Добавка Винивет на основе продуктов пчеловодства как альтернатива кормовым антибиотикам в комбикормах для цыплят-бройлеров: бактерицидный и биостимулирующий эффект применения

Увеличение производства, повышение качества и снижение себестоимости яиц и мяса птицы — важнейшая задача птицеводства. Большое внимание в настоящее время уделяется обеспечению населения функциональными продуктами питания, поскольку питание — один из важнейших факторов сохранения здоровья и генофонда нации. Правильное питание способствует профилактике заболеваний, продлению жизни, созданию условий для повышения способности организма противостоять неблагоприятным воздействиям, для нормального роста и развития детей. Диетические свойства продуктов птицеводства в сочетании с их обогащением биологически активными компонентами позволяет направленно влиять на содержание важнейших нутриентов и обеспечивать их соответствие медико-биологическим требованиям. Спрос на качественную и экологически безопасную продукцию возрастает (1-3).

Одно из направлений при реализации концепции функционального питания предполагает ограничения в использовании антибиотиков при выращивании птицы для получения мяса и яйца без остаточных количеств антибиотиков (4, 5). Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ, WHO — World Health Organization) отмечает растущую микробную резистентность (в том числе из-за перехода антибиотиков в продукцию животноводства и, как следствие, в пищу человека), что может привести к распространению бактерий, устойчивых к антибактериальным средствам, и лекарственно устойчивых инфекций, представляющих угрозу для человечества (6-8). Не меньшая опасность заключается в распространении подобных инфекций среди поголовья, в особенности племенного.

Не исключено, что эта угроза сильно недооценивается, поскольку у животных и человека практически не изучен состав и возможные изменения в поведении микробиома. Так, традиционно считается, что желудочно-кишечный тракт (ЖКТ) эмбрионов птиц стерилен (9-12), а формирование микробиоценоза пищеварительной системы птенцов происходит после вылупления в результате контакта с окружающей средой (13-15). Однако имеются данные, полученные методами классической микробиологии (16), а также с использованием ПЦР в реальном времени (17), которые указывают на способность микроорганизмов колонизировать ЖКТ птиц на стадии эмбрионального развития.

Перспективными источниками сырья для получения кормовых добавок с широким спектром действия представляются возобновляемые мало востребованные продукты пчеловодства, содержащие обширный комплекс витаминов, аминокислот, макро- и микроэлементов (18-20), вследствие чего они могут быть естественными стимуляторами физиологобиохимических процессов в организме птицы, способствуя улучшению вкусовых качеств и экологической чистоты конечной продукции птицеводства. Следует отметить, что бактерицидные свойства меда, перги, прополиса исследованы достаточно широко (21), в то время как аналогичный эффект такого побочного продукта, как мерва, практически не изучался.

Мы впервые провели исследования, которые показали возможность замены кормового антибиотика стафак 110 («Phibro Animal Health Corp.», США), широко применяемого в промышленном птицеводстве России, добавкой на основе продуктов пчеловодства винивет ( ООО «Русоборотэкс-порт», г. Казань, Россия). Установлено, что эта добавка не уступала антибиотику по изученным показателям (состав микрофлоры слепых отростков кишечника цыплят, микроморфология отделов желудочно-кишечного трак-214

та и печени), при том также способствуя увеличению скорости роста птицы.

Цель нашей работы — сравнение биостимулирующего и бактерицидного эффекта кормовой добавки винивет и кормового антибиотика.

Методика . Объектом исследования были три группы цыплят-бройлеров кросса Cobb-500 с 1- до 35-суточного возраста (виварий ФГУП «Загорское ЭПХ ВНИТИП», Московская обл.). Кормление осуществлялось вволю сухими полнорационными комбикормами по нормам питательности согласно рекомендациям Всероссийского научно-исследовательского и технологического института птицеводства (ВНИТИП, 2014) (22). Цыплята в контрольной I группе потребляли сбалансированные рассыпные полнорационные комбикорма (основной рацион — ОР). Птицу из II группы выращивали на аналогичном рационе, но с включением кормового антибиотика стафак 110 («Phibro Animal Health Corp.», США) в рекомендуемой производителем дозе 180 г/т комбикорма в течение периода наблюдений, а бройлеры в III опытной группе весь период откорма получали комбикорм без антибиотика, но с кормовой добавкой винивет на основе продуктов пчеловодства (ООО «Русоборотэкспорт», г. Казань, Россия) в дозе 5 кг/т комбикорма. В первые 3 сут бройлерам из всех групп давали одинаковый предстартерный комбикорм, в дальнейшем кормление осуществлялось согласно схеме опыта. Ветеринарные мероприятия выполняли в соответствии с принятым в хозяйстве планом вакцинаций. Птицу содержали в клетках R-15 (Германия) по 35 гол. в каждой группе без разделения по полу. Условия содержания соответствовали рекомендациям ВНИ-ТИП. Корм раздавали вручную.

