Диагностика микоплазменных, вирусных и хламидиозных инфекций свиней методом полимеразной цепной реакции в хозяйствах Средней Сибири

В последние годы среди болезней инфекционной патологии широкое распространение получил микоплазмоз свиней. Патогенными видами микоплазм для свиней являются M. hyopneumoniae, M. hyorhinis, M. hyosynoviae, помимо данных видов микоплазм, выделены штаммы, которые не идентифицированы.

Также у свиней обнаружены и уреаплазмы. В связи с контаминацией спермы хряков и абортированных эмбрионов они обладают патогенными свойствами. При искусственном осеменении свиноматок подоб- ной спермой отмечают низкую оплодотворяемость и значительное количество мертворожденных поросят. Значение уреаплазм в патологии свиней изучено недостаточно.

Факторами патогенности микоплазм является их способность прикрепляться к респираторному эпителию, оказывать на него деструктивное действие, выделение токсических продуктов метаболизма, конкуренция с клеткой-хозяином за субстраты энергетического и белкового обменов и нарушение иммунологического состояния тканей. По данным [6], от 30 до 80 % поголовья свиней в мире заражены этим видом микоплазм. Зачастую от свиней выделяют возбудителей бактериальных, вирусных и хламидийных инфекций совместно с микоплазмами [7, 8]. Современных данных о распространении бактериальных инфекций свиней в хозяйствах Средней Сибири недостаточно [9].

Такие вирусные болезни, как парвовирусная инфекция свиней (ПВИС), репродуктивный респираторный синдром свиней (РРСС), цирковирусная инфекция свиней (ЦВИС), а также хламидиозы и микоплазмозы свиней, могут протекать со схожей симптоматикой. Это поражение репродуктивных органов у хряков и свиноматок, аборты в разные сроки супоросности, рождение нежизнеспособного или инфицированного приплода и т.д. [2]. Поэтому одной клинико-эпизоотологической диагностики недостаточно для того, чтобы разобраться в этиологической структуре заболеваний свиней в хозяйствах. Необходима комплексная лабораторная диагностика с использованием современных методов исследования биоматериала, что позволяет более быстро поставить диагноз и на основании этого планировать меры борьбы и профилактики болезней свиней в конкретных хозяйствах.

В последние годы для выявления микоплазменной, вирусной и хламидиозной инфекций свиней применяют полимеразную цепную реакцию, которая позволяет быстро и точно выявить фрагменты генома возбудителей в биологическом материале [2, 10, 11, 12].

Цель исследований . Анализ выявления микоплазм, вирусов и хламидий у свиней из биологического материала методом ПЦР в хозяйствах Средней Сибири.

Материалы и методы исследований . В процессе изучения данной проблемы были проанализированы результаты исследований биоматериала, полученного из свиноводческих хозяйств Средней Сибири в период 2011–2013 гг.

Пробы биологического материала были получены от хряков, свиноматок, поросят, т.е. от животных разных половозрастных групп, подозреваемых в инфицировании, больных, вынуждено убитых, павших, абортированных плодов. Исследования проводили в хозяйствах, благополучных по бруцеллезу, листериозу, лептоспирозу и сальмонеллезу свиней. Исследование биоматериала от свиней на выявление геномов микоплазм, вирусов и хламидий проводили при помощи тест-систем ПЦР:

• -    на микоплазмоз, хламидиоз и вирус африканской чумы свиней (АЧС) (производитель ФГУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора);

• -    репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС), цирковирус свиней (ЦВС), парвовирусную инфекцию свиней (ПВИС) и вирус классической чумы свиней (КЧС) (производитель НПО «Нарвак»).

Применяли также набор препаратов для серодиагностики парвовирусной инфекции свиней в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) для выявления поствакцинальных или постинфекционных антител в сыворотках крови свиней (производитель РОАО «Росагробиопром»), набор реагентов для выявления антител к цирковирусу свиней второго типа (ЦВС-2) иммуноферментным методом (ИФА) «Циркосеротест» и набор реагентов для выявления антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней иммуно-ферментным методом РРСС-Серотест (производитель НПО «Нарвак»).

Количество положительных проб биоматериала от общего количества исследованных проб биоматериала, полученного от свиней по вышеперечисленным инфекциям, рассчитывали в процентах.

Результаты исследований и их обсуждение . В 2011 г. было исследовано незначительное количество проб биоматериала, полученного от свиней, что не позволило достоверно оценить степень распространения вирусных и микоплазменных инфекций свиней в хозяйствах Средней Сибири.

При исследовании сыворотки крови от абортировавшей свиноматки в ИФА обнаружены антитела ЦВС-2, в РТГА – антитела к ПВИС, а в ПЦР был выявлен геном микоплазмы, что указывает на циркуляцию ЦВС, вирусов ПВИС и микоплазм в свиноводческом хозяйстве.

