Цитологическая оценка динамики репаративных процессов в экспериментальной условно асептической ране под действием комплексного препарата на основе хитозана и наночастиц металлов

• ¹Введение. Лечение ран мягких тканей является сложным многостадийным процессом. Среди большого количества различных способов местного лечения ран до сих пор не найдено оптимальных методов [1, 2]. В литературе имеются данные по созданию новых раневых покрытий, содержащих в своем составе наночастицы металлов [3, 4].

В последние годы многочисленные исследования посвящены изучению влияния локально используемых ранозаживляющих препаратов, в частности хитозана, также описан характер цитологических изменений в раневом экссудате при его применении [5–7]. Актуальной является цитологическая оценка динамики репаративных процессов экспериментальной раны под действием ранозаживляющего комплексного препарата, включающего хитозан и наночастицы металлов.

Цель : оценить динамику репаративных процессов с помощью цитологического исследования препаратов, полученных с полнослойной условно асептической раны при действии комплексного препарата на основе биополимера хитозана и наночастиц металлов.

Материал и методы. Анализ проведен на сорока белых беспородных крысах, половозрелых самцах с массой тела 180–230 г, содержавшихся в стандартных условиях вивария со свободным доступом к воде и пище. В группу сравнения вошли 20 особей, в опытную группу (применение комплексного препарата) — 20 особей.

Модель асептической кожной раны была получена следующим образом: после предварительной обработки кожи в асептических условиях, под наркозом, на выбритом от шерсти участке в межлопаточной области у крыс иссекалась кожа с подкожной клетчаткой в виде квадрата 2Ч2 см (400 мм2) по контуру, предварительно нанесенным трафаретом. На 3-и сутки в межлопаточной области у животных формировалась рана со всеми характерными признаками воспаления. Отмечались отек и гиперемия кожи в области нанесения раны, припухлость.

У животных группы сравнения рана заживала естественным путем, а у животных опытной группы рану после формирования однократно обрабатывали препаратом на основе хитозана и наночастиц металлов (получено Решение о выдаче патента РФ на изобретение по заявке № 2012119622 с приоритетом от 16.05.12).

Нами выполнено цитологическое исследование препаратов с целью изучения динамики репаративных процессов в экспериментальной ране в данных группах животных. Мазки-отпечатки получали, прикладывая стерильное предметное стекло к поверхности исследуемого участка раны. Окраску цитологических препаратов осуществляли при помощи цитологического красителя «Лейкодиф 200». Подсчитывали 100 клеток с использованием иммерсионного объектива (10Ч100). Цитологическое изучение мазков в группе сравнения и опытной группе проводили на 3-и, 5-е, 7-е, 10-е, 14-е сутки с момента формирования раны.

Статистическая обработка полученных данных выполнена с помощью программы Medstat, предназначенной для оценки результатов медицинских и биологических наблюдений, с вычислением средней

арифметической (М), ошибки средней арифметической (m), показателя вероятности (р).

Результаты. С помощью цитологического метода изучали динамическое изменение количества нейтрофильных лейкоцитов и клеток фибробластического ряда. Полученные результаты приведены в табл 1 и 2.

Таблица 1

Динамические изменения среднего количества нейтрофильных лейкоцитов (М±m) в мазках-отпечатках с поверхности экспериментальной раны

Сутки исследования	Количество нейтрофильных лейкоцитов, (М±m)
	Группа сравнения, n=20	Опытная группа, n=20
3-и	95,45±0,32	92,40±0,75 p<0,001
5-е	90,55±1,08	86,15±0,32 р<0,001
7-е	85,50±0,32	58,25±3,34 р<0,001
10-е	76,05±0,64	34,20±1,40 р<0,001
14-е	55,95±1,51	Полное заживление

П р и м еч а н и е : р — уровень достоверности различий показателей по отношению к группе сравнения.

Таблица 2

Динамические изменения среднего количества клеток фибробластического ряда (М±m) в мазках-отпечатках с поверхности экспериментальной раны

Сутки исследования	Количество клеток фибробластического ряда, (М±m)
	Группа сравнения, n=20	Опытная группа, n=20
3-и	0,50±0,03	1,10±0,07 p<0,001
5-е	1,75±0,28	2,50±0,75
7-е	6,90±0,64	30,20±4,75 р<0,001
10-е	20,50±1,08	63,35±2,05 р<0,001
14-е	29,80±2,37	Полное заживление

П р и м еч а н и е : р — уровень достоверности различий показателей по отношению к группе сравнения.

