Анализ статуса метилирования гена RARb2 в крови больных раком легкого для оценки эффективности проведенной комбинированной терапии

Цель исследования – сравнительный анализ уровня метилирования гена опухолевой супрес- сии RARβ2 в циркулирующих ДНК плазмы и циркулирующих ДНК, связанных с клеточной поверхностью, при раке легкого до лечения и после комбинированной терапии (на 10–15-е сут после операции).

Материал и методы. В исследование включено 55 больных немелкоклеточным раком легкого (НМРЛ) и 30 здоровых мужчин. Венозную кровь разделяли на плазму и клетки крови, фракцию цирДНК, связанных с клеточной поверхностью, получали последовательной обработкой клеток фосфатным буфером, содержащим 5мМ ЭДТА, и 0,125 % раствором трипсина. Для выделения цирДНК из плазмы и фракций крови и цирДНК после модификации бисульфитом натрия использовали наборы «Blood DNA Isolation Kit» фирмы «BioSilica Ltd.» (Новосибирск, Россия). Уровень метилирования гена опухолевой супрессии RARβ2 определяли методом количественной метил-специфичной ПЦР в реальном времени.

Результаты. Показано, что уровень мети- лирования гена RARβ2 в цирДНК плазмы и цирДНК, связанных с клеточной поверхностью, значимо выше у больных НМРЛ, чем в норме (3589 коп/мл и 1068 коп/мл – в цирДНК плазмы, 7620 коп/мл и 1083 коп/мл – в связанных цирДНК, р=0,003 и р=0,001 соответственно). После удаления опухоли на этапе оперативного лечения больных НМРЛ в 93 % случаев обнаружено существенное снижение уровня метилирования гена RARP2 в цирДНК плазмы и цирДНК, связанных с клеточной поверхностью, по сравнению с его уровнем до лечения (439 ± 52 коп/ мл и 547 ± 62 коп/мл соответственно, р<0,001), до уровня показателя практически здоровых лиц, не имеющих онкологических заболеваний.

Выводы. Повышенный уровень метилирования гена RARP2 во фракциях цирДНК крови обусловлен присутствием в организме опухолевой ткани. Снижение уровня до нормального является результатом успешной резекции опухоли у большинства пациентов, что свидетельствует о потенциальной возможности использования этого показателя для оценки эффективности проводимой комбинированной терапии. Определение уровня метилирования гена RARP2 в цирДНК крови у больных НМРЛ через 1 мес после операции и затем каждые 3 мес в процессе наблюдения позволит определить значимость выявленных количественных изменений для мониторинга течения заболевания.

Работа поддержана грантом РФФИ (№ 09-04-01334–а ), ФЦП «Научные и научнопедагогические кадры инновационной России», Госконтракт №П256.