Доклиническое изучение безопасности геля, содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis

СONVOLVULUS ARVENSIS ЭКСТРАКТИ САҚЛОВЧИ ГЕЛНИНГ ХАВФСИЗЛИГИНИ КЛИНИК ОЛДИ ЎРГАНИШ

Сonvolvulus arvensis экстракти сақловчи гелнинг клиник олди токсикологик тадқиқоти жинсий етилган лаборатория жониворларида (сичқон, каламуш, қуён) ўтказилди. Аниқландики, жониворлар терисига ҳам бир маротаба, ҳам кўп маротаба суритилганда заҳарли таъсири аниқланмади. Шу билан бирга, қонни гематологик ва биокимёвий кўрсаткичларида статистик аҳамиятли ўзгаришлар аниқланмади.

Калит сўзлар: гель, заҳарлилик, ферментлар, физиологик кўрсаткичлар.

Актуальность. Вьюнок полевой - Сonvolvulus arvensis L. является одним из самых распространенных сорных растений Средней Азии. Биологически активные вещества содержащихся в свежих листьях данного растения обладает прекрасным ранозаживляющим свойствам[7,8]. В экспериментах на животных показано, что сухой экстракт Сonvolvulus arvensis обладает отчетливой противовоспалительной активностью[9,10,11]. При этом данный экстракт обладает ярко выраженным антиоксидантным действием[6]. Последние годы в целях устранения системного действия нестероидных противовоспалительных средств используются лекарственные формы препаратов для местного применения[1,2,3,5]. Учитывая довольно широкую распространенность воспалительных заболеваний, в том числе асептического артрита различного генеза, представляется важным разработка нового противовоспалительного средства для местного применения на основе растительных средств, обладающих противовоспалительным действием. При этом решающим фактором является не только высокая фармакологическая активность, но и безвредность препарата.

Цель исследования. Для получения результатов определяющих степень безопасности и риска клинического применения геля, разработанной на основе экстракта Сonvolvulus arvensis, были проведены доклинические токсикологические исследования.

Материалы и методы исследования. Все исследования проводили на здоровых половозрелых животных, прошедших карантин не менее 12-14 дней. Токсикологические исследования 5% геля, содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis проводилась в лаборатории МНИЛ ТМА на основании нормативных и методических документов Государственной системы Республики Узбекистан с учетом требований Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных исследований или в иных научных целях (ЕТS № 123, Страсбург, 1986 г.), требований Национального руководства по содержанию и использованию лабораторных животных. Были использованы половозрелые мыши обоего пола (n=24, массой тела 20-24 г), половозрелые белые крысы обоего пола (n=100, массой тела 140150 г) и кролики (n=12, массой тела 2,0-2,6 кг). Оценка острой токсичности осуществляли путем однократного нанесения на поверхность кожи очищенной шерсти спины 5% геля содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis в дозе 1000; 2000 и 3000 мг/кг с размеров 2х2 см у мышей, 4х4 см у крыс. За общим состоянием лабораторных животных наблюдение велось ежечасно в течение первых суток, и один раз в сутки в последующие 13 дней эксперимента (общий срок наблюдения 14 суток). Аллергизирующие свойства 5% геля содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis изучали на белых крысах и кроликах методом накожной аппликации и конъюнктивальной пробы [4]. В опытах по изучению субхронической токсичности изучаемый 5% гель содержащий экстракт Сonvolvulus arvensis наносили на очищенную поверхность спины крыс одной группе однократно, а другим группам двух и трехкратно в дозе 20 мг/см2ежедневно в течение 30 дней. Животным контрольной группы (группа сравнения) наносили гель без содержания препарата (плацебо). До начала исследования и в течении всего эксперимента (острый и субхронический опыт) после ежедневного нанесения изучаемого средства регистрировались клинические признаки возможной интоксикации: общее состояние животных, потребление корма и воды, изменение массы тела (каждые три дня), особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности, координация движений, реакция на внешние раздражители, частота и глубина дыхательных движений, состояние шерстного и кожного покрова, окраска слизистых оболочек, положение хвоста, количества и вид фекальных масс. Во время всего эксперимента все лабораторные животные содержались в стандартных условиях вивария и находились на полноценном лабораторном пищевом рационе при свободном доступе к воде. Через сутки после последнего процедуры у животных всех групп брали кровь из хвостовой вены и определяли формулу показателей крови на гематологическом анализаторе ВС-3000 (Mindray, Китай). Затем под легким наркозом крыс путем одномоментной декапитации собирали кровь для биохимических исследований, а внутренние органы после макроскопического исследования фиксировали в 12% растворе формалина для морфологических исследований. В сыворотке крови определяли активность аспартатаминотранс-феразы (АсАТ), аланинамино-трансферазы (АлАТ), щелочную фосфатазу (АLP) и гамма глутатионтрансферазы (GGT); содержание глюкозы(Glucosa), холестерина(Chol), общего белка(TP), альбумина(Albumin), общего билирубина(Tbil) (наборы реактивов фирмы CYPRESS Diagnostics, Бельгия) на биохимическом анализаторе ВА-88А (Mindray, Китай).

