Cостояние пристеночного слизистого слоя оставшейся части желудка и коррекция его изменений после радикальных операций по поводу рака

НИИ онкологии Томского научного центра СО РАМН1

НИИ биологии и биофизики Томского государственного университета2 Сибирский государственный медицинский университет3

Выявлено, что в ранние сроки после проведенного лечения произошло достоверное изменение состава как структурных, так и внеструктурных гликопротеинов, парциального состава отдельных моносахаров в обеих группах. Был сделан вывод о том, что лазерное лечение по сравнению с медикаментозной терапией оказывает более серьезное влияние на биосинтез полимеризованных гликопротеинов и приближает их состав к нормальным показателям.

THE STATE OF PARIETAL MUCOUS LAYER OF THE REMAINING PART OF THE STOMACH AND CORRECTION OF ITS CHANGES AFTER RADICAL OPERATIONS FOR GASTRIC CANCER

M.V. Vusik1, N.A. Krivova2, V.A. Evtushenko1, O.B. Zayeva2, A.Yu. Gromova3

Cancer Research Institute, Tomsk Scientific Center of SB RAMS1

Biology and Biophysic Research Institute, Tomsk State University2

Sibirian State Medical University, Tomsk3

The aim of investigation was to study structural functional state of parietal mucous layer and cavity secretion of the remaining part of the stomach in 64 patients after subtotal distal resection for cancer in early postoperative period and the effect of endoscopic laser therapy (44 patients) and local anti-inflammatory therapy (20 patients) on the correction of damages.

A significant change in composition of both structural and extra-structural glycoproteins and partial composition of separate monosacchars was found in both groups. It was concluded that laser therapy had greater effect on biosynthesis of polymerized glycoproteins as compared with drug therapy.

Материалы и методы

В исследование были включены 64 пациента обоего пола, в возрасте от 45 до 65 лет. В первую группу больных были включены 44 пациента, которым в сроки от 2 до 3 нед после операции проводилась эндоскопическая лазеротерапия. Лазер- ная терапия пострезекционных функциональных осложнений осуществлялась с помощью низкоинтенсивного излучения лазера на парах меди с длиной волны 510,6 и 578,2 нм через моноволо-конный световод, проведенный в биопсийный канал гастроскопа. Вторую группу составили 20 пациентов, которым в те же сроки проводился курс традиционного медикаментозного лечения спазмолитиками, обволакивающими и анальгези-рующими препаратами. Контрольную группу составили 15 относительно здоровых лиц обоего пола без клинических проявлений гастродуоденальной патологии.

В работе исследовались структурные гликопротеины (ГП), состоящие из белковой и углеводной части, в том числе концентрация каждого из моносахаров, составляющих олигосахаридные компоненты (N-ацетилнейраминовой (сиаловой) кислоты, галактозы, фукозы, гексозаминов), сумма всех моносахаров. Деградированные гликопротеины слизи, потерявшие свои гелеобразные свойства, определялись в желудочном соке и супернатанте по концентрации моносахаров, присутствующих в виде ди-, три- и тетрамеров. После этого рассчитывалась сумма всех полимеризованных, деградированных моносахаров и определялась та доля, которая относится к полимеризованным гликопротеинам, для оценки процентного содержания полимеризованных гликопротеинов в общем пуле гликопротеинов слизистого слоя.

Проба нативного пристеночного слизистого слоя (ПСС) подвергалась очистке и выделению структурных ГП, при этом внеструктурные компоненты переходили в раствор в нативном виде. Выделение структурных ГП проводилось по методу, предложенному Б.В. Питраном [9], основанному на том, что при кратковременной гомогенизации в избытке физиологического раствора или дистиллированной воды нековалентно связанные компоненты нативной слизи переходят в раствор, а структурные ГП, благодаря их полимерной природе, остаются в осадке.

Образцы нативной слизи подвергали гомогенизации в 5-кратном избытке физиологического раствора, затем центрифугированием отделяли от супернатанта, повторяя процедуру 5 раз. Супернатант после каждой гомогенизации собирали и хранили при t 4 0С. Затем проводили гомогенизацию образцов слизи в воде, при этом ГП слизи увеличивались в объеме, и после центрифугирования выделялись 3 фазы: верхняя – водная, средняя – набухшие ГП слизи и нижняя – более плотные компоненты эпителиоцитов и химуса. Водное промывание повторяли 4 раза. В результате получали фракцию очищенных гликопротеинов слизи, сохранивших свои полимерные и гелеобразующие свойства.

