Детекция циркулирующих опухолевых клеток у больных раком молочной железы I-III стадий

Детекция циркулирующих опухолевых клеток у больных раком молочной железы I–III стадий. Патология кровообращения и кардиохирургия. 2020;24(3):107-111. http:// org/10.21688/1681-3472-2020-3-107-111

В.Е. Пономарев,

Циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК) определяются в периферической крови больных раком молочной железы, простаты, колоректального рака и легких [1–4]. Для воспроизводимого измерения ЦОК на низких частотах и в небольших объемах крови используются иммуномагнитные платформы [5]. Однако в большинстве стран применяются и другие методы. Достаточно распространенным и универсальным методом детекции ЦОК является проточная цитофлуориметрия. ЦОК редко встречаются у здоровых людей или пациентов с доброкачественными заболеваниями [6]. В исследовании M. Shihui и соавт. [1] доказано, что обнаружение ЦОК в периферической крови больных имеет большое значение для ранней диагностики, прогноза и лечения рака молочной железы (РМЖ), а изучение его молекулярного профиля необходимо для возможного применения таргетной терапии. В работе F.C. Bidard и соавт. [7] показано, что высокое значение ЦОК коррелировало с худшим прогнозом у больных метастатическим РМЖ. При низком риске развития местных рецидивов и висцерального метастазирования, независимо от относительно благополучного статуса клинико-морфологических параметров у больных первично-операбельным РМЖ, иногда наблюдается прогрессирование основного заболевания, даже после специального лечения. Вопрос о том, случайно ли появление ЦОК в системном кровотоке или предопределено конкретной биологической программой, является предметом споров [8].

Цель данного исследования — повышение точности риск-стратификации больных РМЖ I–III стадий на основе определения циркулирующих опухолевых клеток.

Методы

В исследовании изучены клинические и морфологические параметры 47 больных РМЖ I–III стадий, которые проходили обследование и лечение в ФГБУ «НМИЦ онкологии им Н.Н. Блохина» Минздрава России в 2015–2018 гг. ЦОК определялись у больных до лечения. Анализ ЦОК проводился в 7,5 мл периферической крови с использованием антитела к CD45, молекуле EpCam (CD326) и Cam5.2 (Becton Dickinson, США). Для подсчета ЦОК исполь- зовался проточный цитометр FACS Canto-2 (Becton Dickinson, США). Статистическая обработка данных производилась с помощью программы Excel. Для анализа категоризованных переменных использовали таблицы сопряженности и χ2. При проверке нулевых гипотез критическое значение уровня статистической значимости принималось равным 0,05.

Результаты

Согласно дизайну исследования, больные были распределены на негативную группу ЦОК (в периферической крови нет ЦОК) и позитивную группу ЦОК (в периферической крови 1 и более циркулирующих опухолевых клеток).

Средний возраст больных составил 51,3 года (от 28 до 77 лет), медиана — 51 год. В группу больных до 50 лет вошли 22 (46,8%) пациента, старше 50 лет — 25 (53,2%).

По клиническим стадиям больные распределились следующим образом: IA — 1 (2,1 %), IB — 1 (2,1 %), IIA — 12 (25,5 %), IIB — 12 (25,5 %), IIIA — 6 (12,8 %), IIIB — 8 (17,0 %), IIIC — 7 (15,0 %).

Клинико-морфологические параметры групп больных I–III стадий РМЖ представлены в таблице .

Учитывая, что молекулярно-биологический подтип является важным прогностическим фактором у больных РМЖ, провели подгрупповой анализ и выявили, что у 25 (53,2 %) больных с люминальным раком молочной железы В Her2- частота ЦОК была выше, чем с другими молекулярно-биологическими подтипами РМЖ (p = 0,05).

Важным прогностическим фактором, который с достоверной связью имеет тенденцию к частоте ЦОК, является степень злокачественности. Опухоли со степенью злокачественности G2 чаще определялись у больных позитивной группы ЦОК — 77,5 % (p = 0,06). Частота опухолей со степенью злокачественности G3 в этой же группе составила 22,5 % (p = 0,08).

При анализе ЦОК у больных первично-операбельными и местно-распространенными формами РМЖ статистических различий не выявлено: 17 из 21 (81,0 %) и 23 из 26 пациентов (88,5 %) соответственно (χ2 = 0,42; p > 0,05). Однако учитывая высокую частоту встречаемости в условно благоприятной группе пациентов, возможно предположить на-

Детекция циркулирующих опухолевых клеток у больных раком молочной железы I–III стадий