Как видно из табл. 1 и 2, в группе сравнения на 5-е сутки с момента формирования раны цитограмма в основном состояла из нейтрофильных лейкоцитов, но количество их снизилось по сравнению с 3-ми сутками в среднем в 1,05 раза, а количество клеток фибробластического ряда увеличилось в среднем в 3,50 раза.

Данная цитологическая картина соответствует дегенеративно-воспалительному периоду раневого процесса.

На рис. 1 представлено скопление нейтрофильных лейкоцитов в мазке-отпечатке экспериментальной раны у животных группы сравнения на 5-е сутки исследования.

На 10-е сутки с момента формирования раны в группе сравнения цитологическое исследование препаратов свидетельствовало об уменьшении количества нейтрофильных лейкоцитов в среднем в 1,20 раза и увеличении количества фибробластов в 41,0 раз по сравнению с 3-ми сутками. Данная цитологи- ческая картина соответствует первой фазе регенеративного периода раневого процесса. К 14-м суткам в этой группе в цитологических препаратах наблюдали значительное уменьшение количества нейтрофильных лейкоцитов в среднем в 1,70 раза по сравнению с начальным сроком исследования и увеличение клеток фибробластического ряда в 59,60 раза по сравнению с 3-ми сутками. Данная цитологическая картина соответствует второй и третьей фазам регенеративного периода раневого процесса.

Рис. 1. Скопление нейтрофильных лейкоцитов в группе сравнения на 5-е сутки с момента формирования раны

Судя по табл. 1 и 2, при цитологическом исследовании у животных опытной группы к 5-м суткам с момента формирования раны отмечалась положительная динамика, которая проявлялась в снижении количества нейтрофильных лейкоцитов в 1,07 раза, а также в увеличении клеток фибробластического ряда в 2,27 раза по сравнению с 3-ми сутками. Данная цитологическая картина соответствует дегенеративно-воспалительному периоду раневого процесса.

На рис. 2 представлено скопление нейтрофильных лейкоцитов и появление единичных клеток ги-стиоцитарного и фибробластического ряда у животных опытной группы на 5-е сутки исследования.

Рис. 2. Нейтрофильные лейкоциты и единичные клетки фибробластического ряда, а также гистиоциты в опытной группе на 5-е сутки с момента формирования раны

На 10-е сутки с момента формирования раны у животных опытной группы цитологические препараты характеризовались значительным снижением нейтрофильных лейкоцитов в 2,70 раза и увеличением клеток фибробластического ряда в 57,6 раза по сравнению с 3-ми сутками. Данная цитологическая картина соответствует второй и третьей фазам регенеративного периода раневого процесса.

На рис. 3 представлено преобладание клеток фибробластического ряда над нейтрофильными лейкоцитами у животных опытной группы на 10-е сутки исследования.

К 14-м суткам у животных опытной группы произошла эпителизация раны.

Обсуждение. Полученные данные экспериментальных исследований при применении комплексного препарата на основе биополимера хитозана и наночастиц металллов свидетельствовали о быстром купировании воспалительного процесса с последующей активацией регенеративных процессов. По оценке цитологического профиля экспериментальной раны судили об эффективности действия используемого композита. Так, достоверно уменьшалось количество нейтрофильных лейкоцитов в опытной группе, начиная с 5-х суток, а также на 7-е, 10-е сутки с момента формирования раны вплоть до полного заживления раны. Наряду с этим происходит достоверное увеличение клеток фибробластического ряда в опытной группе, начиная с 5-х суток, а также на 7-е, 10-е сутки с момента формирования раны вплоть до полного заживления раны.

Рис. 3. Преобладание клеток фибробластического ряда над нейтрофильными лейкоцитами в опытной группе на 10-е сутки с момента формирования раны

Лечение комплексным препаратом способствует более ранней регенерации условно асептической раны.

Заключение. Препарат на основе биополимера хитозана и наночастиц металлов обладает выраженным регенерирующим действием в отношении экспериментальной условно асептической раны, о чем свидетельствовали результаты цитологических исследований.