Поиск новых препаратов, эффективных в отношении возбудителя вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота

Введение . Среди многообразия вирусных агентов, вызывающих патологию у крупного рогатого скота (КРС), возбудитель вирусной диареи-болезни слизистых оболочек занимает особое место [1–3]. Вирусная диарея – болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота (ВД-БС КРС) имеет глобальное распространение во многих странах мира и считается одним из самых важных заболеваний, имеющих экономическое значение для современного животноводства [2].

Вирус ВД-БС КРС представлен двумя типами и двумя биотипами: цитопатогенным и нецито-патогенным [4]. К настоящему времени он насчитывает до 20 субтипов первого типа и пять субтипов второго типа [5–6]. Инфицирование неиммунных к вирусу телок и коров в период полового цикла приводит к неудачным оплодотворениям, повторным приходам в охоту, бесплодию, эмбриональной смертности, абортам, рождению мертвых телят, снижая тем самым экономическую эффективность отрасли животноводства и косвенно способствуя недополучению продукции животноводства [7–11].

Кроме острых («транзитных») форм инфекции патоген вызывает иммунотолерантные эмбриональные инфекции, приводя к рождению персистентно инфицированных телят, являющихся постоянным эндогенным источником возбудителя [12]. Многие из них гибнут до 6 месяцев, однако некоторые доживают до взрослого состояния и используются при воспроизводстве стада, обеспечивая тем самым непрерывность эпизоотического процесса болезни [8].

Несмотря на то, что стратегия применения вакцин на протяжении десятилетий является одним из главных инструментов борьбы с данной инфекцией и дает положительные результаты [13–14], до сих пор ВД-БС КРС остается серьезной глобальной проблемой во всем мире, в том числе и в Российской Федерации.

В настоящее время нет противовирусных препаратов для борьбы с вирусом ВД-БС КРС, и поиск новых соединений, эффективных в отношении этого возбудителя, является важной задачей современной науки. Это обусловлено несколькими причинами. Во-первых, ограниченной эффективностью существующих вакцин из-за задержки между их введением и выработкой защитных антител. Противовирусные средства имеют преимущество в том, что обеспечивают почти мгновенную защиту от вирусного заражения. Во-вторых, существующее разнообразие субтипов вируса ВД-БС КРС требует создания новых высокоэффективных вакцин, способных обеспечить перекрестную защиту против различных штаммов вируса, что пока недостижимо. Противовирусная терапия может стать хорошей альтернативой вакцинации в этом случае. Применение вакцин и химиопрепаратов можно успешно комбинировать. Такой подход был бы особенно полезен в ситуации с откормочными площадками, где телят с неизвестным иммунным статусом группируют вместе и они подвергаются воздействию множества патогенов, что особенно опасно на фоне стресса, возникающего во время перегруппировки стада [15].

Таким образом, поиск новых противовирусных препаратов, эффективных в отношении возбудителя ВД-БС КРС, является актуальной задачей и имеет большое научное и практическое значение.

Цель работы . Изучение противовирусной активности нового препарата в отношении вируса ВД-БС КРС в условиях in vivo .

Объекты и методы исследований . В качестве противовирусного препарата использовали мылкий амфифильный комплекс одноцепочечной высокополимерной РНК с олеиновой кислотой с установленной ранее в условиях in vitro активностью в отношении вируса ВД-БС КРС.

Исследования провели в неблагополучном по ВД-БС КРС хозяйстве на естественно инфицированных телятах 3-4-месячного возраста черно-пестрой породы, у которых заболевание протекало в субклинической форме. У животных отмечали снижение аппетита и общей активности, незначительные выделения из носа, повышение температуры тела и лейкопению.

По принципу аналогов отобрали 24 животных, которых разделили на 4 одинаковые груп- пы. Телятам первой опытной группы интрана-зально закапывали препарат в дозе 0,15 мг/кг массы тела ежедневно в течение 10 дней; второй - препарат вводили тем же способом в дозе 0,5 мг/кг массы тела. Телята третьей и четвертой групп служили контролем, им интраназально вводили физиологический раствор и другие препараты по схеме, принятой в данном хозяйстве.