При исследовании суспензии биоматериала от двух свиноматок в ПЦР геномы вирусов АЧС, КЧС, РРСС и микоплазм не были выявлены. В данной пробе выявлен геном ЦВС, а в другой пробе – геном вируса ПВИС, т.е. в хозяйстве отмечена циркуляция вирусов ПВИС и ЦВС.

В пробах биоматериала, полученного от поросят 13-, 53-, 83-, 85-, 143-дневного возраста, в ПЦР выявлены геномы вирусов РРСС – 80 %, ПВИС – 40, геном хламидий – 20 %. Геном микоплазм не выявлен, т.е. в хозяйстве отмечена циркуляция вирусов РРСС, ПВИС и хламидий.

В 2012 г. анализ исследований биоматериала от свиней показал, что в препуциальных смывах, полученных от хряков-производителей в ПЦР, геном ЦВС выявлен в 85,7 %, микоплазм – 50,0 %. В сперме хряков-производителей в ПЦР выявлены геномы вирусов ЦВС в 33,3 %, РРСС – в 33,3 %. Исследование сыво- ротки крови свиноматок показало, что в ИФА обнаружены антитела к вирусам ЦВС в 33,3 %, РРСС – в 28,6 %, а в РТГА к вирусу ПВИС – в 33,3 %. Геномы микоплазм и хламидий выявлены в ПЦР – соответственно 85,7 и 16,7 %.

При исследовании абортированных плодов в ПЦР геномы вирусов выявлены в случаях ЦВС (80,0 %), ПВИС (60,0 %), РРСС (60,0 %). Также выявлены геномы хламидий и микоплазм – соответственно 40,0 и 37,5 %. Исследование биоматериала ПЦР от поросят показало, что геном вирусов выявили ЦВС (56,8 %) и РРСС (43,8 %). Геном микоплазм выявили 55,8 %, хламидий – 32,3 %.

Одновременно из проб биоматериала в ПЦР выделяли геном ЦВС и микоплазм в 10,9 %, а также микоплазм и хламидий в 9,1 %. Реже геномы вируса РРСС и микоплазм в 1,8 %, а также геномы вирусов РРСС, ЦВС, ПВИС и микоплазм в 1,8 %.

Одновременное выделение геномов вирусов в различных сочетаниях и микоплазм подтверждает наличие в свиноводческих хозяйствах вирусно-микоплазменных ассоциаций свиней, а также наличие ассоциации микоплазм и хламидий.

Наличие микоплазмозов свиней в хозяйствах подтверждает высокий процент выявления генома микоплазм в ПЦР в биоматериале, полученном от свиноматок, – 85,7 %, поросят – 55,8, хряков – 50,0, абортированных плодов – 40,0 %.

Окончательный диагноз на микоплазмоз свиней устанавливают на основании выделения и идентификации возбудителя различными методами.

Предложенная тест-система ПЦР выявляет геном микоплазм, но не позволяет определить видовую принадлежность микоплазм. В данном случае можно использовать микробиологические методы их выделения, что требует длительного времени и навыков в культивировании микоплазм, но позволяет определить видовую принадлежность микоплазм, а у выделенных видов и штаммов определить чувствительность к антибиотикам. Это поможет более эффективно проводить в хозяйстве лечебные мероприятия и в свою очередь определиться с проведением специфической профилактики микоплазменной инфекции.

В 2013 г. в ПЦР геном ЦВС выявлен в 50,0 % от исследованных проб биоматериала, а геномы микоплазм в 28,6 %, хламидий – в 14,3 %. Геномы вирусов ПВИС и РРСС в ПЦР не выявлены.

В 2013 г. отмечено снижение циркуляции вирусов ПВИС, РРСС и ЦВС до 50,0 %, микоплазм – 28,6, хламидий – 14,3 %. Это, вероятно, связано с проведением в хозяйствах специфической вакцинопрофилакти-ки свиней против вирусных болезней РРСС, ПВИС и ЦВС.

Для того чтобы разобраться в истинной этиологической структуре болезней свиней и их ассоциациях в каждом отдельно взятом хозяйстве, необходимо проведение дополнительных диагностических исследований, как вирусологических, так и бактериологических, в сочетании с ПЦР и иммунологическими методами исследований, что позволит установить роль каждого инфекционного агента в возникновении болезней свиней и оптимизировать неспецифическую и специфическую профилактику в свиноводческих хозяйствах.

Заключение . Среди свинопоголовья методом ПЦР установлена циркуляция и активная циркуляция вирусов ЦВС, РРСС, ПВИС, а также микоплазм и хламидий в хозяйствах Средней Сибири.