Полученные результаты подвергали статистической обработке с использованием стандартного пакета программ Biostat 2009 по общеизвестным методам вариационной статистики с оценкой значимости показателей (M±m) и различий рассматриваемых выборок по t-критерию Стьюдента. Различия в сравниваемых группах считались достоверными при уровне значимости 95% (p<0,05).

Результаты исследований. Результаты проведенных экспериментальных исследований показали, что после нанесения на поверхность очищенной кожи даже в дозе 3000мг/кг на животного 5% геля содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis признаков интоксикации у животных не отмечалось. В связи с отсутствием падежа подопытных животных, рассчитать ЛД 50 (средне-смертельную дозу) не представилось возможным. Полученные данные экспериментальных исследований по изучению острой токсичности позволили отнести изученный гель содержащий экстракт Сonvolvulus arvensis к относительно безвредным лекарственным средства. Изучение местного действия 5%-го геля содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis на кожные покровы и слизистую оболочку глаз, а также способность проникать через неповреждённую кожу проводилось на белых крысах и кроликах. Гель содержащий экстракт Сonvolvulus arvensis наносили на кожу экспериментальных животных из расчета 20 мг/см². Реакция кожи регистрировалась по окончанию 4-х часовой экспозиции крыс, через 1 и 16 часов после однократной аппликации. Установлено, что изучаемый гель содержащий экстракт Сonvolvulus arvensis не вызывает раздражения кожи. Изучена токсичность при многократном нанесении на кожу белых крыс, получавших 20 мг/см² накожных аппликаций 5% геля содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis. Установлено, что в течение всего эксперимента гибели животных и клинических признаков интоксикации не наблюдалось.

Следовательно, сделать вывод, что исследованный гель содержащий экстракт Сonvolvulus arvensis не обладает раздражающим действием на кожу при многократном использовании.

Для выявления кожно- резорбтивного действия препарата белых мышей и белых крыс фиксировали в специальных стаканах, хвосты подопытных животных обрабатывали слоем геля содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis на 4 часа. После окончания эксперимента хвост обмывали водой с мылом. В течения 3 недель наблюдения за экспериментальными животными признаков интоксикации и их гибели не отмечено. В конъюнктивальный мешок левого глаза кроликов однократно вносили 10 мг геля содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis, а правый глаз служил контролем.

Под влиянием препарата через две минуты отмечалась легкая гиперемия, слезотечение, через 3-4 минуты явления раздражения полностью исчезали.

В ходе исследований в субхроническом эксперименте между животными, получавших различные дозы исследуемого препарата, и контрольными животными, получавших плацебо, статистически значимых различий по массе тела и ее приросту не было выявлено (таблица 1).

Таблица 1

Вес животных в динамике

Группы животных	Вес животных, г (препарат)
	Контроль (плацебо)	5% гель экстракта Сonvolvulus arvensis
		однократно	двукратно	трехкратно
Исходный вес крыс	145,7± 1,8	149,3 ± 1,9	148,0 ± 2,0	150,2 ± 2,0
Вес через 30 дней	179,0 ± 2,7*	181,0 ± 3,2*	181,3 ± 3,1*	184,3 ± 2,6*

Примечание: *-статически значимые различия по сравнению с исходным.

