Аминокислотный состав корней Astragalus membranaceus (Fish.) Bunge
Автор: Туртуева Татьяна Анатольевна, Николаева Галина Григорьевна, Гуляев Сергей Миронович, Жалсанов Юрий Венеаминович
Журнал: Вестник Бурятского государственного университета. Философия @vestnik-bsu
Статья в выпуске: 12, 2013 года.
Бесплатный доступ
Исследован аминокислотный состав корней Astragalus membranaceus (Fish.) Bunge, произрастающего в Республике Бурятия и Забайкальском крае. Обнаружено 9 свободных и 19 связанных аминокислот.
Свободные аминокислоты, связанные аминокислоты
Короткий адрес: https://sciup.org/148181642
IDR: 148181642
Текст научной статьи Аминокислотный состав корней Astragalus membranaceus (Fish.) Bunge
Аминокислоты играют важную роль в биосинтезе биологически активных соединений, пептидов и белков [2].
По содержанию аминокислот можно судить о скорости протекания биохимических процессов. Перспективными и более доступными источниками выделения субстанций, содержащих α-аминокислоты, являются объекты растительного происхождения.
Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge – многолетнее травянистое растение семейства Бобовые (Fabaceae). Маньчжуро-даурский лесостепной вид, распространенный на Дальнем Востоке, в Монголии, Северном Китае, на Корейском полуострове и заходящий на территорию Южной Якутии, Бурятии и Читинской области. Растение хорошо известно в китайской и тибетской медицине и продолжает привлекать внимание исследователей. Широкий спектр биологической активности данного вида обусловлен содержанием в нем различных групп биологически активных веществ. Основными действующими веществами корней астрагала перепончатого являются сапонины (астрагало-зиды, агроастрагалозиды, астрамембранозиды и др.), флавоноиды (флавоны, изофлавоны, изо-флавононы, птерокарпаны), аминокислоты и полисахариды (астрагаланы и др.) [1, 3, 4]. Ранее были исследованы виды аcтрагала по содержанию аминокислот, произрастающие в Китае [4].
В связи с этим представляет интерес изучение количественного содержания аминокислот в корнях астрагала перепончатого, произрастающего в Республике Бурятия и Прибайкальском крае.
Цель исследования – количественное изучение аминокислотного состава корней Astragalus membranaceus (Fish.) Bunge.
Методы исследования . В качестве объектов испытания были использованы корни астрагала перепончатого, собранные в Республике Бурятия, окрестностях г. Улан-Удэ (15 км) – сентябрь 2012 г. (1) и в Забайкальском крае, Агинском районе, окрестностях поселка Орловский – сентябрь 2012 г. (2).
Количественный аминокислотный анализ был проведен на жидкостном хроматографе модель L-8800 фирмы «Hitachi» (Япония) в стандартном режиме анализа белковых гидролизатов, используя высокоэффективные ионообменные хроматографические колонки и специальный нингидриновый реагент для детектирования элюирующихся аминокислот. Для калибровки прибора использованы фирменные ампу-лированные смеси аминокислот (растворы-стандарты).
Образцы были подготовлены для анализа, взяты навески, проведен полный кислотный гидролиз, гидролизаты образцов (проб) подготовлены для анализа и проанализированы.
Исследования проведены в 2 повторностях, за результат взято среднее арифметическое двух определений.
Кислотный гидролиз образцов (связанные аминокислоты). Навеску образца (3-5 мг) помещали в стеклянную ампулу (молибденовое стекло) и добавляли 300 мкл (0,3 мл) свежеприготовленной гидролизующей смеси (концентрированные соляная и трифторуксусная кислоты в соотношении 2:1 с добавлением 0,1% β-меркаптоэтанола). Образец замораживали, по- мещая ампулу в жидкий азот, вакуумировали и заплавляли. Гидролиз проводили при 155 ºС в течение 1 ч. По окончании времени гидролиза ампулу (после охлаждения) вскрывали, содержимое количественно переносили в пластиковую пробирку (фирма «Eppendorf», Germany) и досуха удаляли гидролизующую смесь. Следы кислот удаляли, повторив дважды процедуру упаривания небольших порций воды, добавляемых к сухому остатку, на CentriVap Concentrator LABCONCO (US). Далее для аминокислотного анализа к гидролизату (сухому остатку) добавляли определенное количество 0,1 н. соляной кислоты, и, после интенсивного перемешивания в закрытой пластиковой пробирке, центрифугировали в течение 5 мин. при 8000 об /мин. на центрифуге Microfuge 22R (Beckman-Coulter, US). Дальнейшие разведения производили в соответствии с предполагаемым количеством белка в образце [5].
