Цитоморфологическая и флюоресцентная иммуноцитохимическая диагностика выпотов и смывов с органов брюшной полости на биочипах

Сравнительно невысокая чувствительность цитологической диагностики при исследовании выпотных жидкостей диктует необходимость применения дополнительных методов. Затруднения диагностики выпотов обусловлены наличием в них различных клеточных элементов, реактивными изменениями мезотелия, изменениями в морфологии клеток на фоне проводимой химио-, лучевой терапии. Для дифференциальной диагностики метастатических и реактивных выпотов и смывов используется моноклональное антитело к поверхностному гликопротеину Ber-EP4, конъюгированному с флуорохромом Cy3 на биочипах. Высокая диагностическая специфичность, чувствительность и точность, а также простота и быстрота исполнения этого метода на биочипах позволяют успешно применять его в повседневной практике цитолога.

Цель исследования. Оценить возможности и преимущества применения флуоресцентного иммуноцитохимического исследования выпотных жидкостей на биочипах.

Материалы и методы. Цитологически и иммуноцитохимически исследовано 86 выпотных жидкостей и смывов с брюшной полости на биочипах. Биочип является высокотехнологичным изделием медицинского назначения, ориентированным для решения различных клинических задач. Это стеклопрепарат, разделенный на равные ячейки. Каждая ячейка имеет прозрачное дно, с нанесенным адгезивным покрытием и моноклональным антителом Ber-Ep4, конъюгированным с флуорохромом Cy3.

На первом этапе проводили цитологическое исследование смывов и выпотов на жидкостных препаратах Cytospin-3

с использованием светового микроскопа. На втором этапе проводили исследования на биочипах с МКАТ Ber-EP4-Cy3. Микроскопию осуществляли на флуоресцентном микроскопе «Axio imager Z2» («Zeiss», Германия) с фотокамерой «Axiocam» c использованием набора фильтров. После оценки флуоресценции материал фиксировали и проводили окраску по Лейшману с последующим цитоморфологическим анализом – третий этап.

Результаты. Проведено 86 исследований. При цитологическом исследовании специфический экссудат диагностирован в 35 наблюдениях, экссудат с реактивными изменениями мезотелия в 19, предположительный диагноз о наличии метастатического выпота – 32.

Из 35 наблюдений, расцененных как выпот с наличием метастатаза аденокарциномы (АК), в 33 подтвердился специфический выпот положительной ФИЦХ с Ber-EP4-Сy3 на биочипах. Два наблюдения из 35 не выявило экспрессию с МКАТ Ber-Ep4-Cy3. В одном случае заключение было изменено на реактивный выпот, а второй – расценен как метастаз низкодифференцированного серозного рака ячников.

Из 19 наблюдений экссудатов и смывов с реактивными изменениями мезотелия после реакции на биочипах с МКАТ Ber-Ep4-Cy3: в 12 наблюдениях изменения были представлены реактивным мезотелием, в 7 – выявлены клетки метастаза АК. В 37% (n=32) наблюдений, требующих проведения дополнительных ФИЦХ исследований, в 17 наблюдениях изменения были представлены реактивным мезотелием, в 15 – выявлены клетки метастаза АК.

Исследования показали преимущества использования биочипов:

• •    Возможность использования системы обратного контроля: после проведенного исследования препарат окрашивается традиционным способом;

• •    Используемый флуорохром имеет длительный срок флуоресценции;

• •    При малом количестве опухолевых клеток в полученном материале в 15 раз возрастает вероятность их обнаружения;

• •    Низкая себестоимость.

Выводы. ФИЦХ исследование с МКАТ Ber-Ep4 – Cy3 на биочипах является надежным и быстрым методом диагностики характера выпотных жидкостей. Метод позволяет обнаруживать немногочисленные опухолевые клетки и мелкие их скопления, не выявляемые с помощью традиционного цитологического исследования, снизить частоту гипо- и гипердиагностики опухолевого процесса, применять ФИЦХ метод при срочном исследовании выпотов, так как он не требует сложной предподготовки и значительных временных затрат.