Фитохимическое исследование препаратов и сырья на основе стручкового перца (Capsicum annuum L.)

Жизнь современного человеческого общества постоянно сопровождается явными, а чаще всего скрытыми воздействиями разнообразных потенциально вредных факторов. Одной из часто встречаемых причин нарушения здоровья является продолжительное воздействие на человека вредных и опасных производственных факторов, с которыми он сталкивается в процессе трудовой деятельности. В результате чего возникают такие последствия, как артриты, миозиты, радикулиты, невриты, ушибы, растяжения, нарушение кровообращения и др. [6, 8]. Одной из важнейших групп лекарственных средств для лечения выше перечисленных заболеваний является группа местнораздражающих препаратов, которые возбуждают окончания чувствительных нервов в коже, вызывают местные и рефлекторные реакции, способствующие улучшению кровоснабжения и трофики тканей, ослаблению болей. Данные лекарственные средства в той или иной степени всасываются и могут вызывать резорбтивный системный эффект, влиять на различные регуляторные процессы.

К одному из важных местнораздражающих средств растительного происхождения относится перец стручковый - Capsicum annuum L. - (сем. пасленовые - Solanaceae). Важная особенность этого растения заключается в его способности усиливать интегральное местнорефлекторное действие, которое сопровождается расширением сосудов (улучшается трофика тканей, отток жидкости) в области аппликации и сегментарно расположенных внутренних органах и мышцах («разрешающее» действие на патологические процессы в этих органах),

ослаблением болевых ощущений («отвлекающее действие») [1, 2, 4]. Лечебные свойства перца стручкового многогранны. На основе острого перца сейчас выпускаются: «Настойка перца стручкового», мази, кремы, гели, спреи для носа и таблетки. Исследования продолжаются, и с каждым годом послужной список жгучего перца пополняется новыми полезными свойствами.

На данный момент однозначно определено, что терапевтическое действие плодов перца обусловлено алкалоидами - капсаициноидами, среди которых основным (до 70%) является капсаицин, представляющий собой ванилила-миддециленовой кислоты (транс-8-метил-К-ванилил-6-нонеамид) (рис. 1):

Рис. 1. Капсаицин

Чаще всего капсаицин представляет собой бесцветные кристаллы, жгучий вкус которых еще ощутим в разведении 1:10 млн. Среди других капсаициноидов известны также гомокапсаицин, дигидрокапсаицин, гомодигидрокапсаицин, нор дигидрокапсаицин. В сырье содержатся также каротиноиды (до 300мг%) -капсантин, капсорубин, зеаксантин, виолаксан-тин, ксантофилл, цитроксантин, в -каротин и другие каротиноиды, флаваноиды (рутин, геспередин), эфирное масло (около 1,5%), жирное масло, аскорбиновая кислота (около 200 мг%), воск, стероидные сапонины. [3, 5, 6].

Стандартизируют сырье по содержанию суммы капсациноидов (должно быть не менее 0,15%), которое определяется хроматоспектрофотометрическим методом в пересчете на капсаицин [3]. Препараты на основе перца стручкового, содержащие капсаицин, обладают способностью убивать раковые клетки: капсаицин связывается с белками митохондрий раковых клеток и стимулирует процессы апоптоза, не затрагивая при этом здоровые клетки. Ученые выявили, что капсаицин может снизить рост жировых клеток. Результаты исследований обнаруживают взаимосвязь действия капсаицина с уменьшением размеров жировой ткани и уровня жиров в крови. Капсаицин хорошо помогает при лечении мигрени, гипертонии и других сердечно-сосудистых заболеваний, усиливает желудочную секрецию и улучшает пищеварение. В перспективе на основе капсаицина и подобных ему веществ могут быть созданы эффективные лекарственные препараты. Тот факт, что капсаицин входит в состав широко распространенных продуктов, служит доказательством его безопасности для здоровья и может ускорить процесс создания новых лекарств.

Цель настоящей работы - исследования по совершенствованию методик стандартизации сырья и препаратов перца стручкового по веществам алкалоидной природы.

Экспериментальная часть. Объектами исследования служили: 1) Промышленный образец настойки перца стручкового - производитель ОАО «Тверская фармацевтическая фабрика»; 2) Лекарственное растительное сырье - плоды перца стручкового.

В ходе исследований использовались физи ко-химические методы анализа, такие как адсорбционная колоночная хроматография, тонкослойная хроматография, УФ-спектроскопия. С целью обоснования подходов к анна лизу нами была проведена препаративная хроматографическая работа по выделению алкалоидов с использованием колоночной хроматографии. В результате проведенных исследований получены фракции, для которых была показана наиболее высокая степень отчистки капсаицина.

Первоначальным этапом являлась отчистка исследуемых объектов от каротиноидов в результате пропускания через стеклянный фильтр с сорбентом-А12О3. Полученные элюенты упаривали в упарительных чашках до объема около 5 мл и помещали в элюаты, а затем в холодильник. Через сутки в элюатах образовались осадки, которые были отделены от маточного раствора. Для препаративного выделения индивидуальных веществ использовали метод адсорбционной колоночной хроматографии (сорбент - силикагель L 40/100 мкм). Полученные осадки растворяли в ацетоне и смешивали с сорбентом (силикагель L 40/100 мкм), а затем наносили на колонку. Элиюирование осадка, нанесенного на сорбент, проводили в ступенчатом режиме хлороформом и смесями гексана с хлороформом в различных соотношениях. Целевая группа веществ алкалоидной природы находится во фракциях, полученных на хлороформе и 20% содержании хлороформа в гексане. Выход данной группы веществ контролировали методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинках «Silufol UV 254» и Сорбфил «ПТСХ-А-А-УФ» в системе растворителей хлороформ-этанол (9:1). На линию старта пластинки «Silufol UV 254», микропипеткой наносили 0,02 мл содержимого фракций. Хроматографическую пластинку помещали в камеру, которую предварительно насыщали не менее 24 ч смесью растворителей хлороформ-этанол (9:1), и хроматографировали восходящим способом. Когда фронт растворителей проходил около 13 см, пластинку вынимали из камеры, сушили на воздухе в течение 5 мин и просматривали в видимом свете. При просмотре хроматограммы извлечений в УФ-свете при длине волны 254 нм обнаруживаются пятна с фиолетовой флуоресценцией, принадлежащие предположительно капсаицину. При проявлении хроматограммы извлечений щелочным раствором диазобензолсульфокислоты обнаруживаются доминирующие пятна розовато малинового цвета с величиной Rf=0,6, что свидетельствует о фенольной природе алкалоида (капсаицин) (рис. 2). Изучение УФ-спектров растворов очищенной настойки из плодов перца однолетнего (рис. 3) имеет тот же характер кривой поглощения, что и в случае раствора ГСО капсаицина (рис. 4).

Выводы:

• 1.    В результате изучения химического состава настойки и плодов стручкового перца, было выделен и охарактеризован доминирующий алкалоид плодов перца однолетнего -капсаицин.

• 2.    Обоснованы новые методы в стандартизации плодов и лекарственных средств перца однолетнего, заключающиеся в использовании ТСХ и хроматоспектрофотометрии с использованием ГСО капсаицина, которые позволяют объективно определять фитохимический состав сырья и препаратов стручкового перца.

Рис. 2. Хроматограмма настойки перца однолетнего и ГСО («Сорбфил ПТСХ-А-А-УФ», система растворителей: хлороформ-этиловый спирт 19:1)

Рис. 3. УФ - спектр ГСО капсаицина

Рис. 4. УФ - спектр настойки стручкового перца, очищенного на A12O3