Анализ относительных уровней экспрессии генов провоспалительных цитокинов, тканей кишечника и тимуса у цыплят-бройлеров в критические периоды жизни

Однако, наряду с формированием специфического иммунитета, вакцинация может приводить к развитию транзиторных или стабильных иммунодепрессивных состояний (Джавадов Э.Д., 2004). Это связано с тем, что в ответ на введение вакцины происходит перераспределение иммунных ресурсов организма, что может временно ослабить его способность реагировать на другие антигены. Кроме того, некоторые вакцины могут оказывать прямое воздействие на иммунокомпетентные клетки, вызывая их временную дисфункцию.

Иммунодепрессия, вызванная вакцинацией, может иметь различные последствия для здоровья цыплят. В критические периоды жизни, когда иммунная система птицы еще не полностью сформирована или находится в состоянии стресса, иммунодефицит может сделать ее более восприимчивой к различным инфекциям. Это может привести к возникновению вторичных заболеваний, снижению продуктивности и увеличению падежа птицы.

В связи с этим, изучение механизмов развития иммунодепрессии, связанной с вакцинацией, а также поиск способов ее профилактики и коррекции являются важными задачами современной ветеринарной иммунологии. Особое внимание следует уделять исследованию экспрессии генов провоспалительных цитокинов, которые играют ключевую роль в регуляции иммунного ответа (Бирман Б.Я., 2005; Громов И.Н., Журов Д.О., Баршай Е.А. 2017).

В данной работе мы сосредоточимся на анализе относительных уровней экспрессии генов провоспа-лительных цитокинов в тканях кишечника и тимуса у цыплят бройлеров в критические периоды жизни после вакцинации. Исследование экспрессии генов цитокинов позволит нам получить более полное представление о молекулярных механизмах, лежащих в основе развития иммунодепрессии у цыплят, а также выявить потенциальные мишени для разработки новых методов иммунокоррекции.

Материалы и методы исследований. Исследования проведены на базе ООО СЗЦ «Свеженка» Орловской области и на базе научных подразделений института. Для убоя отбирали по 5 цыплят бройлеров из изучаемой группы за день до и за день после вакцинации, а именно вакцинация против инфекционный 66,2% (с 0,00222 до 0,00369).

Рис.1 Уровень экспрессии органов цыплят-бройлеров на 9 сутки

бронхит кур (ИБК) на 10 день и вакцинация против Гамборо и болезни Ньюкасла на 18 день. Для изучения влияния вакцинации на экспрессию генов, проводился отбор тканей кишечника и тимуса, затем проводился количественный ПЦР-анализ. Полимеразная цепная реакция производилась на приборах Bio-Rad CFX 96 (Bio-rad, США), Rotor-Gene 6000 (Corbett Research, Австралия) и DTLite 4S1 (ДНК-Технология, Россия) с готовой коммерчески доступной смесью для PCR 5Х qPCRmix-HS LowROX (Евроген, Россия). Выделение тотальной РНК осуществлялось набором «РНК-Экстран» (Синтол, Россия) по утвержденной инструкции. Оценка качества выделенной РНК проводилось с помощью электрофореза в 2% агарозном геле. Исследование происходило посредством ПЦР-анализа с добавлением красителя SYBR Green. Для оценки экспрессии изучаемых генов использовалась панели специфичных праймеров для исследования уровней экспрессии генов, ответственных за иммунитет.

Результаты исследований и их обсуждение. При исследовании (см. рис.1, 2) была выявлена тенденция увеличения экспрессии генов провоспали-тельных цитокинов ИЛ-8 и ИЛ-16. При исследовании тканей кишечника до и после вакцинации на 10 день наблюдалось увеличение экспресии гена ИЛ-8 на 36,7% (с 0,00147 до 0,00201), тканей тимуса на 34,5% (с 0,00055 до 0,00074). Ген ИЛ-16 имел похожую тенденцию, и его экспрессия в образцах кишечника повышалась на 76,6% (с 0,00295 до 0,00521), а тимуса на

Рис.2 Уровень экспрессии органов цыплят-бройлеров на 11 сутки

Экспрессия гена ИЛ-8 тканей кишечника (см. рис. 3, 4) до и после вакцинации на 18 день увеличилась на 61.7% (с 0,2553 до 0,4128), а тканей тимуса на 40.5% (с 0,3956 до 0,5557). Экспрессия ИЛ-16, пока- зывает схожие результаты и в тканях кишечника увеличивается на 45.2% (с 0,0241 до 0,0348), а у тканей тимуса повышение составило 47% (с 0,0287 до 0,0422)

Рис.3 Уровень экспрессии органов цыплят-бройлеров на 17 сутки

Рис.4 Уровень экспрессии органов цыплят-бройлеров на 19 сутки

Заключение. По результатам исследований, можно сделать вывод о том, что экспрессия генов провоспалительных цитокинов ИЛ-8 и ИЛ-16, как в тканях кишечника, так и тимуса, зависит от наличия источника воспаления, в данном случае от применён- ных вакцин. Ответная реакция организма на вакцинацию, проявляется в увеличении экспрессии изучаемых генов в тканях кишечника и тимуса, как одних из значимых органов иммунитета цыплят-бройлеров.