Динамика микроорганизмов в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки ягнят в раннем постнатальном онтогенезе

В настоящее время для коррекции энтерального микробиоценоза предложен широкий выбор пробиотических препаратов . Однако физиологические особенности количественного содержания полезных микроорганизмов в различных биотопах энтерального тракта остаются не изученными , в том числе не изучен микробиоценоз двенадцатиперстной кишки и у овец , на различных этапах их жизни [1,3]. Поэтому целью данной работы являлось изучение количественного содержания микробов в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки ягнят в процессе их жизнедеятельности , до двухмесячного возраста . В качестве контроля представлены аналогичные показатели слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки взрослых овец .

Материалы и методика исследований

Для проведения опыта было использовано 15 взрослых овец 3-5 лет и 25 ягнят 1-60 суточного возраста романовской породы .

Содержание микроорганизмов в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки овец и ягнят изучали по методу А . А . Воробьева (2003). Суть метода : из проксимального , медиального и дистального участков двенадцатиперстной кишки животных проводили соскобы слизистой оболочки по 0,5 гр , остатки химуса на слизистой оболочке убирали стерильным ватным тампоном , и готовили ряд последовательных десятикратных разведений от 10¹ до 10¹². Первое разведение готовили на физиологическом растворе , выдерживали два часа при комнатной температуре , с целью разжижения муцина . Остальные разведения готовили на дистиллированной воде .

In article the data reflecting the maintenance microorganisms in mucous 12-perstnoj of a gut of lambs of early age.

Для определения количественного содержания указанных микроорганизмов использовали следующие элективные питательные среды : среду Блаурокка в модификации Гончарова Г . И . (1990) – для бифидобактерий . Для выделения лактобактерий использовали лактобакагар , энтерококкагар – для энтерококков , среду Эндо – для кишечной палочки , среду Сабуро – для грибов . Выделение аэробных спорообразующих бацилл проводили на МПА . Предварительно испытуемый материал прогревали при 80 ^о С в течение 20 минут . После чего инкубировали в термостате в течение 24 часов при температуре 37⁰ С . Учет результатов проводили через 24 часа , а грибов через 48 часов . Для учета результатов брали то , последнее разведение , из которого вырастало не менее 100 колоний . Идентификацию микроорганизмов проводили по морфологическим , тинкториальным и культуральным свойствам . Микробиологические питательные среды изготовлены ФГУП Государственным научным центром прикладной микробиологии и биотехнологии г . Обнинск Московской области . Приготовление и контроль стерильности используемых питательных сред были проведены нами в лабораторных условиях , согласно методических указаний и температурных режимов для каждой конкретной среды . Количество выделенных бактерий выражали в lg10 КОЕ г / мат . Полученные данные подвергались стандартной статистической обработке [2].

Результаты и их обсуждение .

Установлено, что бифидобактерии в слизистой оболочке суточных ягнят имели минимальную концентрацию 0,2 ± 0,2 lg КОЕ/г слиз. У ягнят семисуточного возраста содержание этих микроорганизмов в слизистой оболочке исследуемой кишки находилось в пределах 5,5 ± 0,1 lg КОЕ/г слиз. У ягнят пятнадцатисуточного возраста концентрация бифидофлоры в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки составляла 9,8 ± 0,1 lg КОЕ/г слиз. У тридцатисуточных животных слизистая оболочка исследуемой кишки также богата бифидобактериями -8,9 ± 0,1 lg КОЕ/г слиз. У ягнят двухмесячного возраста содержание этих микроорганизмов находилось на уровне 9,6 ± 0,1 lg КОЕ/г слиз. У взрослых овец концентрация бифидобактерий в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки равна 4,7 ± 0,3 lg КОЕ/г слиз.

В слизистой оболочке этой кишки у ягнят в возрасте 1 сутки лактобактерии находились на уровне 2,7 ± 0,1 lg КОЕ/г слиз. У семисуточных ягнят концентрация этих бактерий возрастала до 3,3 ± 0,2 lg КОЕ/г слиз. У пятнадцатисуточных ягнят лактобактерии находились в пределах 9,3 ± 0,2 lg КОЕ/г слиз. У ягнят месячного возраста содержание лактофлоры в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки уменьшалось до 5,9 ± 0,2 lg КОЕ/г слиз. У ягнят в возрасте два месяца концентрация лактобактерий в слизистой оболочке этой кишки составила 4,7 ± 0 lg КОЕ/г слиз.