Для определения концентрации моносахаров перед химическим анализом проводили ступенчатый кислотный гидролиз. Это давало возможность выделить моносахара из состава олигосаха-ридных цепочек. Основным критерием эффективности гидролиза был наибольший выход изучаемых моносахаров. Учитывая возможность расщепления освобожденных моносахаров кислотами, А. Нойбергер и Р.Д. Маршалл (1969) рекомендуют для каждого вида ГП подбирать свои оптимальные условия гидролиза [7].

Для определения N-ацетилнейраминовой кислоты проводили мягкий кислотный гидролиз в серной кислоте в течение 1 ч при 80 0С [3]. Для определения галактозы и фукозы гидролиз осуществляли в соляной кислоте в течение часа при 100 0С, концентрацию галактозы определяли по методу Д. Хендела и У. Киттлака [14], концентрацию фукозы – по методу Дише-Шетлза [13]. Концентрацию гексозаминов определяли колориметрическим методом Эльсона и Моргана.

Результаты и обсуждение

После курса реабилитационной терапии по разработанной нами методике с применением лазерного излучения было выявлено достоверное снижение содержания гексозаминов и увеличение сиаловой кислоты (р<0,05), снижение галактозы и фукозы было недостоверно (табл. 1). Увеличение содержания сиаловой кислоты считается процессом, благоприятным для выполнения защитной функции пристеночного слизистого слоя, поскольку увеличивается уровень межмолекулярных взаимодействий и гель слизи становится более вязким. Следовательно, проведенный курс реабилитационной эндоскопической лазеротерапии, является благоприятным для процесса биосинтеза терминальных моносахаров полимеризованных гликопротеинов.

В группе больных, получивших медикаментозную терапию, через 1 мес после лечения характер изменения состава полимеризованных гликопротеинов показал, что достоверно (р<0,05) увеличился парциальный состав корпусных моносахаров, в частности гексозаминов, и уменьшился парциальный состав терминальных моносахаров, в частности N-ацетилнейраминовой кислоты. Аналогичные данные были описаны Н.А. Кривовой [6] при изучении различных патологических состояний пищеварительного трак

Таблица 1

Показатели, ммоль/л	Эндоскопическая лазеротерапия (п—44)		Медикаментозная терапия (п=20)		Контроль (п=15)	Р П-2)	р 0-3)	р(2-3)
	До лечения	После лечения	До лечения	11осле лечения
Гексозамипы	6,79 ± 1,47	3,03 ± 0,98	15,23 ± 4,68	22,42 ± 8,72	18,6 ± 2,8	0,0071*	0,0012*	0,043*
Галактоза	6,86 ± 1,47	8,46 ± 2,01	8,41 ± 3,36	9,88 ± 3,17	38,7 ± 5,1	0,435	0,0003*	0,0003*
Фукоза Сиаловая ки-	1,76 ±0,60	2,25 ± 0,53	11Д9 ± 421	5,16 ±2,78	10,7 ± 22	0,0571	0,039*	0,056
слота Сумма моно-	0,09 ± 0,01	0,12 ± 0,03	0,23 ± 0,08	0,10 ± 0,03	1,3 ± 0,4	0,378	0,0185’	0,022*
сахаров	15,41 ±223	13,72 ± 1,16	33,17 ± 5,47	37,38 ± 2,46	69,3 ± 4,5	0,0017*	0,0035*	0,01*

Примечание, р (1—2) - достоверность различий между больными первой и второй трутш после лечения; р (1-3) -достоверность различий между больными первой группы после лечения и контролем (здоровые лица); р (2-3) — достоверность различий между больными второй группы и контролем; * — различия статистически достоверны (р<0,05).

Снижение содержания корпусных моносахаров полимеризованных гликопротеинов (галактозы и фукозы) после медикаментозного лечения свидетельствует о положительных изменениях в процессах гликозилирования при биосинтезе мо- лекулы гликопротеина в результате реабилитационной терапии. Так, например, в терапии пострезекционных состояний значительное место занимает применение препаратов, которые изменяют условия функционирования клеточных рецепторов, – ганглиоблокаторов, холинолитиков и др. [5]. Поскольку изменяются условия функционирования рецепторов, то меняется регуляция процессов биосинтеза гликопротеинов после проведенного курса медикаментозной терапии.