Клинико-морфологические параметры больных I–III стадий рака молочной железы

Показатель		n	Негативная группа ЦОК, n (%)	Позитивная группа ЦОК, n (%)	ꭓ 2	p
Возраст	< 50 лет ≥ 50 лет	22 25	3 (42,9) 4 (57,1)	19 (47,5) 21 (52,5)	0,05	0,8
Менструальный	Пременопауза	25	7 (100,0)	18 (45,0)	7,2	0,008
статус	Менопауза	22	0	22 (55,0)
Мультицентрическая форма	Нет	40	17 (94,4)	23 (79,3)	2,0	0,16
роста	Есть	7	1 (5,6)	6 (20,7)
	< 2 см	8	0	8 (20,0)
Размер первичной опухоли	2–5 см	30	5 (71,4)	25 (62,5)	1,85	0,4
	> 5 см	9	2 (28,6)	7 (17,5)
	ИДР	8	1 (14,3)	7 (17,5)
Гистологический тип	ИР НСТ	29	5 (71,4)	24 (60,0)	0,35	0,63
	ИР НСТ + рак in situ	10	1 (14,3)	9 (22,5)
Степень злокачественности	G2	34	3 (42,8)	31 (77,5)	3,57	0,06
опухоли	G3	13	4 (57,2)	9 (22,5)
Ангиолимфатическая	Нет	41	6 (85,7)	35 (87,5)	1,4	0,2
инвазия	Есть	6	1 (14,3)	5 (12,5)
Метастазы в лимфоузлах	Нет Есть	18 29	3 (42,8) 4 (57,2)	15 (37,5) 25 (62,5)	0,07	0,78
	Люминальный А	7	1 (14,3)	6 (15,0)
Молекулярный подтип	Люминальный В Her2- Люминальный В Her2+	25 6	3 (42,8) 2 (28,6)	22 (55,0) 4 (10,0)	1,88	0,6
	ТНР	9	1 (14,3)	8 (20,0)
Ki-67	< 20% ≥ 20%	7 40	0 7 (100,0)	7 (17,5) 33 (82,5)	1,4	0,2

Примечание. ЦОК — циркулирующие опухолевые клетки; ИДР — инфильтративно-дольковый рак, ИР НСТ — инфильтративный рак неспецифического типа, ТНР — трижды негативный рак личие первично-диссеминированного процесса. Данная группа больных должна находиться под регулярным динамическим наблюдением, даже после окончания адъювантного лечения, как группа повышенного риска.

Обсуждение

По данным многих исследований, ЦОК в периферической крови являются независимым предиктором прогноза заболевания у больных РМЖ. В исследовании M. Shihui и соавт. [1] показано, что существует корреляция ЦОК у больных РМЖ с такими параметрами, как стадия, размер опухоли, ангиолимфатическая инвазия, уровень Ki-67 и молекулярно-биологический подтип. Данное исследование выполнено с использованием метода проточной цитофлуориметрии при большей выборке пациентов (187 больных). Корреляция подтверждена статистически только со степенью злокачественностью опухоли (p = 0,06) и молекулярно-биологическим подтипом (p = 0,05).

В исследовании M. Banys-Paluchowski и соавт. [9] показано, что прогностическая значимость ЦОК самая высокая у больных метастатическим люминальным РМЖ Her2-, что подтвердилось в нашем исследовании.

По данным литературы, наряду с количественной оценкой ЦОК изучается роль диссеминированных опухолевых клеток в костном мозге. Наличие диссеминированных опухолевых клеток у больных РМЖ коррелирует с риском развития отдаленных метастазов и местных рецидивов [10]. Будущие сравнительные геномные анализы циркулирующих и диссеминированных опухолевых клеток первич- ных и метастатических очагов у одних и тех же пациентов могут дать больше информации о прогностическом значении данных маркеров.

Необходимость определения и интерпретация ЦОК являются предметом дискуссий. Отсутствие технической стандартизации для их детекции, а также ограниченные данные об их клеточных и молекулярных характеристиках — значительные препятствия для признания клинической применимости этого диагностического маркера. Несмотря на это, диагностическое значение ЦОК обладает большим потенциалом [11]. Выявление минимальной остаточной болезни является неудовлетворенной клинической потребностью, а жидкостная биопсия может быть решением этой проблемы. Жидкостную биопсию можно использовать у больных РМЖ для диагностики, мониторинга раннего рецидива, терапевтической эффективности, а также выбора целевых препаратов [12–14].

Выводы

Популяция ЦОК несомненно отражает общебиологические процессы в первичной опухоли. Определение содержания ЦОК у больных РМЖ в нашем исследовании показывает, что, несмотря на клиническую стадию процесса, у больных ранними и местно-распространенными формами РМЖ циркулирующие опухолевые клетки выявляются примерно с одинаковой частотой: 81,0 и 88,5 % соответственно. Однако ввиду малой выборки больных, статистической значимости не выявлено (p < 0,05). Перспективно изучение взаимосвязи наличия ЦОК с молекулярно-биологическими подтипами и степенью злокачественности, которые являются важными прогностическими факторами. Необходимы дальнейшие исследования для возможности использования ЦОК в качестве дополнительного критерия или фактора прогноза при раке молочной железы.