Фармакогностическое и фармакологическое исследование сырья боярышника

В настоящее время наметилась тенденция ко все более широкому использованию фитопрепаратов как для лечения, так и для профилактики различных заболеваний. Это связано с тем, что растительные лекарственные средства или фитопрепараты, как правило, сочетают в себе высокую активность терапевтического действия и относительную безопасность.

Сердечно-сосудистые заболевания в настоящее время являются основной причиной смертности в мире, поэтому остро стоит вопрос о профилактике и своевременном лечении данных заболеваний. В этой связи интерес представляют препараты на основе боярышника. Растения рода Боярышник ( Crataegus ) являются широко распространенными в РФ, препараты на основе цветков и плодов боярышника применяются в научной и народной медицине в качестве кардиотонических средств [2, 4].

Ведущей группой биологически активных веществ сырья являются флавоноиды. В цветках

и плодах содержатся флавоноловые гликозиды, такие как гиперозид и кверцитрин, а также флавоновые гликозиды, в частности, витексин [4, 5]. Важно отметить, что флавоноид гиперозид является основным биологически активным веществом такого растения как зверобой продырявленный. В ходе проведенных ранее исследований уже доказано наличие у травы зверобоя антидепрессантной и диуретической активности [3, 6]. Анализируя результаты фармакологических исследований травы зверобоя продырявленного, представляется возможным предположить наличие данных эффектов для сырья боярышника кроваво-красного, что позволит существенно расширить сферу применения лекарственных средств на основе изучаемого растения. Кроме того, представляется интересным сравнительное фитохимическое исследование боярышника однопестичного ( Crataegus monogina Jacq.) как фармакопейного вида, являющегося родственным лекарственным растением боярышнику кроваво-красному ( Crataegus sanguinea Pall.).

Таким образом, целью данной работы является фармакологическое и фитохимическое исследование сырья боярышника.

Для осуществления поставленной цели нами решались такие задачи, как:

Исследование диуретической активности жидкого и густого экстрактов плодов боярышника кроваво-красного.

Исследование антидепрессантной активности жидкого и густого экстрактов плодов боярышника кроваво-красного.

Сравнительное фитохимическое исследование плодов, листьев и цветков боярышника кроваво-красного и боярышника однопестичного.

Материалы и методы. Для целей фармакологического анализа нами в лабораторных условиях был получен жидкий экстракт на основе воздушно-сухих плодов боярышника кровавокрасного. Сырье было заготовлено в Самарской области в 2013 году. Экстракт был получен в соотношении «сырье-экстрагент» 1:1. Экстрагентом служил 70 % спирт этиловый. Путем упаривания под вакуумом из жидкого экстракта был получен густой экстракт. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид в полученном лекарственном препарате составило 0,125%.

Исследование диуретической активности проводилось путем постановки экспериментов на крысах обоего пола массой 200-220 г. Контрольная и опытная группы состояли из десяти животных [1]. Экспериментальный препарат вводили внутрижелудочно через зонд в дозах 50 и 100 мг/кг на фоне 3% водно-спиртовой нагрузки (содержание спирта этилового в контроле эквивалентно опыту).

В ходе работы нами проводились доклинические исследования густого экстракта плодов боярышника кроваво-красного на белых беспородных крысах массой 220-240 г с использованием теста «Отчаяние». В качестве стандарта использовался амитриптилин, который вводили из расчета 5 мг на кг тела животного, густой экстракт боярышника вводили из расчета 25 мг на кг тела животного. В контроле использовали воду очищенную. Животные по очереди погружались в специальный цилиндр, наполненный на % водой. В течение пяти минут фиксировалось время активных попыток животных выбраться из воды.

Сравнительный фитохимический анализ сырья боярышника кроваво-красного и боярышника однопестичного проводился с использованием метода тонкослойной хроматографии (ТСХ). Извлечения на основе плодов, цветков и листьев некоторых растений рода Боярышник были получены с использованием ранее установленных нами оптимальных условий экстракции спиртом этиловым 70% 1 час [5]. Исследование качественного состава извлечений из сырья двух изучаемых видов растений проводилось с использованием хроматографических пластинок «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» в системе хлороформ-этанол-вода (26:16:3) с последующим проявлением пластинок раствором диазотированной сульфокислоты (ДСК) для обнаружения фенольных компонентов. Также проводилось проявление растворами фосфорно-молибденовой кислоты и серной кислоты (исследование терпеноидов). В качестве растворов свидетелей были использованы растворы государственных стандартных образцов (ГСО) рутина и ГСО гиперозида.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В ходе проведенных экспериментов было установлено, что внутрижелудочное введение жидкого экстракта плодов боярышника кровавокрасного в дозе 50 мг/кг за 4 ч опытного периода не приводит к достоверному изменению исследуемых показателей выделительной функции почек (рис. 1).

При этом введение жидкого экстракта плодов боярышника кроваво-красного в дозе 50 мг/кг за 24 ч эксперимента достоверно снижает показатели диуреза (на 21%) и натрийуреза (на 35%) в опытной группе по сравнению с контролем (р<0,05) (рис. 2).

