Частота мутаций генов TNF, VEGFа, IL6 при язвенном колите

Согласно актуальной отечественной и зарубежной литературе язвенный колит — это воспалительное заболевание кишечника, в развитии которого, как и при болезни Крона, играют роль дефекты врожденного и приобретенного иммунитета, нарушения кишечной микрофлоры, факторы окружающей среды на фоне генетической предрасположенности [1; 2]. Однако вопрос этиологии заболевания до сих пор остается открытым.

В настоящее время считается, что полиморфные гены цитокинов, предопределяющих основу гомеостаза физиологических параметров организма, участвуют в установке адаптивных иммунных реакций на заболевания человека [3–7]. Одним из звеньев патогенеза является гиперэкспрессия провоспалительных цитокинов, в первую очередь, фактора некроза опухоли-альфа (TNFα) и интетерлейкинов, в частности IL6, следствием чего является воспалительная лимфоплазмоцитарная инфильтрация и деструкция слизистой оболочки толстой кишки с характерными макроскопическими изменениями толстой кишки [8; 9].

Менее изучено значение сосудистого эндотелия в развитии язвенного колита [10]. У пациентов с язвенным колитом при иммуногистохимическом исследовании наблюдали наличие повышенной плотности микрососудов ткани толстой кишки, что коррелировало со степенью активности заболевания и экспрессией фактора роста сосудистого эндотелия [11].

Изложенные моменты являлись отправными для изучения влияния мутаций в генах, кодирующих фактор некроза опухоли (TNFα), интрелейкин-6 (IL6) и фактор роста сосудистого эндотелия (VEGFА).

Цель исследования

Разработать подходы к оценке течения язвенного колита с учетом мутаций генов, регулирующих фактор

некроза опухоли (TNFα), фактор роста сосудистого эндотелия (VEGFА) и интерлейкин-6 (IL6).

Материалы и методы

Полиморфные варианты генов TNFα, VEGFА, IL6 изучены у 50 пациентов с язвенным колитом в возрасте от 18 до 79 лет. Вычисления проводились с использованием критерия χ2 (хи-квадрат). Диагноз язвенный колит ставился на основании данных клиники, ультразвукового исследования, колоноскопии, визуальной оценки патологического процесса во время операции и гистологического исследования операционного материала.

В исследуемой группе было 28 мужчин (56%) и 22 женщины (44%). В возрастном аспекте пациенты были разделены на 3 группы: до 35 лет (38%), от 36 до 50 лет (30%), старше 51 года (32%). По протяженности патологического процесса преобладали больные с тотальным колитом (84%). Больные с левосторонним колитом (14%) или проктитом (2%) встречались значительно реже. Что касается характера течения заболевания, у 28 пациентов (56%) наблюдалось хроническое непрерывное течение, у 14 (28%) — хроническое рецидивирующее, у 8 (16%) — острое течение. По степени тяжести атаки по Truelove-Witts (Ивашкин В.Т., 2019) превалировали пациенты с среднетяжелой атакой (42%), легкая (28%) и тяжелая (32%) атаки наблюдались реже.

Исследования проводились в сроки от 1 года до 20 лет с момента выписки из стационара. 32 больным (64%) исследования проведены в течение 5 лет после выписки, 8 (16%) в течение 10 лет, 7 (14%) в течение 15 лет, 3 больным (6%) в сроки более 15 лет после выписки из стационара.

Среди исследуемых оперативное вмешательство было выполнено у 8 больных (16%), остальные больные (84%) были пролечены консервативно. Комплекс лечебных мероприятий включал в себя антибактериальную терапию, применение сульфаниламидных препаратов (сульфасалазин, месалазин по схеме), гормональная терапия (преднизолон) и биологическая терапия (инфликсимаб, адалимумаб, голимумаб) по показаниям. Оперативное пособие сводилось к выполнению кол-проктэктомии с выведением одноствольной илеостомы по Бруку (50%), колэктомии с выведением одноствольной илеостомы по Бруку (25%), субтотальной колэктомии с выведением одноствольной илеостомы по Бруку (12,5%), операции Гартмана (12,5%). Летальных исходов не было.

В качестве контроля проведено аналогичное исследование у 40 условно здоровых людей без выявленной сопутствующей патологии. В возрастном аспекте группу контроля составили лица от 21 до 59 лет. Соотношение мужчин и женщин было равным.

Забор крови проводился после добровольного информированного согласия пациентов. Исследуемым образцом являлась венозная кровь, которую после получения помещали в пробирки с антикоагулянтом ЭДТА.

Биоматериал переносился в пробирку амплификатора для проведения полимеразной цепной реакции. Ампли-фикатор обеспечивает циклический нагрев и охлаждение биоматериала, активизируя процесс расхождения цепей ДНК. При доведении содержимого до нужной температуры добавлялись праймеры, которые прикрепляются к определенным нуклеотидам, выделяя заданный участок генома. После этого вносился энзим ДНК-полимераза для активации процесса репликации и выделения полиморфизмов исследуемого гена.

Результаты

В исследуемой группе мутации гена, кодирующего интерлейкин-6 (IL6) по гомозиготному варианту G174G встречались с частотой 24%, мутации гена, кодирующего фактор роста эндотелия сосудов (VEGFА) по гомозиготному варианту С634C встречались с частотой 12%. Мутаций в гене, кодирующим фактор некроза опухоли (TNFα) в исследуемой группе выявлено не было. Распределение полиморфизмов соответствует закону Харди-Вайберга.