У взрослых овец лактобактерии в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки находились в пределах 1,3 ± 0,3 lg КОЕ / г слиз .

Таблица – Содержание микроорганизмов в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки взрослых овец и ягнят раннего возраста ( М ± m lg КОЕ / г мат .; n =5; р≤ 0,05).

Примечание : р ≤ 0,05 (*); р ≤ 0,05 (**) хим / слиз .

Содержание эшерихий (E. colli) у односуточных ягнят составило 2,9 ± 0,2 lg КОЕ / г слиз . У животных семисуточного возраста накопление этих микроорганизмов в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки увеличилось до 3,5 ± 0,1 lg КОЕ / г слиз . Установлено , что в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки пятнадцатисуточных животных количественные параметры кишечной палочки равны 5,7 ± 0,3 lg КОЕ / г слиз . У ягнят тридцатисуточного возраста содержание кишечной палочки было на уровне 6,7 ± 0,2 lg КОЕ / г слиз . У шестидесятисуточных ягнят количество эшерихий в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки равно 6,6 ± 0,3 lg КОЕ / г слиз . У овец 3-5- летнего возраста концентрация эшерихий в слизистой оболочке этой кишки была 3,4 ± 0,2 lg КОЕ / г слиз .

Энтерококки по своему содержанию в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки ягнят односуточного возраста находились в пределах 2,7 ± 0,1 lg КОЕ / г слиз . У семисуточных ягнят содержание этих микроорганизмов было 2,8 ± 0,2 lg КОЕ / г слиз . У ягнят в возрасте 15 суток количество энтерококков в слизистой оболочке исследуемой кишки соответствовало 2,5 ± 0,1 lg КОЕ / г слиз . У ягнят , 88

достигших одного месяца жизни , концентрация данных микроорганизмов в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки бала равной 2,2 ± 0,1 lg КОЕ / г слиз . У шестидесятисуточных животных количество энтерококков в слизистой оболочке было 1,4 ± 0,2 lg КОЕ / г слиз . У взрослых овец содержание энтерококков в слизистой оболочке аналогичной кишки низкое 0,1 ± 0,1 lg КОЕ / г слиз .

Аэробные спорообразующие бациллы у односуточных ягнят количественно были равны 2,3 ± 0,1 lg КОЕ / г слиз . Содержание этих бактерий у семисуточных ягнят соответствовало 3,9 ± 0,3 lg КОЕ / г слиз . У ягнят пятнадцатисуточного возраста уровень этих микроорганизмов равен 3,0 ± 0,3 lg КОЕ / г слиз . У тридцатисуточных животных содержание аэробных спорообразующих бацилл в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки было 4,5 ± 0,3 lg КОЕ / г слиз . У двухмесячных животных концентрация представителей рода Bacillus составила 3,9 ± 0,3 lg КОЕ / г слиз . У взрослых животных содержание этих микроорганизмов в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки находилось на уровне 2,4 ± 0,2 lg КОЕ / г слиз .

Уровень грибов в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки ягнят уменьшался по мере накопления бактериальной массы от 1,3 ± 0,2 lg КОЕ / г слиз у односуточных ягнят до 0,1 ± 0,1 lg КОЕ / г слиз к шестидесятисуточному их возрасту . У взрослых животных грибы в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки находились в пределах 1,1 ± 0,1 lg КОЕ / г слиз .

Выводы

• 1.    Представленные данные показывают , что микробиоценоз слизистой оболочки двенадцати перстной кишки у ягнят с 1 по 60 сутки находится на стадии своего формирования .

• 2.    Полученные данные по содержанию изучаемых нами микроорганизмов у ягнят по отношению к взрослым овцам имеют отличия по всем исследуемым нами микроорганизмам , кроме грибов на :

бифидобактерии — 104,26%; лактобактерии — 261,54%; кишечная палочка — 94,12%; энтерококки — 1300%; аэробные спорообразующие бациллы — 62,5%. Уровень грибов в конце исследуемого периода был ниже уровня их у взрослых животных на 90,91%.