В то же время, жидкий экстракт плодов боярышника кроваво-красного в дозе 100 мг/кг за 4 ч исследования достоверно увеличивает диурез (на 35%), натрийурез (на 47%), калийурез (на 20%), р<0,05; креатининурез при этом изменяется не-

Рис. 1. Влияние внутрижелудочного введения жидкого экстракта плодов боярышника кроваво-красного в дозе 50 мг/кг на экскреторную функцию почек за 4 ч

Рис. 2. Влияние внутрижелудочного введения жидкого экстракта плодов боярышника кроваво-красного в дозе 50 мг/кг на экскреторную функцию почек за 24 ч

Рис. 3. Влияние внутрижелудочного введения жидкого экстракта плодов боярышника кровавокрасного в дозе 100 мг/кг на экскреторную функцию почек за 4 ч

достоверно (рис. 3).

Наиболее эффективным оказалось введение жидкого экстракта плодов боярышника в дозе 100 мг/кг за 24 ч эксперимента, которое привело к достоверному росту всех исследуемых показателей экскреторной функции почек: диуреза (на 71%), натрийуреза (на 89%), калийуреза (на 53%) и креатининуреза (на 37%) по отношению к контролю (р<0,05) (рис. 4).

Следовательно, можно сделать вывод, что жидкий экстракт плодов боярышника в дозе 100 мг/кг за 24 ч эксперимента повышает диурез как за счет увеличения клубочковой фильтрации, так и за счет снижения канальцевой реабсорбции.

Фармакологические исследования антидепрес-сантной активности с использованием теста «Отчаяние» показали, что под действием густого экстракта боярышника кроваво-красного существенно увеличивается время активных попыток животных выбраться из воды с 87,29±6,00 секунд (контроль) до 136,14±10,02 секунд (экстракт боярышника, что на 56% больше, чем в водном контроле) (рис. 5).

Полученные результаты наглядно свидетельствуют о выраженном антидепрессантном действии густого экстракта боярышника кроваво-красного, сравнимом с таковым эффектом амитриптилина (111,0±5,11 секунд, что на 27% больше контрольных значений) (рис. 5).

Рис. 4. Влияние внутрижелудочного введения жидкого экстракта плодов боярышника кроваво-красного в дозе 100 мг/кг на экскреторную функцию почек за 24 ч

Рис. 5. Исследование антидепрессантной активности густого экстракта боярышника

В результате проведенных фитохимических исследований можно отметить, что имеются существенные различия в химическом составе сырья двух видов боярышника. Так, при исследовании хроматограмм можно сделать выводы, что в плодах боярышника кроваво-красного доминирует гиперозид. Для плодов боярышника однопестичного обнаружены фенольные компоненты на уровне ГСО рутина и гиперозида, а также фенольный компонент с Rf около 0,4, проявляющийся в виде пятна желтого цвета.

Для цветков боярышников однопестичного и кроваво-красного общими компонентами являются гиперозид (Rf около 0,3), а также пятно желтого цвета с Rf около 0,4. Кроме того, для цветков боярышника однопестичного характерно наличие вещества с Rf около 0,6, проявляющееся раствором ДСК в виде пятна оранжевого цвета.

Анализ хроматограммы извлечений из листьев показал, что для боярышника кровавокрасного характерен гиперозид, и три вещества с Rf около 0,4, 0,5 и 0,6 соответственно. Последнее из названных веществ проявляется ДСК пятном ярко-желтого цвета. Листья боярышника одно- пестичного содержат компонент, проявляющийся ДСК на уровне ГСО рутина. Кроме того, имеется вещество с Rf около 0,35, проявляющееся ДСК пятном лимонно-желтого цвета.

При исследовании хроматограмм на наличие веществ терпеноидной природы было замечено, что плоды боярышника кроваво-красного и боярышника однопестичного содержат соединение с Rf 0,2. Для цветков обоих видов характерным является наличие пятен с Rf 0,1 и 0,2. В листьях присутствует доминирующий компонент с Rf около 0,2 соответственно.

Следовательно, в отношении веществ терпеноидной природы в двух изучаемых видах наблюдаются общие характеристики. Различия в плане химического состава касаются, прежде всего, веществ фенольной природы.

ВЫВОДЫ

Таким образом, жидкий экстракт плодов боярышника в дозе 50 мг/кг за 24 ч опыта приводит к умеренному антидиурезу, в это же время аналогичный препарат в дозе 100 мг/кг за 4 ч эксперимента значительно увеличивает диурез исключительно за счет канальцевого эффекта, а через 24 ч опыта – увеличивает диурез как за счет увеличения клубочковой фильтрации, так и за счет снижения канальцевой реабсорбции. Мочегонная активность жидкого экстракта плодов боярышника может способствовать уменьшению объема циркулирующей крови, а, следовательно, и снижению повышенного артериального давления, выведению токсических веществ из организма при комбинированной терапии заболеваний сердечно-сосудистой системы.

Данные о наличии у густого экстракта плодов боярышника кроваво-красного антидепрес-сантного действия позволяют предположить, что описанный эффект связан с содержанием в плодах боярышника флавоноида гиперозида. По нашему мнению, именно антидепрессантный эффект в сочетании с диуретическим действием препаратов боярышника вносит положительный эффект в лечение хронических сердечно-сосудистых заболеваний. Кроме того, полученные данные также свидетельствуют о необходимости более углубленного изучения химического состава боярышника кроваво-красного и других видов растений рода Crataegus .

На основании результатов, подтвержденных методом ТСХ-анализа, можно говорить о необходимости более углубленного изучения химического состава боярышника кроваво-красного и боярышника однопестичного, а также о целесообразности оформления самостоятельных нормативных документов на два изучаемых вида растения.