Действие полисахарида крапивы двудомной на кровь и кроветворение

Введение. Растительные полисахариды в последнее время рассматривают в большей степени не в качестве вспомогательных веществ, а как биологически активные вещества (Криштанова, 2005).

Введение их в организм животных вызывает целый комплекс изменений в составе крови, они влияют на активность ферментных систем, активируют иммунную систему организма, вызывают изменения в составе и структуре кроветворных органов. Некоторые растительные полисахариды активируют процессы кроветворения при различных видах анемии, а также при облучении (Сычев и др., 2007).

Было установлено, что полисахарид крапивы двудомной стимулирует физическую работоспособность здоровых животных, повышает резистентность мембран эритроцитов при взаимодействии с ними in vitro, активирует процессы фагоцитоза (Калинкина, Сычев, 2014). -

Состояние органов кроветворения, состав и свойства крови отражают состояние организма и направленность протекающих в нем процессов. Поэтому целью нашего исследования являлось изучение действия полисахарида крапивы двудомной на кровь и процессы кроветворения.

Методика. Из предварительно очищенного 80% раствором этанола воздушно-сухого сырья 1,5 часовой водной экстракцией на кипящей водяной бане выделяли водорастворимый полисахаридный комплекс (ВРПК). Пектиновые вещества извлекали из шрота, оставшегося после получения ВРПК 1% раствором щавелевокислого аммония в соотношении 1:10 на водяной бане при температуре 80° С в течение 1 часа и повторяли три раза для полного выделения пектинов. Полисахарид осаждали избытком 96% этанола. Осадок полисахарида промывали несколько раз 96% этанолом, ацетоном, эфиром, очищали диализом, переосаждением (Кочетков, 1967).

Качественный и количественный моносахаридный состав полисахарида определяли после 9-часового гидролиза 1 н. серной кислотой. Идентификацию моносахаридов проводили методом нисходящей бумажной хроматографии в системе бутанол-1-уксусная кислота-вода (4:1:5). Нейтральные сахара проявляли анилинфталатом. Количество уроновых кислот определяли комплексонометрическим методом (Зайцева, Афанасьева, 1957).

Действие полисахарида на кровь здоровых животных изучали на 30 крысах линии Вистар, содержащихся в стандартных условиях вивария. Для этого готовили 5% раствор полисахарида в физиологическом растворе. Подопытным животным вводили раствор полисахарида per os в дозе 0,1 г/кг массы тела один раз в сутки в течение 15 дней, контрольные животные получали в те же сроки равный объем физиологического раствора. У контрольных и подопытных животных кровь на анализ брали на 3, 5, 10, 15 сутки эксперимента. В пробах крови определяли количество эритроцитов и гемоглобина, количество моноцитов, лимфоцитов, лейкоцитов и сегментоядерных нейтрофилов.

В это же время у животных для исследования брали костный мозг из двух бедренных костей. Для этого их наркотизировали, декапитировали и извлекали бедренные кости. Бедренные кости очищали от остатков мышц и волокон, вскрывали и выделяли костный мозг в среду, состоящую из 10% раствора альбумина и среды 199, в которую добавляли антибиотик и гепарин.

Костный мозг суспензировали в 1 мл среды, а затем брали 0,1 мл суспензии костного мозга в среде, добавляли 0,1 мл среды и 0,1 мл раствора нейтрального красного. Полученную смесь оставляли на 10 минут, а затем исследовали под микроскопом в камере Горяева при увеличении 200, подсчитывая островки в 225 больших квадратах (Захаров, Рассохин, 2002).

Полученные экспериментальные данные были подвергнуты математико-статистической обработке с использованием программы Statistica 6.0. Характер распределения данных определяли с помощью критерия Шапиро - Уилка. Для установления статистически достоверных межгрупповых различий применяли критерий Манна -Уитни. Достоверными считали различия при значении р< 0,05. Полученные данные представлены в виде медианы, верхнего и нижнего квартиля.

Результаты и обсуждение. Нашими исследованиями было установлено, что под влиянием полисахарида в крови подопытных животных на третьи сутки опыта количество эритроцитов достоверно увеличивалось на 22,8 % (р<0,05), а гемоглобина - на 16,3% (р<0,05) по сравнению с контролем.

На 5 сутки эксперимента количество эритроцитов и гемоглобина достоверно возрастало под влиянием полисахарида и максимально превосходило контроль на 29,3% (р<0,05) и 19,5% (р<0,05) соответственно.

На 10 день опыта количество эритроцитов и гемоглобина также достоверно увеличивалось по сравнению с контролем, однако не наблюдалось достоверно значимых различий по отношению к 5 суткам эксперимента.

К 15 суткам введения полисахарида количество эритроцитов на 14,5% (р < 0,05) превосходило контрольные значения, а количество гемоглобина не имело достоверно значимых различий с контрольными показателями. Данные исследования представлены в таблице 1.