Учитывали основные зоотехнические показатели птицы: живую массу в возрасте 7, 21, 35 сут (индивидуальным взвешиванием), сохранность поголовья, среднесуточный прирост живой массы; рассчитывали потребление и затраты корма на 1 кг прироста живой массы; определяли содержание витаминов и каротиноидов в печени, химический состав печени, грудной и бедренной мышц (по общепринятым методикам согласно действующим ГОСТ) (23).

Для гистологических исследований отбирали цыплят-бройлеров в возрасте 35 сут ( n = 21). В течение 1 ч после убоя брали образцы печени и эвисцерированный кишечный канал, которые фиксировали в 10 % растворе формалина в течение 1 сут. После промывки в проточной воде материал дегидратировали в спирте возрастающей концентрации (70-96 %). Парафиновые срезы изготавливали на универсальном автоматизированном микротоме HM-325 («Microm international GmbH», Германия). Общую морфологию изучали при помощи светового микроскопа («Nikon», Япония) после окрашивания гистологических срезов гематоксилином и эозином. Микрофотосъемку и микроскопическую морфометрию со статистической обработкой результатов осуществляли с помощью совмещенной с микроскопом сертифицированной программы анализа изображения ImageScope C (ООО «Системы для микроскопии и анализа», Россия).

Состав микробного сообщества в слепых отростках кишечника исследовали методом T-RFLP-анализа (terminal restriction fragment length polymorphism) (24).

Статистическую обработку зоотехнических показателей и данных T-RFLP-анализа выполняли по общепринятым методикам (25).

Результаты. Необходимо отметить, что общий зоотехнический фон исследований был высоким. Во всех группах отмечалась 100 % сохранность поголовья, в целом затраты корма на 1 кг прироста живой массы соответствовали нормативным и не превышали 1,6 кг. Среднесуточ- ный прирост живой массы бройлеров из контрольной группы составил 60,21 г (табл. 1).

Как видно из представленных данных, использование кормового антибиотика стафак 110 обеспечивало более высокую скорость роста бройлеров. Так, живая масса цыплят из II группы превышала контроль в 6-, 14-, 21- и 28-суточном возрасте на соответственно 2,63; 1,99; 3,22 и 0,51 %, а к концу выращивания разность по средней живой массе во II и в I группе составила 2,04 %. При этом конверсия корма улучшилась по сравнению с контролем на 3,53 %.

1. Зоотехнические показатели выращивания бройлеров кросса Cobb-500 при использовании антибиотика стафак 110 и кормовой добавки винивет на основе продуктов пчеловодства ( M ± m , виварий ФГУП «Загорское ЭПХ ВНИТИП», Московская обл.)

Показатель	Группа
	I (контроль)	п II (cтафак 110)	III (винивет)
Сохранность поголовья, %	100	100	100
Живая масса в разном возрасте, г:
1 сут	40,0	40,0	40,0
6 сут	152,54±8,60	156,54±1,83	156,37±1,80
14 сут	435,37±7,85	444,03±10,07	420,64±8,75
21 сут	873,71±14,12	901,82±20,86	868,64±13,99
28 сут Средняя живая масса, кг:	1462,51±19,45	1470,00±29,40	1471,48±21,23
в возрасте 35 сут	2086,8	2129,42, или +2,04 %	2104,81
в том числе
у петушков	2120,00±26,78	2232,15±56,47	2233,86±35,45 ∗
у курочек	2053,60±34,28	2026,68±33,64	1975,75±26,33
Затраты корма на 1 гол., кг Затраты корма на 1 кг	3,195	3,098	3,100
прироста живой массы, кг	1,557	1,502	1,508
Среднесуточный прирост живой массы, г	60,21	61,45	60,73

Прим еч ани е. Стафак 110 («Phibro Animal Health Corp.», США) и винивет (ООО «Русоборотэкспорт», г. Казань, Россия) добавляли к основному рациону в дозе соответственно 180 г/т и 5 кг/т.