Таблица 2

Масса внутренних органов

Органы	Масса внутренних органов (препарат)
	Контроль (плацебо)	5% гель экстракта Сonvolvulus arvensis
		однократно	Двукратно	трехкратно
Печень, г	5,19±0,20 2,91±0,13	5,22±0,22 2,88±0,11	5,41±0,29 2,97±0,12	5,50±0,22 2,99±0,08
Почки, г	1,29±0,03 0,72±0,02	1,31±0,06 0,73±0,04	1,39±0,04 0,76±0,02	1,30±0,03 0,70±0,01
Селезенка, г	1,21±0,03 0,67±0,02	1,32±0,10 0,73±0,06	1,27±0,05 0,70±0,03	1,12±0,03 0,65±0,01
Желудок, г	1,85±0,05 1,13±0,02	1,88±0,05 1,18±0,01	1,87±0,04 1,17±0,02	1,89±0,07 1,20±0,01
Сердца, г	0,80±0,02 0,45±0,02	0,78±0,02 0,43±0,02	0,80±0,02 0,44±0,01	0,76±0,02 0,43±0,01
Легких, г	1,52±0,07 0,84±0,04	1,35±0,07 0,75±0,05	1,44±0,05 0,79±0,03	1,53±0,04 0,83±0,03
Мозг, г	1,60±0,04 0,89±0,03	1,53±0,07 0,85±0,04	1,59±0,04 0,87±0,03	1,55±0,04 0,82±0,02

Примечание : в числителе абсолютный, а в знаменателе относительный вес органов.

Как видно из данных таблицы 2, статистически значимых различий по абсолютной и относительной массе внутренних органов между группами животных, нанесенных различные дозы опытных образцов геля содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis, по сравнению с контрольными животными(плацебо), в ходе исследования не отмечалось. Результаты гематологических исследований показали, что у крыс после нанесения препарата не выявлено токсических эффектов в отношении системы крови. После длительной обработки гелем содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis у лабораторных животных не наблюдались выраженные изменения биохимических показателей сыворотки крови, которые могли бы свидетельствовать о токсических изменениях внутренних органов (таблица 3).

Таблица 3

Некоторые биохимические показатели крови при исследовании субхронической токсичности геля содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis

Показатели	Группы
	Контроль (плацебо)	5% гель экстракта Сonvolvulus arvensis
		однократно	Двукратно	трехкратно
АлАТ, Ед/л	69,65±7,74	65,81±5,60	73,11±3,59	61,91±4,29
АсАТ, Ед/л	109,17±10,51	100,16±9,11	93,50±10,09	97,67±8,19
АLP, Ед/л	317,00±29,38	312,20±24,92	324,38±31,12	375,15±25,72
GGT, Ед/л	2,67±0,48	2,33±0,41	3,00±0,43	3,17±,46
Tbil, мкмоль/л	20,52±1,33	23,61±1,59	19,51±1,54	20,18±2,09
Chol,мг/дл	58,65±5,38	62,93±4,85	59,01±4,86	56,33±5,06
Glucosa, ммоль/л	5,02±0,48	5,62±0,43	4,92±0,49	5,92±0,63
TP, г/л	87,78±6,51	89,05±6,64	83,93±5,58	87,51±8,09
Albumin, г/л	45,48±4,05	46,28±4,12	39,40±4,04	45,41±5,58

При визуальном осмотре внешнего состояния тела, проведении макроскопического патолого-анатомического исследования внутренних поверхностей и проходов, полости черепа, грудной, брюшной и тазовой полостей с находящимися в них органами и тканями, шеи с органами и тканями, а также в месте нанесения геля содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis морфологических признаков отклонений от общепринятой нормы, связанных с действием исследуемого препарата, выявлено не было. Результаты полученные в остром опыте по изучению действия геля содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis на трех видах лабораторных животных обоего пола: мышах, крысах, и кроликах – позволило установить, что препарат не вызывает токсических изменений в важнейших органах, не проявляет местно-раздражающего и аллергизируюшего действия.

На основании результатов собственных исследований установлено, что гель содержащий экстракт Сonvolvulus arvensis не оказывает отрицательного воздействия на состояние здоровья животных, не оказывает местно раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки. Полученные результаты проведенных экспериментальных исследований свидетельствуют об отсутствии у геля содержащего экстракт Сonvolvulus arvensis патоморфологических эффектов, указывающих на наличие хронической токсичности.

Выводы.

• 1 .Гель содержащий экстракт Сonvolvulus arvensis относится к числу малотоксичных средств.

• 2 .Длительное накожное применение не оказывало отрицательного действия на рост и развитие у экспериментальных животных.

• 3 .Судя по данным биохимических и гематологических исследований гель содержащий экстракт Сonvolvulus arvensis как при однократном, так и при повторном нанесении не оказывает статистически значимых изменений со стороны внутренних органов.