Исходя из данных, представленных в таблице 1, следует, что среди пациентов с язвенным колитом чаще встречались мутации гена IL6 (24%). Мутации гена VEGFA встречались в 2 раза реже (12%). Частота полиморфных вариантов IL-6 (G174G) и VEGFA (C634C) существенно ниже в группе сравнения и составила 5% и 2,5%, соответственно.

Наиболее часто встречалась мутация гена IL6 среди мужчин (28,6%). Частота мутации этого гена среди женщин не превысила 18,9%. Что касается возрастного аспекта гомозиготный вариант IL-6 (G174G) с наибольшей частотой встречался среди пациентов старшей возрастной категории (старше 51 года, 43,8%), реже среди больных до 35 лет (21,1%). Наименьшая частота (6,7%) наблюдалась в группе больных от 36 до 50 лет.

Мутация гена VEGFA так же наблюдалась чаще среди мужчин 14,3%, однако в возрастном аспекте высокая частота изменений фиксирована среди больных старше 51 года (18,8%) и пациентов от 36 до 50 лет (13,3%), в отличии от частоты мутаций среди пациентов молодого возраста (5,3%).

Табл. 1. Частота мутаций в генах IL6 и VEGFА при язвенном колите

Группа больных			Частота мутаций генов
			IL-6 (G174G)	VEGFA (C634C)
Язвенный колит	Всего (n = 50)		12 (24%)*	6 (12%)
	Пол (n = 50)	Мужчины (n = 28)	8 (28,6%)*	4 (14,3%)
		Женщины (n = 22)	4 (18,9%)	2 (9,1%)
	Возраст (n = 50)	До 35 лет (n = 19)	4 (21,1%)	1 (5,3%)
		От 36 до 50 лет (n = 15)	1 (6,7%)	2 (13,3%)
От 51 лет (n = 16)			7 (43,8%)*	3 (18,8%)
Группа сравнения (n = 40)			2 (5%)	1 (2,5%)

Примечание : * — достоверность к группе сравнения (p<0,05).

Табл. 2. Частота мутаций в генах IL6 и VEGFА при язвенном колите в зависимости от протяженности процесса

Протяженность процесса		Частота полиморфных вариантов генов
		IL-6 (G174G)	VEGFA (С634C)
Язвенный колит	Проктит (n = 1)	–	–
	Левосторонний колит (n = 7)	1 (14,2%)	2 (28,6%)*
	Тотальное поражение (n = 42)	11 (26,2%)*	4 (9,5%)
Группа сравнения (n = 40)		2 (5%)	1 (2,5%)

Примечание : * — достоверность к группе сравнения (p<0,05).

Табл. 3. Частота мутаций в генах IL6 и VEGFА при язвенном колите в зависимости от метода лечения и объема оперативного пособия

Метод лечения		Частота полиморфных вариантов гена
		IL-6 (C174G)	VEGFA (G634C)
Операция	Оперативное (n = 8)	2 (25%)	3 (37,5%)*
	Колэктомия с илеостомией по Бруку (n = 2)	1 (50%)	–
	Операция Гартмана (n = 1)	–	1 (100%)*
	Колпроктэктомия с илеосто-мией по Бруку (n = 4)	1 (25%)	2 (50%)*
	Субтотальная колэктомия с илеостомией по Бруку (n = 1)	–	–
Консервативное лечение (n = 42)		10 (23,8%)	3 (7,1%)

Примечание : * — достоверность к группе больных без оперативного лечения в анамнезе (p<0,05).

Согласно полученным данным мутации гена IL6 по гомозиготному варианту G174G встречались с наибольшей частотой среди пациентов с тотальным поражением толстой кишки, и почти в 2 раза реже (14,2%) среди пациентов с левосторонним колитом. Что касается гена VEGFA, наблюдалась противоположная картина. Мутации по гомозиготному варианту С634C встречались чаще при левостороннем колите (28,6%), чем при тотальном поражении толстой кишки (9,5%). У пациента с проктитом мутации генов выявлено не было.

Анализируя таблицу 3, можно сделать вывод о том, что мутация гена IL6 практически в равной степени встречается среди групп больных, которым была выполнена операция и пациентов после консервативного лечения, а именно в 25% и 23,8%, соответственно. Однако мутации гена VEGFA достоверно чаще встречались (p<0,05) среди пациентов с оперативным лечением в анамнезе (37,5%), чем среди больных без оперативного лечения (7,1%). У пациентов с субтотальной колэктомией в анамнезе мутаций исследуемых генов выявлено не было.

Выводы

При язвенном колите частота мутаций гена IL6 достигает 24%. Мутации гена VEGFA встречались в 2 раза реже (12%). Мутаций в гене TNFα выявлено не было. Установлено, что мутации в гене IL6 чаще встречаются среди пациентов мужского пола, старше 51 года. По про- тяженности процесса мутации гена IL6 ассоциированы с левосторонним колитом, а мутации VEGFA с тотальным поражением кишки. Мутация гена VEGFA в определенной степени может свидетельствовать о вероятности повышенного риска оперативного лечения.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов (The authors declare no conflict of interest).