^∗ У петушков в III группе различия с контролем достоверны при р < 0,05.

Полученное согласуется с результатами многочисленных исследований (26), в которых доказано, что использование кормовых антибиотиков вследствие угнетения патогенной микрофлоры желудочно-кишечного тракта не только способствует повышению сохранности птицы, но и оказывает ростостимулирующее влияние, что особенно заметно на ранних сроках откорма бройлеров.

Как известно, продукты пчеловодства обладают выраженным антибиотическим действием на патогенную микрофлору желудочно-кишечного тракта (21). Вместе с тем по эффективности они все-таки уступают кормовым антибиотикам, о чем свидетельствуют и зоотехнические показатели, полученные нами в эксперименте. Действительно, использование кормового антибиотика стафак 110 в дозе 180 г/т корма обеспечивало более высокую живую массу у цыплят во II группе в сравнении как с контролем, так и с показателями в группе, получавшей винивет (5 кг/т корма).

Несмотря на меньшую эффективность добавки винивет, ее применение в дозе 5 кг/т корма все же оказало ростостимулирующее влияние на продуктивность бройлеров. Так, живая масса цыплят в III группе была выше контроля на 0,61 и 0,86 % соответственно в 28- и 35-суточном возрасте (различия у петушков достоверны при р < 0,05), а затраты корма на 1 кг прироста живой массы снижались на 3,15 %, что подтверждает целесообразность использования винивета в кормлении мясной птицы. На ранних сроках выращивания (в возрасте 14 и 28 сут) применение винивета приводило к незначительному отставанию в росте (соответственно 3,38 и 0,58 %) 216

у бройлеров из III группы по сравнению с контролем.

• 2.    Содержание витаминов (мкг/г) в печени 35-суточных бройлеров кросса Cobb-500 при использовании антибиотика стафак 110 и кормовой добавки винивет на основе продуктов пчеловодства (виварий ФГУП «Загорское ЭПХ ВНИТИП», Московская обл.)

  Показатель		Группа
  		I (контроль)       II (cтафак 110)		III (винивет)
  Витамин А		205,03	191,53	180,81
  Витамин Е		9,20	5,73	10,03
  Витамин В2		10,77	10,14	10,11
  Каротиноиды		4,69	3,03	4,77
  Примечание. Стафак	110 («Phibro Animal Health Corp.»		, США) и винивет (ООО «Русэборотэкс-
  порт», г. Казань, Россия) добавляли к основному рациону в			дозе соответственно 180 г/т и 5 кг/т. Со-
  гласно использованной методике, различия считаются достоверными, если по				содержанию витаминов А и
  Е разница превышает 20 %,	по витамину В2 и каротиноидам —		15 %, то есть	отмечено достоверное сни-
  жение содержания витамина Е и каротиноидов во II группе.

• 3.    Результаты T-RFLP-анализа относительного (%) количественного состава микроорганизмов в содержимом слепых отростков кишечника у 35-суточных бройлеров кросса Сobb-500 при использовании антибиотика ста-фак 110 и кормовой добавки винивет на основе продуктов пчеловодства ( Х ± х , виварий ФГУП «Загорское ЭПХ ВНИТИП», Московская обл.)

Данные, представленные в таблице 2, указывают на то, что использование добавок, обладающих антисептическим действием, может приводить к снижению депонирования витаминов в печени бройлеров. Так, содержание витамина Е и каротиноидов у бройлеров II группы, получавших антибиотик cтафак 110, уменьшалось относительно контроля достоверно (соответственно на 37,70 и 35,40 %), тогда как при применении кормовой добавки винивет различия по депонированию витаминов А и В2 не превышали ошибку метода (соответственно 11,80 и 6,12 %), а накопление витамина Е и каротиноидов при этом даже немного возросло (соответственно на 9,02 и 1,71 %), что свидетельствует об уменьшении негативного влияния этого природного антисептика на микробное сообщество желудочно-кишечного тракта у бройлеров из III группы.

