Анализ и стандартизация настойки матричной гомеопатической фукус

К.М. Саканян, Д.Д. Даргаева, Т.А. Сокольская

Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений, г. Москва •

ANALYSIS AND STANDARDIZATION OF THE MATRIX TINCTURE FUCUS

K.M. Sakanjan, D.D. Dargaeva, T.A. Sokolskaya

Fucus vesiculosus L. widely applied to preparation homeopathic remedy in the different countries as normalizing metabolic processes and for diseases of the thyroid gland. The numerous group of the biologically active substances are polysaccharides and iodine matters. The qualitative and quantative analysis of the matrix tincture Fucus have been studding. This facts can be used for standardization of the matrix tincture Fucus.

Использование бурых водорослей сем. Fucaceae и в частности фукуса пузырчатого Fucus vesiculosus L., в медицинской, в том числе гомеопатической, практике традиционно. Применение этого растительного объекта обычно связано с наличием в нем значительного количества йода, представленного в виде йодидов, а также полисахаридов [1,4].

В гомеопатической практике таких стран, как Франция, Германия, США, Индия, Великобритания и Россия, применения находят гомеопатические, лекарственные средства на основе настойки гомеопатической матричной (НГМ) Фукус. Основными показаниями к назначению этих лекарственных препаратов служат нарушения обменных процессов, приводящих к ожирению и дисфункции щитовидной железы [5,6]. Согласно требованиям фармакопейных статей зарубежных стран, оценка качества НГМ Фукус проводится по таким показателям, как описание и подлинность. Причем, определение подлинности предлагается проводить хроматографически на пластинах «Сорбфил». При этом фиксируется четыре зоны без указания, с какими биологически активными веществами они соотносятся. Однако делается акцент на окраску этих зон и значение Rf [2,3]. В связи с этим представлялось целесообразным проведение исследований отдельных групп биологически активных соединений бурых водорослей (БАВ) с определением их качественного состава и количественного содержания. Настойку матичную гомеопати- ческую фукус получали по методу 4 (ОФС 42-0027-05 Настойки гомеопатические матричные) с использованием в качестве экстрагента 90% спирта этилового [7].

Исследование наличия свободных сахаров, входящих в состав НГМ Фукус, проводилось с применением метода хроматографии в тонком слое сорбента на пластинках «Сорбфил». В качестве подвижной фазы использовали смесь растворителей: вода-метанол-уксусная кислота безводная-хлористый этилен в соотношении 10:15:25:50.

В качестве растворов сравнения использовали 0,05%-ные растворы рабочих стандартных образцов (РСО) глюкозы фруктозы. Для этого 0,05 (точные навески) глюкозы, фруктозы помещали в мерные колбы объемом 100 мл,, прибавляли по 50 мл 70%-ные спирта этилового, перемешивали до растворения и доводили до метки тем же растворителем.

Детектирование зон адсорбции проводили путем обработки хроматограмм раствором тимола (0,5 г тимола растворяли в 95 мл спирта и прибавляли 5 мл серной кислоты концентрированной).

Методика анализа^-, на линию старта хроматографической пластины наносили по 25 мкл НГМ Фукус и по 5 мкл рабочих стандартных образцов глюкозы, фруктозы. Пластину помещали в камеру, предварительно насыщенную парами растворителей, в течение 2 ч и хроматографировали восходящим способом. Длина пробега растворителей составляет 13 см. После прохождения фронта растворителя хроматограмму вынимали, высушивали на воздухе и обрабатывали раствором тимола. В результате на хроматограмме исследуемого раствора обнаружено 3 зоны адсорбции. Из них зоны с R_f около 0,41, соответствует глюкозе; с R_f около 0,5 -фруктозе (рис. 1).

Таким образом, в составе моносахаров НГМ Фукус идентифицированы глюкоза и фруктоза. Для количественного определения суммы полисахаридов в НГМ Фукус использовали метод УФ-спектрофотометрии, основанный на определении оптической плотности окрашенного комплекса, образующегося при взаимодействии сахаров с пикриновой кислотой. Для подтверждения образования такого комплекса были сняты спектры поглощения окрашенных в красный цвет комплексов полисахаридов НГМ Фукус и РСО глюкозы. Спектры поглощения снимали на спектрофотометре Гелиос (США) в интервале длин волн от 370 до 600 нм. При длине волны 450 нм наблюдается максимум поглощения комплекса сахаров НГМ и глюкозы (рис. 2). Полученные данные подтверждают возможность использования данного метода для анализа полисахаридов НГМ Фукус и позволяют определять количественное содержание этих веществ в пересчете на глюкозу.