Свободные аминокислоты.
К 300 мкл суспензиобразного содержимого образцов добавляли 33 мкл 44%-ной сульфосалициловой кислоты. Пробы отстаивались ночь в холодильнике, затем их центрифугировали 5-7 мин. при 10000 об/мин. и отбирали на анализ аликвоты по 145 мкл.
Результаты и обсуждение . Результаты проведенного исследования представлены в таблицах (табл. 1 и 2). В изученных образцах обнаружено достаточно высокое содержание аминокислот (№1 – 1,29%, №2 – 1,861% – свободные аминокислоты; №1 – 8,89%, №2 – 8,35% – связанные аминокислоты). В профиле свободных аминокислот превалирующими являются пролин, аргинин, треонин и глютаминовая кислота. В связанных аминокислотах преобладают аспарагиновая кислота, пролин, гютаминовая кислота и аргинин. Образец №1 характеризуется более высоким содержанием аминокислот (связанные аминокислоты).
Таблица 1
|
№ п/п |
Наименование аминокислоты |
Содержание, мг/1г |
Содержание, % |
||
|
Образец №1 |
Образец №2 |
Образец №1 |
Образец №2 |
||
|
1. |
Гидроксипролин |
6,444330 |
5,543453 |
0,64 |
0,55 |
|
2. |
Аспарагиновая кислота |
18,116019 |
20,675999 |
1,81 |
2,07 |
|
3. |
Треонин |
3,334502 |
3,169701 |
0,33 |
0,32 |
|
4. |
Серин |
3,337801 |
2,934006 |
0,33 |
0,29 |
|
5. |
Глутаминовая кислота |
8,884963 |
6,911374 |
0,89 |
0,69 |
|
6. |
Пролин |
8,906151 |
7,523958 |
0,89 |
0,75 |
|
7. |
Глицин |
2,806362 |
2,286872 |
0,28 |
0,23 |
|
8. |
Аланин |
3,079296 |
2,533440 |
0,31 |
0,25 |
|
9. |
Цистеин |
0,250313 |
0,122500 |
0,03 |
0,01 |
|
10. |
Валин |
5,248325 |
4,509963 |
0,52 |
0,45 |
|
11. |
Метионин |
0,510140 |
0,456385 |
0,05 |
0,05 |
|
12. |
Изолейцин |
2,638104 |
2,085813 |
0,26 |
0,21 |
|
13. |
Лейцин |
4,189105 |
3,469036 |
0,42 |
0,35 |
|
14. |
Тирозин |
1,257347 |
1,650853 |
0,13 |
0,17 |
|
15. |
Фенилаланин |
2,403936 |
1,836333 |
0,24 |
0,18 |
|
16. |
Гидроксилизин |
0,417779 |
0,626176 |
0,04 |
0,06 |
|
17. |
Лизин |
6,406850 |
4,928880 |
0,64 |
0,49 |
|
18. |
Гистидин |
3,621722 |
3,178591 |
0,36 |
0,32 |
|
19. |
Аргинин |
7,230462 |
9,124436 |
0,72 |
0,91 |
|
Сумма |
85,745556 |
83,567769 |
8,89 |
8,35 |
|
Таблица 2
|
№ п/п |
Наименование аминокислоты |
Содержание, мг/1г |
Содержание, % |
||
|
Образец №1 |
Образец №2 |
Образец №1 |
Образец №2 |
||
|
1. |
Аспарагиновая кислота |
0,339159 |
0,688510 |
0,03 |
0,07 |
|
2. |
Треонин |
1,017554 |
1,015995 |
0,10 |
0,10 |
|
3. |
Глютаминовая кислота |
0,985025 |
1,672843 |
0,10 |
0,17 |
|
4. |
Пролин |
5,050759 |
4,742175 |
0,50 |
0,47 |
|
5. |
Аланин |
0,235487 |
0,217776 |
0,02 |
0,02 |
|
6. |
Валин |
0,211299 |
0,014775 |
0,02 |
0,001 |
|
7. |
Гидроксилизин |
0,280753 |
0,534924 |
0,03 |
0,05 |
|
8. |
Гистидин |
0,203553 |
0,286738 |
0,02 |
0,03 |
|
9. |
Аргинин |
4,650495 |
9,517217 |
0,47 |
0,95 |
|
Cумма |
12,974084 |
18,690953 |
1,29 |
1,861 |
|
Количественное содержание связанных аминокислот в образцах №1 и №2 (кислотный гидролизат)
Количественное содержание свободных аминокислот в образцах №1 и №2