Группа микроорганизмов	Группа
	I (контроль)	II (cтафак 110)	III (винивет)
	Нормальная	микрофлора
Сумма целлюлозолитиков	14,28±0,30	12,78±0,40	22,22±0,50
Семейство Eubacteriaceae	7,78±0,04	8,35±0,05	9,49±0,08
Семейство Ruminococcaceae	2,32±0,01	3,10±0,01	2,53±0,01
Семейство Lachnospiraceae	4,18±0,02	1,26±0,00	10,20±0,03
Peptostreptococcus sp.		0,07±0,00
Порядок Selenomonadales	10,29±0,20	12,05±0,20	13,38±0,30
Семейство Lactobacillaceae	6,15±0,04	6,47±0,03	5,50±0,04
Семейство Вacillaceae	7,89±0,03	7,27±0,04	5,77±0,01
Порядок Bacteroidales	8,78±0,02	6,98±0,02	8,59±0,02
Bifidobacterium sp.	1,49±0,00	1,92±0,01	0,94±0,00
Нежелательные		микроорганизмы
Порядок Actinomycetales	6,12±0,02	2,70±0,01	6,04±0,02
Семейство Enterobacteriaceae	4,68±0,02	3,08±0,01	1,23±0,01
Семейство Clostridiaceae	9,52±0,03	5,85±0,02	12,06±0,02
П	атогенные микроорганизмы
Семейство Staphylococcaceae	1,38±0,00	1,58±0,01	0,47±0,00
Fusobacterium sp.	2,71±0,01	1,09±0,01	1,92±0,01
Семейство Peptococcaceae	3,31±0,01	0,61±0,00	1,46±0,00
Семейство Campylobacteraceae	0,17±0,03	0,16±0,01	0,20±0,00
Семейство Pasteurellaceae	3,37±0,20	1,99±0,01
Некультивируемы		е микроорганизмы
Сумма	18,56±0,30	33,34±1,20	17,46±0,60
	Транзитная	микрофлора
Семейство Pseudomonadaceae	1,30±0,01	2,14±0,01	2,78±0,01

Прим еч ани е. Стафак 110 («Phibro Animal Health Corp.», США) и винивет (ООО «Русэборотэкспорт», г. Казань, Россия) добавляли к основному рациону в дозе соответственно 180 г/т и 5 кг/т. Прочерк означает, что численность микроорганизма ниже предела достоверного определения методом T-RFLP.

Исследование количественного состава микробного сообщества методом T-RFLP выявило значительное снижение доли патогенной и условно-патогенной микрофлоры в слепых отростках кишечника бройлеров при использовании винивета. Численность бактерий семейства Staphylococcaceae , рода Fusobacterium sp., семейств Pertococcaceae и Pasteurellaceae достоверно (p ≤ 0,05) уменьшилось в сравнении с контролем на 0,91; 0,79; 1,85 и 3,37 %, а сумма целлюлозолитических бактерий возросла на 7,94 % (табл. 3).

Гистологические исследования показали, что светооптически во всех изучаемых группах стенка кишечного канала у особей характеризовалась общими чертами структурной организации и была дифференцирована на несколько слоев: слизистый (внутренний), который представлен эпителиальным покровом, основой слизистой, мышечной пластиной слизистой и подслизистым слоем; мышечный (средний), состоящий из двух пластов гладких миоцитов (внутренний циркулярный и наружный продольный); серозный (наружный), включающий клетки мезотелия и соединительнотканный пласт (рис. 1-3, А, Б).

Микроморфологически печень была представлена рядами гепатоцитов, разделенными кровеносными капиллярами с четкой дифференциацией центральных вен и печеночных триад (см. рис. 1-3, В).

У цыплят-бройлеров из III группы, получавших в качестве добавки к основному рациону исследуемый препарат на основе натуральных продуктов пчеловодства, были выявлены структурные преобразования тонкого отдела кишечного канала, направленные на усиление его всасывательной способности, барьерной и моторной функций. Они выражались в достоверном (p ≤ 0,05) увеличении толщины слизистой оболочки, удлинении ее кишечных ворсинок, увеличении плотности крипт и их углублении, возрастании общей площади всасывательной поверхности (см. рис. 3, А, табл. 4). При этом во II группе, где использовался кормовой антибиотик стафак 110, толщина слизистой оболочки уменьшалась, что может свидетельствовать о снижении функциональной активности кишечного канала (см. рис. 2, 3, А, Б).

По результатам микроморфологического анализа мышечной оболочки кишечного канала в подопытных группах по сравнению с контрольной отмечалось ее утолщение (в частности, в III группе в тонкой кишке — на 40,3 %, в толстой — на 30,1 %), что свидетельствовало об усилении его моторной функции у птицы, получавшей в дополнение к основному рациону кормовую добавку винивет.

По толщине серозной оболочки стенки кишечного канала достоверных различий между группами не выявили.

