантин, таликмидин, изокоридин, ретикулин /9/ и основание V с .т.пл. 251-252^0. . В УФ – спектре имеет максимумы поглощения при С 2 Н 5 ОН им: 220, 364 (1g 3,97; 3,94) , характерные для 8-оксопротоберберинов /10/. В ИК –спектре имеются полосы поглощения при см – I: 3450(ОН), 1650 (С=0), 1490 (ОСН 2 О).

В масс – спектре V имеются пики ионов с (%): 337(М+100). 323 (22), 322 (50), 308 (13), 294 (63), 279 (27). Характерные для 8-оксопротоберберинов / I I/. В ПМР – спектре его снятое в СДСI3 наблюдаются сигналы в виде двух протонного синглета от метилендиокси группы при 5,95м.д. в виде трех протонного синглета от метоксильной группы при 3,87 м.д.два двух протонных триплетов при 2,80 и 4,13 м.д. от двух пар метиленовых протонов. В области ароматических протонов обнаруживаются три однопротонные синглеты при 6,60: 6,66: 7,11 м.д. два двух протонных дублета при 6,86: 7,13 м.д. и однопротонный синглет при 12,75 м.д. от гидроксильной группы находящейся в пери положении к карбонильной группе /15/. По приведённым данным V относится к протобербериновым алкалоидам, имеющим амидный карбонил и фенольный гидроксил. Ацетилирование V уксусным ангидридом в ацетоне в присутствии уксуснокислого натрия получили 0- ацетилпроизводное VI. При метилировании V диметилсульфатом получили 8-оксоберберин (VП), идентичный с подлинным образом. Таким образом У имеет метилендиоксигруппу в положениях 2,3, а положениях 9,10 имеются гидроксильный, метоксильный заместители. Для подверждения взаимного расположения заместителей в кольце D намы получено V из VII в условиях /12,13/. По приведенным данным основание V является 8-оксоберберрубином. Одноко необходимо отметить, что Перкин /14/ и Говиндачари /12/ получили последный из 8-оксоберберина (VП) и назвалы изооксиберберином. По данным /12/, изооксиберберин не растворим: в CDCI3 и даже в DMCO. По этой причине авторы снимали ПМР –спектр изооксиберберина в трифторуксусной кислоте, в то же время выделенный нами алкалоид V легко растворим в хлороформе. Поэтому мы подтвердили положение 5а.

При обработке Х I I I хлорокисью фосфора , с дальнейшим восстановлением полученного продукта, натрий боргидридом, получили 0-ацетилтетрагидроберберрубин (XV)/ При омылении последнего, соляной кислотой, получили (+тетрагидроберберрубин) /2/, идентичный с подлинным образцом по ИК-спектру и по отсутствии депрессии т.пл. смешанной пробы. Таким образом 5 является 8-оксоберберрубином. В результате исследования молодых побегов и листьев. В.heteropoda выделили всего 15 алкалоидов. Из них н-метилдигидроберберин и 8-оксоберберрубин является новыми природными основаниями, бербемунин, аромолин, глауцин, таликмидин, изокоридин и ретикулин впервые выделили из данного растения, а псевдопаьматин и лауданозин впервые из растений рода Berberis.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Состав смеси алкалоидов и индивидуальность соединений контролировали на закреплённом тонком слое сликагеля марки LS 5/40 c 13% гипса в системах растворителей:

• 1)    Хлороформ – метанол-конц. НСI (50:50:0.I), 2) хлороформметанол 9:I, 95:5, 99:5. 3) Бензол –этанол (9:1). Для колоночной хроматографии использовали силикагель марки КСК и окись алюминая (2 степени активности по Брокману). УФ-спектры снимали на спектрофотометре Hitachi ( в этаноле), ИК-спектры на спектрофотометре UP-20 (КВ р) масс-спектры на приборе мх 1310 с системной прямого ввода в ионней источник, ПМР-спектр – на приборе Tesla BS-567A.