Таблица 1

Действие полисахарида крапивы двудомной на эритроцитарную систему крови

	Контроль (п=6)	3 сутки (п=б)	5 сутки (п=б)	10 сутки (п=6)	15 сутки (п=6)
Эритроциты *1012/л	6,15 (б,00;б,40)	7,55* (7,50;7,70)	7,95’ (7,80;8,20)	8,05* (7,98;8,20)	7,04* (б,93;7,10)
Гемоглобин г/дл	12,19 (12,00;12,55)	14,18’ (13,9;14,3)	14,57* (14,35;14,7)	14,50’ (13,98;15,1)	11,95 (11,8;12,00)

Примечание. Здесь и далее — статистически достоверные различия по сравнению с контролем (р<0,05).                                                                                           '

Относительное содержание моноцитов под влиянием полисахарида достоверно увеличивалось к 5-10 суткам эксперимента. Их абсолютное число также достоверно возрастало под действием полисахаридного препарата, превосходя контроль в 1,97 (р<0,05) и 3,4 раза (р<0,05) в эти же сроки соответственно.

Относительное содержание лимфоцитов достоверно возрастало на 3 день введения полисахаридного препарата и оставалось неизменным на протяжении 5-10 суток опыта. А их абсолютное число максимально превосходило контрольные значения на 15,7% (р<0,05) также на 3 день опыта.

Введение полисахарида вызывало увеличение общего числа лейкоцитов в крови подопытных крыс на 3 день эксперимента на 10,7% (р<0,05) по сравнению с контролем. На 5 сутки опыта происходило максимальное снижение общего количества лейкоцитов на 18,6% (р<0,05) по сравнению с контрольными значениями. В последующие дни эксперимента численность лейкоцитов возрастала, но на 10 сутки введения препарата она была ниже, чем в контроле на 8,5% (р<0,05) и только на 15 день исследования количество лейкоцитов возвращалось к норме.

При увеличении общего количества лейкоцитов относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов на 3 сутки эксперимента у подопытных животных достоверно снижалось по сравнению с контролем. На 5 день введения препарата процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов достоверно возрастало по отношению к контрольным показателям на фоне снижения общего числа лейкоцитов. Однако их абсолютное число практически не изменялось на протяжении всего эксперимента.

Таблица 2

Изменение общего числа лейкоцитов и их состава под влиянием полисахарида крапивы двудомной

	Контроль (п=б)	3 сутки (п=6)	5 сутки (п=6)	10 сутки (п=6)	15 сутки (п=6)
Лейкоциты* 109/л	14,05 (13,8;14,5)	15,55" (15,2;15,8)	11,85" (Н,5;12,0)	12,95" (12,8;13,1)	13,95 (13,7;14,1)
Лимфоциты %	77,0 (75,0;78,0)	80,5" (80,0;82,0)	80,5" (80,0;81,0)	80,0" (79,0;80,0)	77,5 (76,0;79,0)
Моноциты %	1,5 (1,0;2,0)	2,0 (1,0;2,0)	3,5" (3,0;4,0)	5,5" (5,0;6,0)	2,0 (2,0;2,0)
Сегментоядерные	15,5	13,0"	18,0"	16,0	14,5"
нейтрофилы %	(15,0; 16,0)	(12,0;14,0)	(17,0;19,0)	(15,0;17,0)	(14,0;15,0)

На 15 день эксперимента общее количество лейкоцитов и относительное содержание моноцитов, лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов практически возвращались к контрольным показателям. Полученные данные представлены в таблице 2.

На протяжении всего эксперимента наблюдались изменения в структуре костного мозга животных. Данные представлены на рис. 1.

Рис. 1 . Изменение общего числа эритробластических островков костного мозга крыс под действием полисахарида крапивы двудомной

Количество эритробластических островков в структуре костного мозга на 3 сутки у подопытных животных увеличивалось незначительно по сравнению с контролем, в основном за счет эритробластических островков 3 класса зрелости. На 5 сутки эксперимента общее количество островков достоверно возрастало максимально на 22,8% (р<0,05) в соотношении с контролем, при этом появлялись новые эритробластические островки 1 класса и особенно увеличивалась численность эритробластических островков 2 и 3 классов зрелости. Количество островков 3 класса зрелости возрастало в 2,8 раза (р<0,05), а 2 класса - в 1,5 раза (р<0,05), что происходило за счет ускорения процесса созревания эритробластов и увеличения выхода в кровь количества зрелых эритроцитов.

На 10 сутки опыта количество эритробластических островков 1 и 2 классов оставалось повышенным, а численность островков 3 класса зрелости снижалось до нормы. На 15 день введения полисахарида не наблюдалось достоверно значимых различий количества эритробластических островков по сравнению с контролем.

Выводы: 1. Введение препарата полисахарида крапивы двудомной в организм здоровых животных стимулирует процессы кроветворения. 2. Под влиянием полисахарида крапивы двудомной достоверно возрастает общее количество эритробластических островков костного мозга экспериментальных животных на 5-10 сутки эксперимента. 3. Под действием полисахарида возрастает количество эритроцитов на 29,3% и уровень гемоглобина на 19,5% в крови подопытных животных. 4. Введение в организм животных препарата полисахарида крапивы двудомной изменяет относительное содержание отдельных популяций лейкоцитов и их абсолютное количество:

• -    увеличивает абсолютное количество лимфоцитов и их относительное содержание к 3 суткам опыта, а также увеличивает относительное содержание моноцитов в крови в течение всего эксперимента;

• -    уменьшает общую численность лейкоцитов, но при этом увеличивает процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов.

Калинкина О.В. Действие полисахарида крапивы двудомной на кровь и кроветворение / О.В, Калинкина, И.А. Сычев // Вести. ТвГУ. Сер.: Биология и экология. 2017. № 1. С. 62-68.