Частота мутации гена BRAF V600E(T1799A) при папиллярной карциноме щитовидной железы в Сибирском регионе России

ИХБФМ СО РАН, г. Новосибирск

Актуальность. Рак щитовидной железы – наиболее частая опухоль эндокринной системы. В общей структуре онкологической заболеваемости злокачественные опухоли щитовидной железы составляют 1-3%. Наиболее распространенным морфологическим вариантом рака щитовидной железы является папиллярная карцинома, которая составляет 75% от всех случаев заболевания. Частота случайного выявления онкологических заболеваний щитовидной железы при лечении эутиреоидного узлового зоба составляет 0,4-6%, а частота опухолей при токсическом зобе 0,5-21,5%. Диагностика гиперпластических и опухолевых процессов в щитовидной железе затруднена. В начальных стадиях болезни ошибки диагностики составляют 50-100%, а при поступлении больных в клинику наблюдаются в 33,2-85% случаев. В связи с этим уделяется большое внимание различным молекулярным маркерам, характеризующим биологические свойства опухоли. Молекулярные дефекты, найденные в папиллярной карциноме, выявлены в генах, кодирующих рецептор тиро-зинкиназы (RET,NTRK1) и в двух внутриклеточных эффекторах: ГТФ-связанном белке RAS, серин-треониновой киназе BRAF. Соматическая мутация в гене BRAFV600E(T1799) расценивается как наиболее распространенный молеку- лярный дефект при спорадической папиллярной карциноме (39-83%), характеризует более агрессивное течение заболевания (метастазирование, экстратиреоидную инвазию) и определяется уже на I стадии опухолевого процесса.

Цель. Разработка метода выявления с помощью «real-time» ПЦР и исследование частоты соматической мутации гена BRAFV600E(T1799A) при папиллярной карциноме щитовидной железы в Западно-Сибирском регионе России.

Материал и методы. Материалом для молекулярно-генетического исследования послужили 103 аспирата из узловых образований щитовидных желез, полученные при ТАБ под контролем УЗИ. Соматическую мутацию BRAFV600E определяли методом двунаправленной аллельспе-цифичной амплификации с детекцией результатов в режиме реального времени («real-time» ПЦР), ПДРФ-анализом (полиморфизм длины рестрикционных фрагментов) продуктов полимеразной цепной реакции специфического участка гена BRAF с использованием подобранных праймеров и соответствующего фермента рестрикции. Результаты анализа верифицировали прямым секвенированием полученных фрагментов ПЦР.

Результаты. Всего обследовано 103 пациента, средний возраст 55+3 года. В группу сравнения включили 8 больных (7,8%) с установленным ци- тологическим диагнозом папиллярная карцинома. Группу контроля составили 95 человек с прочими цитологическими вариантами (фолликулярная опухоль -20,4%, медуллярная карцинома – 2%, АИТ – 9,7%, коллоидный зоб – 61,2%). Показано, что метод выявления мутации BRAFV600E с помощью «real-time» ПЦР обладает высокой специфичностью и чувствительностью. Частота соматической мутации составила 50%, что соответствует аналогичным показателям для европейской популяции.