За опытными и контрольными группами животных наблюдали на протяжении 15 дней, ежедневно измеряя температуру тела, отбирая тампонные пробы носовых выделений для установления длительности выделения вируса ВД-БС КРС.

Противовирусную активность препарата определяли по снижению инфекционной активности и длительности выделения вируса с носовыми секретами, а лечебное действие - по изменению гематологических показателей, нормализации температуры тела и клинического состояния животных.

Для установления сероконверсии к вирусу ВД-БС КРС исследовали парные пробы сыворотки крови, отобранные от телят перед применением препарата и через три недели. Эти исследования были необходимы для подтверждения этиологической роли вируса в возникновении выявленной патологии у животных в данном хозяйстве.

Данные статистически обрабатывали в соответствии с общепринятыми методами [16]. Титр вируса рассчитывали по методу Рида и Менча [17].

Результаты и их обсуждение . В результате проведенных исследований было установлено, что доза препарата 0,15 мг/кг, вводимая в течение 10 дней, не вызывала у телят первой опытной группы видимых изменений клинического состояния по сравнению с контрольными животными, что косвенно свидетельствовало об отсутствии противовирусного эффекта. Показатели температуры тела у телят первой опытной и третьей контрольной групп существенно не различались. Выздоровление животных наступало на 9-11-й день, а длительность выделения возбудителя с носовыми секретами в обеих группах составляла 8-9 дней (рис. 1).

Рис. 1. Длительность выделения вируса с носовым секретом телят опытных и контрольных групп

Улучшение клинического состояния телят (8,5 ±0,2) день после начала введения препаравторой опытной группы отмечали на   5–6-й   та (рис. 2, 3).

(5,5±0,2) день, а выздоровление – на 8–9-й

Рис. 2. Температура тела телят опытных и контрольных групп

У животных отмечали восстановление аппетита, повышение активности и нормализацию клинического состояния (исчезали выделения из носа, гематологические показатели и температура тела приходили в норму). На 6– 7-й день количество лейкоцитов в крови повысилось до 5700±133,3/мм3. Температура тела и гематологические показатели телят четвертой группы на 9 –11-й (10,5±0,3) день достигали физиологической нормы.

Длительность выделения вируса с носовым секретом у телят второй группы составила 5–6 (5,5±02) дней, а у особей четвертой – 7–9 (7,8 ±0,3) дней. Максимальные титры вируса в носовых секретах животных обеих групп регистрировали с 1-го по 3-й день. Они составляли 2,5– 3,0 lg ТЦД 50/см3 , с последующим снижением до 0,5±0,12 lg ТЦД 50/см3 во второй группе на 5 – 6-й день, а у контрольных животных – на 8–9-й день.

-♦- контр. гр.1

-9- опытн. гр.1

-■- контр. гр.2

-A- опытн. гр.2

Рис. 3. Количество лейкоцитов в крови телят опытных и контрольных групп

Таким образом, у животных второй опытной группы сроки выздоровления и выделения вируса с носовыми секретами сократились в среднем на 2 дня по сравнению с таковыми в контрольной группе. Это свидетельствует о том, что испытуемый препарат в дозе 0,5 мг/кг при ежедневном применении в течение 10 дней проявляет противовирусную активность в отношении возбудителя вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота in vivo .

При ретроспективном исследовании парных проб сыворотки крови 3–4-месячных телят выявили диагностический прирост титров вирус-нейтрализующих антител в 41,7 % случаев, что подтвердило этиологическую роль вируса ВД-БС КРС в развитии у телят субклинической формы инфекции.

Полученные результаты исследований свидетельствуют, что испытуемый нами препарат в дозе 0,5 мг/кг при ежедневном в течение 10 дней интраназальном введении телятам с субклинической формой ВД-БС КРС сокращает сроки выделения вируса с носовыми секретами, нормализует температуру тела и гематологические показатели.

Выводы. Полученные данные могут в дальнейшем послужить основой для разработки эффективной схемы применения данного препарата в качестве противовирусного средства при терапии высокоценных племенных животных, в частности быков-производителей, инфицированных вирусом, однако для этого необходимы дополнительные исследования. Кроме того, эффективность этого препарата у телят можно значительно повысить путем получения его лекарственной формы для аэрозольного применения.