Изменение содержания корпусных моносахаров структурных гликопротеинов после курса лазеротерапии связано с механизмом действия лазерного излучения. Воздействие лазерного излучения носит характер пускового или тормозного сигнала, способствующего оптимизации деятельности и обеспечению доминирующий в данный момент функциональной системы. То есть лазер выступает в роли триггерного регулятора клеточного метаболизма. Достоверное уменьшение суммы моносахаров (15,41 ± 2,23 и 13,72 ± 1,16 ммоль/л, соответственно) свидетельствует о снижении процессов биосинтеза полимеризованных гликопротеинов, что говорит о нормализации защитной функции слизистого слоя.

Таблица 2

Показатели, ммоль/л	Эндоскопическая лазеротерапия (п=44)		Медикаментозная терапия (п=20)		Контроль (п-15)	Р (1-2)	Р (1-3)	р(2-3)
	До лечения	После лечения	До лечения	После лечения
Гексозамины	5,84 ± 0,52	6,68 ± 1,76	4,60 ± 0,77	3,68 ± 2,04	11,8+1,8	0,048*	0,035*	0,008*
Галактоза	4,07 ± 0,47	2,69 ± 0,37	6,64 ± 3,55	4,00 ± 0,25	7,1 + 1,7	0,0054*	0,0012*	0,0168*
Фукоза Сиаловая ки-	4,32 + 0,74	3,16 ± 0,60	3,00 + 0,73	2,46 ± 0,67	11,4 ±2.7	0,007*	0,0029*	0,0006*
слота Сумма моно-	051 ± 0,04	0,18+0,03	059 ± 0,06	051 + 0,08	0,05±0,01	0,465	0,765	0,02*
сахаров	12,84 ± 1,11	11,99 ± 1,99	14,47 ± 150	10,35 ± 1,61	305 ± 45	0,362	0,0045*	0,011*

Примечание, р (1-2) - достоверность различий между больными первой и второй ipyrm после лечения; р (1-3) -достоверность различий между больными первой группы после лечения и контролем (здоровые лица); р (2-3) - достоверность различий между больными второй труппы и контролем; * - различия статистически достоверны (р<0,05).

эндоскопической лазеротерапии было достоверно снижено по сравнению с медикаментозным лечением: 0,18 ± 0,03 и 0,21 ± 0,08 ммоль/л, соответственно. При этом сумма моносахаров деградированных гликопротеинов достоверно увеличивалась. Это свидетельствует о том, что проведенная реабилитационная терапия оказывает нормализующее влияние на процессы деградации гликопротеинов. Необходимо учитывать, что все процессы биосинтеза секреции и деградации гликопротеинов слизистого слоя протекают одновременно и непрерывно, поэтому лазерная и медикаментозная терапии имеют разные точки приложения воздействия на эти процессы.

Таким образом, сравнение парциального состава отдельных моносахаров в ПСС у больных при разных способах реабилитации с показателями у потенциально здоровых лиц позволяет сделать вывод о том, что лазерное лечение по сравнению с медикаментозной терапией оказыва

Таблица 3

Показатели, ммоль/л	Эндоскопическая лязеротера пия (п=44)		Медикаментозная терапия (п=20)		Контроль (п=15)	р (1-2)	р (1-3)	р (2-3)
	До лечения	После лечения	До лечения	После лечения
Гексозамины	23,97 ± 3,93	28,89 ± 7,06	38,90 ± 18,19	17,41 ± 2,04	17,8 + 1,4	0,0318*	0,029*	0,1
Галактоза	21,65 ± 9,33	12,01 ± 2,93	18,68 ±5,29	14,20 ± 4,58	46,4 + 7,1	0,071	0,0018*	0,0002*
Фукоза Сиаловая ки-	9,37 ± 1,64	12,01 ±2,33	14,25 ± 3,31	16,04 ± 5,71	10,6 + 0,9	0,0206*	0,0236*	0,019*
слота Сумма моно-	0,46 ± 0,07	0,26 ± 0,10	0,65 ± 0,25	0,43 + 0,19	О,56±О,О9	0,435	0,037*	0,737
сахаров	55,4 ±13,04	53,15 ±9,08	62,50 ± 4,87	48,10± 14,62	75,4±11Д	0,047*	0,0004*	0,0001*

Пр и м е ч а и и е. р (1—2) — достоверность различий между больными первой и второй групп после лечения; р (1—3) — достоверность различий между больными первой группы после лечения и контролем (здоровые лица); р (2-3) - достоверность различий между больными второй группы и контролем; * - различия статистически достоверны (р<0,05).