Анализ кодирующих областей гена BRCA1 у пациентов с люминальным B раком молочной железы, пролеченных препаратами платины

Рак молочной железы ют высокой чувствительностью к препаратам платины. В предыдущих наших исследованиях было установлено, что дефицит гена BRCA1 (не обусловленного герминальной мутацией), а именно низкая экспрессия, наличие потери гетерозиготности или делеции, связан с эффектом химиотерапии и прогнозом заболевания. В частности, было показано, что при делеции BRCA1 пациенты особенно чувствительны к препаратам платины. Таким образом, целью данного исследования явился анализ мутации генов BRCA1/2 у больных РМЖ до и после неоадъювантной химиотерапии препаратами платины, оценка связи с прогнозом заболевания и эффектом химиотерапии.

Материалы и методы: В исследование было включено 14 больных с люминальным В РМЖ IIA–IIIB стадии. Все больные получали 6 курсов неоадъювантной химиотерапии по схеме СР (циклофосфан/цисплатин). Материалом для исследования служили биопсийные и операционные опухолевые образцы. Секвенирование NGS проводилось на приборе MiSeq Sequencing System (Illumina, USA). Подготовка библиотек опухолевой ДНК и ДНК крови пациента (в качестве контроля герминальных мутаций) производилась при помощи набора Human BRCA1 and BRCA2 Panel; GeneRead QIAact BRCA1/2 Panel (Qiagen, Germany). Статистическая обработка данных проводилась при помощи биоинформатических методов анализа данных NGS.

Результаты: Был проанализирован опухолевый материал до и после лечения от 14 пациентов на наличие различных соматических мутаций генов BRCA1/2. Сравнение с ДНК из крови здорового человека показало отсутствие герминальных мутаций во всех образцах. В гене BRCA1 было обнаружено 19 мутаций, охватывающие с 3 по 22 экзоны и в основном сосредоточенные в 12 и 13 экзонах. 9 делеций и 6 инсерций frameshift, и 4 инсерции nonframeshift. При исследовании гена BRCA2 выявлено 28 мутаций, 16 де-леций и 8 инсерций frameshift, 1 делеция и 4 инсерции nonframeshift. Ранее была описана лишь одна мутация. По всем мутациям преобладал гетерозиготный генотип. На данный момент клиническая значимость мутаций остается не выявленной. Далее было выделено три группы пациентов в зависимости от ответа опухоли на проводимую неоадъювантную химиотерапию (НХТ): с полной регрессией опухоли, частичной и стабилизацией заболевания. В первой группе в опухолевом материале до лечения была отмечена самая высокая частота мутаций гена BRCA1 (16/19 зарегистрированных мутаций). У всех пациентов до лечения были отмечены фазированные инсерции c. 2471_2472insCCCCAA и c. 2470_2471insGGGACTAAGATCGGAA, а также делеция c. 62delT, входящие в рамку считывания. В процессе НХТ произошла почти полная элиминация мутаций в BRCA1. В гене BRCA2 до и после была зарегистрирована лишь одна миссенс мутация c. 3824T >C. Во второй группе число мутаций в гене BRCA1 упала на 55% (с 9 до 5 мутаций), количество мутаций в BRCA2 было значительно выше, чем в первой группе и не изменилось после проведения терапии (11 мутаций). В третьей группе больных частота нарушений в обоих генах выросла.

Заключение: Таким образом, было обнаружено 18 неописанных ранее мутаций в гене BRCA1, а также 28 в BRCA2. Клиническая значимость остается не выявленной. У пациентов с полной регрессией опухоли наблюдалось резкое снижение мутаций в BRCA1, а также незначительное количество изменение в гене BRCA2 в сравнение с другими группами пациентов.

Работа поддержана грантом РНФ № 19-75-00027.