Цитоморфологическая диагностика опухолей легких с использованием иммуноцитохимических исследований
Автор: Савостикова М.В., Фурминская Е.Ю., Федосеева Е.С.
Журнал: Злокачественные опухоли @malignanttumors
Рубрика: Рак легкого
Статья в выпуске: 4S1 (21), 2016 года.
Бесплатный доступ
Короткий адрес: https://sciup.org/140222937
IDR: 140222937
Текст статьи Цитоморфологическая диагностика опухолей легких с использованием иммуноцитохимических исследований
Среди комплексных методов предоперационной диагностики опухолей легких цитологический метод (ЦМ) занимает одно из ведущих мест. Чувствительность метода составляет 89,4– 97,3%, специфичность –79–98%. Диагноз карциномы удается подтвердить при локализации опухоли в прикорневой зоне – в 62%, в средней – в 79% и плащевой – у 88% больных. Однако, при идентификации низкодифференцированных карцином, анапластических раков, метастатических новообразований требуется применение новых, дополнительных, уточняющих методов, таких как иммуноцитохимическое исследование (ИЦХ).
Цель исследования. Оценить возможности иммуноцитохимического метода в цитологической диагностике первичных и метастатических образований легкого с использованием жидкостной технологии Cytospin.
Материалы и методы. Для уточнения гистологической формы новообразования легкого (первичного или метастатического) проведено 440 ИЦХ исследований 118 пациентам (77 мужчин и 41 женщина). Средний возраст пациентов составил 63,6 года (23–84 г.). Большинство пациентов имело клинический диагноз: «рак легкого», в трети случаев врач не исключал и вторичное поражение легкого метастазом другой опухоли. Цитологический материал был получен при трансторакальной пункции от 105 пациентов (89%), при бронхоскопическом исследовании – 7 (5,9%), при аспирации содержимого бронхов – 4 (3,4%). В одном исследовании проводился ИЦХ анализ мокроты (0,85%) и, также в 1 – отпечаток кусочка образования главного бронха (0,85%).
ИЦХ исследования проводились на иммуногистостейнере Вентана (BenchMark ULTRA). Для ИЦХ анализа применяли МКАТ фирмы ДАКО: к общим цитокератинам (клон MNF116, разведение 1:50–1:100), цитокератину 20 (клон KS20.8, разведение 1:25–1:50), цитокератину 5/6 (клон D5/16 B4, разведение 1:50), TTF-1 (клон 8G7G3/1, разведение 1:200), хромогранину А (клон DAK-A3, разведение 1:100–1:200), синаптофизину (клонSY38, разведение 1:10–1:20), Cdх2 (клон DAK Cdх2, 1:50), RCC (клон SPM3/4, разведение 1:50), Melan A (клон A103, разведение 1:25), HМB45 (клон HMB45, разведение 1:50), ER α (клон 1D5, разведение 1:60), PR (клон RgR636, разведение 1:50), Thyroglobulin (клон DAK-Tg6, разведение 1:100), CA125 (клон M11, разведение 1:20), CD45
(клон 2B11+PP7/26), белок S100 (поликлональные кроличьи антитела Anti-S100, разведение 1:400), Vimentin (клон V9, разведение 1:100); моноклональные кроличьи антитела Cell Marque: к CD56 (MRQ-42, разведение 1:250), цитокератину 7 (OV-TL 12/30, разведение 1:400). Цитопрепараты докрашивали гематоксилином Майера и заключали в бальзам. Реакции проводились на цитологических монослойных мазках, полученных при накоплении пунктатов в специальной, питательной среде с последующим центрифугированием на системе Cytospin – 3 в режиме 1000 g/мин. в течение 5 минут.
С учетом формулировок цитологических заключений материал был распределен на несколько групп:
-
• уверено поставленный диагноз первичной аденокарциномы легкого (АКЛ),
-
• предположительное заключение об АКЛ,
-
• низкодифференцированный рак, возможно, немелкоклеточный,
-
• дифференциальная диагностика первичной АКЛ и метастаза,
-
• злокачественная опухоль неэпителиальной природы.
Результаты. Из 118 пациентов 55 был поставлен уверенный цитологический диагноз АКЛ, ИЦХ он подтвердился в 94,5% наблюдений положительной экспрессией CК 7 и ТТF1. В этой группе заключений в одном варианте АК показала ТТF-1 негативный фенотип, и также в 1- был выявлен МТС АК кишки, иммуноцитохимически наблюдалась экспрессия Cdx2 и СК20 (при СК7-/ TTF-1).
В 6 наблюдениях из 118 диагноз АК легкого был поставлен в предположительной форме. После проведения ИЦХ исследования: в 2 случаях подтвердилась АКЛ (TTF1+/СК7+), в 4 экспрессия ТТF1 отсутствовала.
В 31 наблюдении необходимо было исключить метастаз другой опухоли. После ИЦХ исследования в 13 наблюдениях верифицировали первичную АКЛ (TTF1+/СК7+), в 4 – метастаз АК кишки (Cdx2+/CK20+/ TTF1-/СК7-), в 4 – метастаз почечно-клеточного рака (RCC+/CK20-/TTF1-/СК7-), в 4 – метастаз уротелиальной карциномы (CK20+/TTF1-/СК7+) и 2 – метастаз рака молочной железы (RЕ+/CK20-/TTF1-/СК7+).
Пятую часть исследований составили опухоли наиболее сложные для цитоморфологической верификации – низкодифференцированные карциномы. Из 22 наблюдений (18,6%) после ИЦХ исследований 15 оказались первичными АКЛ (TTF1+/ СК7+). Экспрессия нейроэндокринных маркеров синаптофи-зина, хромогранина А, CD56 и TTF1+ при отсутствии реакций с МКАТ к СК7-/СК20- позволила в 4 наблюдениях утвердительно поставить диагноз МРЛ, в одном – плоскоклеточный рак (СК5/6+/ TTF1-/СК7-/СК20-).
Злокачественные опухоли не эпителиальной природы – всего 4 наблюдения, из которых в 2 – метастазы меланомы, подтвержденные ИЦХ реакциями с НМВ45, MelanA и белком S100. В 2 случаях требовалось подтвердить или исключить наличие рецидива опухоли легкого не эпителиальной природы (ЭМА-/общие цитокератины -/виментин+) без дополнительных уточнений.
Выводы.
-
1. Чувствительность ИЦХ исследования в определении первичной карциномы легкого, гистологического типа рака и органной принадлежности метастатических опухолей составила 95,6%.
-
2. При ИЦХ исследовании АКЛ экспрессия TTF-1 наблюдалась в 90,6%. Определение данного маркера в 24% наблюдений позволило уверено диагностировать первичную АКЛ.
-
3. Применение ИЦХ исследования при низкодифференцированных карциномах и недифференцированных
-
4. При ИЦХ исследовании карцином с низкой дифференцировкой – 20% из них верифицированы как МРЛ, 80% – НМРЛ.
-
5. Считаем актуальным проведение ИЦХ исследования при первично-множественных опухолевых заболеваниях.
-
6. Таким образом, использование иммуноцитохимических исследований в диагностике опухолей легких позволяет расширить возможности современных цитоморфоло-гических методов и на дооперационном этапе уточнить гистогенез новообразования, диагностировать первично – множественные поражения, степень распространения патологического процесса.
ПОСТЕРЫ
РАК ЛЕГКОГО
новообразованиях в 53% позволило верифицировать первичную АКЛ и в 27% определить наличие метастаза и его органную принадлежность.