Ассоциативный анализ полиморфизмов генов р53 и c-fms с развитием рака молочной железы у русских женщин

Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск1 ГОУ ВПО «Новосибирский государственный университет»2 ГУ «НИИ терапии СО РАМН», г. Новосибирск3

ГУ «НИИ онкологии, Томского научного центра СО РАМН»4

Актуальность. Известно, что ключевую роль в молекулярных механизмах патогенеза рака молочной железы (РМЖ) играют онкогены и гены-супрессоры опухолевого роста. В данной работе в качестве генов-кандидатов, потенциально принимающих участие в формировании предрасположенности к развитию РМЖ у женщин, выбраны гены p53 и c-fms. Белковый продукт гена p53 принимает участие в обеспечении контроля клеточного цикла, репарации ДНК и апоптоза. Ген c-fms кодирует рецептор макрофаг колониестимулирующего фактора – M-CSF, необходимый для выживания, пролиферации, дифференцировки макрофагов и нормального развития плаценты. В качестве генетических маркеров были выбраны полиморфные сайты в гене p53 – однонуклеотидный полиморфизм (ОНП) G215C (rs1042522) в 4 экзоне, приводящий к замене аргинина на пролин (Arg72Pro) в SH3 домене белка, и полиморфизм IVS 3[+32(ins16)] (rs17878362) в 3 интроне, представляющий собой дупликацию

16 п.н. ACCTGGAGGGCTGGGG , а в гене c-fms - динуклеотидный полиморфизм TC/CA в 3`-не-транслируемой области, на расстоянии 34 п.н. от стоп-кодона трансляции. Также были выбраны два ОНП гена c-fms , расположенные в районе первого промотора в позициях –123 (rs2236776; С→G ) и –77 (rs2236777; С→Т ) от начала первого экзона, вблизи цис-элемента GRE-1B.

Цель исследования. Выяснение влияния структурных вариантов генов c-fms и р53 в формировании генетической предрасположенности к РМЖ у женщин.

Материал и методы. Для исследования использовали образцы ДНК, выделенные из крови женщин, больных РМЖ, получавших лечение в НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН. В качестве контрольной выборки были взяты образцы ДНК русских женщин г. Новосибирска, обследованных в ходе эпидемиологической программы ВОЗ «MONICA». Генотипирование по полиморфным сайтам G215C гена p53 и про-моторным С→G (rs2236776) и С→Т (rs2236777) гена c-fms проводили методом ПДРФ-анализа. Наличие дупликации 16 п.н. в 3 интроне гена р53 оценивали по размерам соответствующих ПЦР-продуктов. Генотипирование по полиморфизму ТС/CА гена c-fms осуществляли методом аллель-специфической ПЦР (Кузнецова, 2004). Сравнение частот аллелей и генотипов между исследованными выборками проводили по критерию χ² (с помощью статистического пакета программ SPSS 11.0). Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05.

Результаты . При сравнении частот аллелей и генотипов по G215C между женщинами, больными РМЖ (n=294), и контрольной выборкой (n=352) отмечается повышение частоты менее распространенного аллеля С в группе больных РМЖ до 32,3 % по сравнению с контролем (26,25 %). Однако эти различия статистически недостоверны. Достоверных различий по частотам аллелей и генотипов по дупликации 16 п.н. в 3-м интроне гена р53 также не обнаружено.

Частота аллеля с дупликацией в группе больных РМЖ (n=295) составила 11,9 %, в популяционной выборке женщин – 12,2 % (n=341). В результате анализа частот аллелей и генотипов по динуклеотидному полиморфизму ТС/СА в 3`-нетранслируемой области гена c-fms в популяционной выборке русских жителей г. Новосибирска частота менее распространенного аллеля СА среди женщин (n=479) составила 21,9 %, а у мужчин (n=430) – 23,5 %. При этом снижение частоты аллеля СА у женщин происходит за счет значительного уменьшения частоты гомозигот СА/СА до 5,4 % по сравнению с мужчинами – 9,1 % (p=0,033). При сравнении частот аллелей по данному полиморфизму в выборке женщин, больных РМЖ (n=294), и в контрольной группе женщин (n=479) была обнаружена тенденция к снижению частоты менее распространенного аллеля СА среди больных до 17,9 % (p=0,054). Достоверных различий по частотам аллелей и генотипов при анализе промоторных ОНП С→G (rs2236776) и С→Т (rs2236777) гена c-fms в сравниваемых группах найдено не было. Частота менее распространенного аллеля G (rs2236776) у больных и в контроле была одинакова и составляла 1,9 %. Частота менее распространенного аллеля Т (rs2236777) среди больных оказалась ниже, чем в контроле, – 1,8 % и 2,1 % соответственно, однако эти различия не достоверны.

Выводы. РМЖ может быть обусловлен разными причинами: особенностями генетической вариабельности и воздействием внешних факторов. Исследуемая выборка больных гетерогенна в этом отношении. Дифференцировка больных на относительно гомогенные по этиологии подгруппы может способствовать эффективности проводимого ассоциативного анализа.

Работа выполнена в рамках интеграционного проекта СО РАМН «Молекулярногенетические механизмы формирования и прогрессии РМЖ».