Изучение микроморфологии печени показало (см. рис. 3, В), что у цыплят из III группы паренхима органа пронизана большим количеством кровеносных капилляров, тесно связанных с печеночными балками, характеризуется умеренной кровенаполненностью, деструктивных изменений в состоянии печени не выявили. Таким образом, активизация трофических процессов в печени, вызванная введением в рацион винивета, не сопровождается токсическим воздействием на печеночную ткань, что подтверждается ее структурой и свидетельствует о безопасности применения исследуемого препарата в птицеводстве в качестве кормовой добавки.

А

Б

Рис. 1. Микроморфология стенки тощей кишки (А) , прямой кишки (Б) и печени (В) у 35-суточных бройлеров кросса Сobb-500 на рационе без кормовых добавок и антибиотиков: 1 — слизистая оболочка, 2 — мышечная оболочка, 3 — серозная оболочка, 4 — эпителиоциты ворсинок, 5 — бокаловидные клетки, 6 — гепатоциты, 7 — центральная вена, 8 — кровеносные капилляры. Окрашивание гематоксилином и эозином; увеличение ½100 (А, Б) и ½400 (В), световая микроскопия («Nikon», Япония).

В

А

Б

Рис. 2. Микроморфология стенки тощей кишки (А) , прямой кишки (Б) и печени (В) у 35-суточных бройлеров кросса Сobb-500 на рационе с кормовым антибиотиком (стафак 110, 180 г/т корма) : 1 — слизистая оболочка, 2 — мышечная оболочка, 3 — серозная оболочка, 4 — эпителиоциты ворсинок, 5 — бокаловидные клетки, 6 — гепатоциты, 7 — центральная вена, 8 — кровеносные капилляры. Окрашивание гематоксилином и эозином; увеличение ½100 (А), ½200 (Б) и ½400 (В), световая микроскопия («Nikon», Япония).

• 4.    Сравнительная характеристика морфометрических показателей кишечника у 35-суточных бройлеров кросса Сobb-500 при использовании антибиотика стафак 110 и кормовой добавки винивет на основе продуктов пчеловодства ( M ± m , виварий ФГУП «Загорское ЭПХ ВНИТИП», Московская обл.)

  Группа

  
  

  Толстая кишка (оболочки), мкм Тонкая кишка (оболочки), мкм слизистая мышечная слизистая мышечная

  
  

  I (контроль, основной рацион — ОР)   646,00±3,23      68,40±1,43

  II (ОР + стафак 110, 180 г/т)           632,00±2,11       72,20±1,54

  III (ОР + винивет, 5 кг/т)            695,00±3,54      89,00±2,14

  Прим еч ани е. Стафак 110 («Phibro Animal Health Corp.», США)

  
  

  732,00±5,14

  697,00±3,54

  837,00±3,54

  и винивет (ООО

  
  

  порт», г. Казань, Россия) добавляли к основному рациону в дозе соответственно 180 г/т и 5 кг/т.

  
  

  101,00±6,02

  138,00±6,78

  141,00±6,02

  «Русоборотэкс-

  
  

  А

  Б

  

  Рис. 3. Микроморфология стенки тощей кишки (А) , прямой кишки (Б) и печени (В) у 35-суточных бройлеров кросса Сobb-500 на рационе с кормовой добавкой винивет на основе продуктов пчеловодства: 1 — слизистая оболочка, 2 — мышечная оболочка, 3 — серозная оболочка, 4 — эпителиоциты ворсинок, 5 — бокаловидные клетки, 6 — гепатоциты, 7 — центральная вена, 8 — кровеносные капилляры, 9 — печеночная триада. Окрашивание гематоксилином и эозином; увеличение ½200 (А, Б) и ½400 (В), световая микроскопия («Nikon», Япония).

  
  

  В

  
  
  

Итак, результаты гистологических исследований и анализа микрофлоры желудочно-кишечного тракта бройлеров согласуются с зоотехническими показателями при выращивании птицы и указывают на то, что полученная на основе продуктов пчеловодства кормовая добавка винивет оказывает ростостимулирующее действие за счет обеспечения птицы комплексом биологически активных веществ, благотворно влияет на состояние желудочно-кишечного тракта, увеличение всасывательной поверхности слизистой оболочки тонкого отдела кишечника вследствие удлинения ворсин, углубления складок и крипт, утолщения мышечной оболочки толстого кишечника. Кроме того, препарат обладает антисептическими свойствами, следовательно, может использоваться для замены кормовых антибиотиков при выращивании бройлеров.