ВЫДЕЛЕНИЕ И РАЗДЕЛЕНИЕ СУММЫ АЛКАЛОИДОВ ИЗ МОЛОДЫХ ПОБЕГОВ. В.heteropoda

• 2,5    кг измельченного сырья смачивали 5%-ным раствором уксусной кислоты в этаноле, в соотношении I:I. Затем заливали этанолом в соотношении сырье-экстрагент 1:4 и кипятили обратным холодильником в течение 4 часов. По охлаждении экстракт сливали и сырье заливали этанолом (в соотношении сырье экстрагент 1:3) и кипятили с обратным холодильником в течение 2 часов. Затем раствор охладили, экстракт сливали, объединяли с предыдушей фракцией и упарили под пониженным давлением до густой массы. Последний охладили до комнатной температуры и разбавили 0,5л дистиллированной воды, фильтровали, подщелачивали конц. аммиаком до рН 9 и извлекали эфиром, затем хлороформом. При этом получили 12,4 г эфирную (А) и 18,1 г хлорофорную (б) сумм.

Водно щелочной маточник подкислили конц. НСI до рН I и добавили 4,5 г криталлического йодид калия. При этом сразу выпадает яркожелтый осадок берберин иодида, которой отделили фильтрованием, промывали водой, этанолом и ацетоном. Затем высушили и получили 7,75 г берберин иодида. Из кислого фильтрата при стояний выпадает коричневая смола четвертиных иодидов, которые через сутки отделили деконтированием. Смолу промывали водой и растворили в метаноле, при этом кристаллизуется 10,25 г магнофлорин иодида. Маточник упарили, высушили и получили 14г сумму четвертичных иодидов (в).

Разделение эфирной суммы (А)

• 6,2    г эфирной суммы хроматографировали на колонке с силикагелем. Алкалоиды элюировали хлороформом и смесями хлороформа с метанолом в различных соотношениях. Из фракции элюированной хлороформом выделили 0,2г лауданозина, т.пл. 87-88⁰ (бензол), из фракции хлороформ – метанол 98:2 и 97:3 выделили 3,2 г оксиакантин т.пл. 217 – 218⁰ (гексан), 1,4 г бербамунина т.пл. 190-191⁰ (ацетон). Из фракций 96:4 выделили 0,6 г аромалина, т,пл.196-197⁰ (метанол). Масс-спектр м.з. (%): 594(М+100), 593(55), 332(47), 381(85), 368 (9), 367(42), 192(17), 161,5(19), 191(75), 174(17). ИК-спектр: см-3400(он). УФ-спектор: мах: 228 (плечо),284 ( 161044,65:3393).

Разделение четвертичной суммы (В)

• а)    Превращение в хлориды суммы алкалоидов В.

Сумма алкалоидов В (14 г) растворили в 100 мл этанола и раствор медленно пропустили через колонку (2x110см) с анионитом IPA400 (CP-форма). Полученные элюаты объединили, упарали и получили 10,1 г суммы хлоридов (с), выде желтого порошка.

• 6)    Разделение суммы С.

Сумму четвертичных хлоридов (С) І0, І г, хроматографировали на колонке с окисью алюминия (ІІ степени, активности по Брокману), при соотношении суммы алкалоидов к адсорботу I:40. Алкалоиды элюировали хлороформом и смесями хлороформа с метанолом в различные соотношениях. Из фракции, элюированной смесью хлороформа с ментанолом 99:І. : 98:2 выделили 2,4 г берберин хлорида т.пл.204–205° (метанол). 0,8 г псевдопальматин хлорида т.п. 212-213° (СHCI3), из фракции 97:3. 0,9 г колумбамин хлорида т.пл. 238-239° (метанол) и из фракции 95:5 - 0,7 г ятроррицин хлорида т.пл. 205-206° (метанол), аз фракции 94:6 выделили 0,14 г N-метилдигидроберберин хлорида,т.пл. 211212° (метанол).

ВЫДЕЛЕНИЕ И РАЗДЕЛЕНИЕ СУММЫ АЛКАЛОИДОВ ИЗ ЛИСТЬЕВ B.heteropoda

• І,8 кг воздушно-сухих листьев предварительно смачивали 8%-ным раствором NH 4 ,OH и экстрагировали хороформом (3 слива). Хлороформный экстракт упаривали до 700 мл объёма и алкалоиды извлекали 5% ным раствором соляной кислоты. Кислый раствор промывали эфиром, затем подщелачивали конц. аммиаком до рН 9 , алкалоиды последовательно из- влекали эфиром и хлороформом. После упаривания растворителя получили 1,76 г эфирной (Д) и 2,56 г хлороформной (Е) суммы.