Методика анализа; 10 мл настойки помещают в колбу вместимость 50 мл и нагревают на водяной бане до удаления спирта, затем прибавляют 10 мл 10%-ного раствора кислоты серной, перемешивают 5 мин и кипятят на водяной бане с обратным холодильником в течение 1 ч при температуре (90±5) °C. Раствор охлаждают и количественно переносят в стакан вместимостью 50 мл. Колбу промывают 5 мл 30%-ного раствора натрия гидроксида и 4 раза по 5 мл воды очищенной, присоединяя эти растворы к исходному. Полученный раствор нейтрализуют потенциометрически до pH 6,5-7 30%-ным раствором натрия гидроксида и 10%-ным раствором кислоты серной. Раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем до метки водой очищенной и перемешивают, затем фильтруют через бумажный складчатый фильтр белая лента (раствор А), отбрасывая первые 15-20 мл фильтрата. В две мерные колбы вместимостью 50 мл отмеривают по 2,5 мл 1%-ного раствора кислоты пикриновой, 7,5 мл 20%-ного раствора натрия карбоната и перемешивают в течение 5 мин. В одну колбу добавляют 5 мл раствора А, а в другую 5 мл раствора РСО глюкозы, перемешивают. Колбы нагревают на кипящей водяной бане 10 мин, затем охлаждают и доводят объем раствора ^о метки водой очищенной, перемешивают. Оптическую плотность раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 450 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения воду очищенную. Параллельно измеряют оптическую плотность комплекса РСО глюкозы с пикриновой кислотой. Содержание полисахаридов в пересчете на глюкозу в НГМ Фукус в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = D- т о - 5 -50 -50- 100 , D_o- 100-50- 10-5

где D - оптическая плотность испытуемого раствора;

Do - оптическая плотность РСО глюкозы;

nio - масса навески РСО глюкозы, г.

Примечание. Приготовление раствора РСО глюкозы. Около 0,02 г (точная навеска глюкозы (ФС 42-2419-86) помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, добавляют 100 мл воды очищенной, перемешивают и объем раствора доводят до метки тем же растворителем, перемешивают.

Результаты количественного определения суммы полисахаридов в пересчете на глюкозу в НГМ Фукус приведены в таблице 1.

Согласно приведенным данным содержание полисахаридов в НГМ Фукус колеблется от 0,069 до 0,074 %, в связи с чем норму по этому показателю рекомендуется установить не менее 0,065 %. Воспроизводимость методики количественного определения полисахаридов была установлена на примере одной серии настойки в 5 независимых повторностях. Метрологические характеристики методики определения содержания полисахаридов в пересчете на глюкозу приведены в таблице 2.

Таблица 1

Результаты количественного определения суммы полисахаридов в гомеопатической матричной настойке Фукус, в пересчете на глюкозу

НГМ Фукус	Содержание полисахаридов в НГМ Фукус в пепесчете на глюкозу. %
Образец № 1	0,069
Образец №2	0,074
Образец №3	0,074
Образец №4	0,071
Образец №5	0,068
Среднее значение	0,071

Таблица 2

Метрологические характеристики методики количественного определения полисахаридов в НГМ Фукус в пересчете на глюкозу

L_	X	S	S.	tffPl	Р %	АХ	Е.%
4	0.071	0.0000475	0.00098	2.78	95	0.006	±3.85

Относительная ошибка единичного определения методики количественного определения полисахаридов с 95%-ной вероятностью составляет ±3,85 %. Для проверки отсутствия систематической ошибки методики были поставлены эксперименты с добавками глюкозы в настойку. Полученные результаты приведены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты опытов с добавками глюкозы в НГМ Фукус

Найдено полисахаридов в НГМ, мг	Добавлено глюкоз, мг	Должно быть, мг	Найдено полисахаридов, мг	Абсолютная ошибка, мг	Относительная ошибка, %
1,4	0,1	1,5	1,49	-0,01	-0,69
1,4	0,2	1,6	1,59	-0,01	-0,62
1,4	0,3	1,7	1,71	+0,01	+ 0,59

Таким образом, полученные данные могут быть использованы при разработке нормативной документации на настойку гомеопатическую матричную Фукус. Хроматографию в тонком слое сорбента со стандартными образцами глюкозы и фруктозы возможно предложить для подтверждения подлинности изучаемой настойки, а методику спектрофотометрического определения полисахаридов — для количественного анализа НГМ Фукус.

Рис. 1. ТСХ хроматограмма

1 - РСО глюкозы; 2- РСО фруктозы; 3 - НГМ Фукус

УФ-спектр поглощения комплекса полисахаридов НГМ фукус с пикриновой кислотой (1) и комплекса РСО глюкозы с пикриновой кислотой (2)

Рис. 2.