Флавоноиды Russowia sogdiana (Bunge) B. Fedtsch

В настоящее время ученые всего мира проявляют большой интерес к флавоноидам лекарственных растений, что обусловлено их высокой биологической активностью, широтой терапевтического эффекта и малой токсичностью [1-4]. За последние 15-20 лет число фармакопейных лекарственных растений, содержащих флавоноиды, выросло в Российской Федерации до 30 наименований. Флавоноиды привлекают внимание исследователей как физиологически активные вещества с разносторонним спектром действия. Они являются важными и даже наиболее активными действующими началами растений и растительных препаратов, используемых в народной и научной медицине в качестве желчегонных, противовоспалительных, спазмолитических, противоаллергических и сосудорасширяющих средств [1,4]. В результате проведенных в последнее время исследований получены препараты гипоазотемического, гипогликемического и антивирусного действия [4]. Однако препаратов, содержащих флавоноиды, пока имеется немного. Чаще эти соединения находятся в растениях в комплексе с другими БАВ и используются суммарно. Следовательно, поиск новых источников флавоноидов с целью их практического исполь- зования относится к актуальным задачам.

Из литературных данных известно, что многие представители растений семейства Asteraceae богаты биологически активными флавоноидами [4,5]. С целью поиска новых источников биологически активных флавоноидов нами изучено растение Russowia sogdiana (Bunge) B. Fedtsch. (руссовия согдийская) относящийся к вышеуказанному семейству. Руссовия согдийская представляет собой однолетнее травянистое растение, встречающийся на выходах пестроцветных пород в нижнем поясе гор Средней Азии, долины рек Зеравшан, Сырдарья, Кызылкум, Каракум, Памиро-Алай (хребты Зеравшанский, Гиссарский, Кугитанг, Копет-Даг) [6]. В доступной нам литературе сведения о биологической активности флавоноидов руссовии согдийской не обнаружены.

Экспериментальная часть

Растительное сырье (надземная часть Russowia sogdiana ) для исследования заготовлено в середине мая 2016 г. в период цветения в окрестностях г. Ферганы Республики Узбекистан. Высушенную и измельченную надземную часть (0,8 кг) экстрагировали при комнатной температуре 5 раз 96%-ным этанолом. Объединенный экстракт сгущали в вакууме до 1,0 литра, разбавляли водой в соотношении 1:1 и последовательно подвергали жидкость-жидкостной экстракции петролейным эфиром, хлороформом, этилацетатом и н -бутанолом. Отогнав растворители, получили 8,7 г петролейно-эфирной, 28,3 г хлороформной 21,5 г этилацетатной и 22,6 г н -бутанольной фракции.

Этилацетатное извлечение (21,0г) хроматографировали на колонке (180 х 3,5 см) с силикалегем (430 г) с использованием ступенчатого градиента хлороформ-пропанола-2. Собирали фракции по 400 мл. При элюировании колонки смесью хлороформ-пропанол-2 в соотношении (92:8) из отдельных фракций после рехроматографирования на колонке с сефадексом LH-20 и перекристаллизации из этанола выделили 0,39 г вещества № 1, 0,28 г вещества № 2 и 0,14 г вещества № 3. При дальнейшем элюировании колонки смесью хлороформ-пропанол-2 в соотношении (86:14) выделили 0,27 г вещества № 4 и 0,17 г вещества № 5. Продолжая промывание колонки смесью хлороформ-пропанол-2 в соотно- шении (82:18) выделили и 0, 21 г вещества № 6 и 0,55 г вещества № 7.

Полученные вещества очищены дробной перекристаллизацией из водного этанола и ацетона, а также рехроматографированием на полиамиде в градиентой системе раствори- телей этанол-вода.

УФ-спектры регистрировали на спектрофотометре Hitachi EPS-3T в этаноле, масс- спектры получали на приборе MS 25RF (Kratos) с системой обработки информации DS 90. ИК-спектры зарегистрировали на ИК-Фурье-спектрометре Perkin Elmer Spectrum. Спектры ПМР снимали на приборе Bruker AVACE AV300 с рабочей частотой 300 МГц. Химические сдвиги приведены в миллионных долях (м.д.) в δ-шкале. Температуры плавления определяли на приборе типа “Boetius” с визуальным устройством РНМК 0,5.

Тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили на пластинках Silufol UV-254. Пятна флавоноидов при ТСХ наблюдали в УФ свете, обнаруживали обработкой пластинок парами аммиака, 0,5% спиртовым раствором NaOH и 1% раствором ванилина в серной кислоте. Колоночную хроматографию проводили на силикагеле марки КСК 100/160 мкм. D-Глюкозу кислоту обнаруживали методом бумажной хроматографии (Filtrak №11) в системе н-бутанол-пиридин-вода (6:4:3). Хроматограммы опрыскивали кислым анилинфталатом с последующим нагреванием в течение 3-5 минут при 90-100 0С.

Обсуждение результатов

На основании изучения спектральных данных соединения № 1, № 6 и № 7 отнесены к производным флавона, а вещества № 2-5 - к производным флавонола [6,7]. Флавоноиды идентифицировали на основании результатов кислотного гидролиза, изучением спек- тральных данных и сравнением физико-химических констант с литературным сведениями.

Апигенин (№ 1). Кристаллы светло-желтого цвета состава C₁₅H₁₀O₅, т.пл. 346-347 °С (с разл.), Х _тах 270, 340 нм. ¹H-ЯMР (ДМСО-d s , 5, м.д.): 6.19 (д, 2.0 Гц, H-6), 6.49 (д, 2.0 Гц, H-8), 6.80 (с, H-3), 6.93 (д, 8.8 Гц, H-3', 5'), 7.94 (д, 8.8 Гц, H-2', 6'), 12.98 (с, 5-OH). Спектр ЯМР ¹³C (DMSO-d 6 , 5, м.д.): 93.9 (C-8), 98.8 (C-6), 102.8 (C-3), 103.7 (C-10), 115.9 (C-3',5'), 121.1 (C-1'), 128.5 (C-2',6'), 157.3 (C-9), 161.2 (C-4'),161.4 (C-5), 163.7 (C-7), 164.1 (C-2), 181.7 (C-4).

Данные 1H- и 13C-ЯMР спектров соответствуют опубликованным параметрам [5,7].

Кверцетин (№ 2). Кристаллы желтого цвета состава С₁₅Н₁₀О₇ (М + 302) с т.пл. 313-314 °С, X max 257, 268, 372 нм. ¹Н-ЯМР (DMSO- d 6 , 5 , м.д.): 6.19 (д, 2.3 Гц, H-6), 6.41 (д, 2.3 Гц, H-8), 6.89 (д, 8.2 Гц, H-5‘),7.55 (дд, 2.1 и 8.2 Гц, H-6’), 7.68 (д, 2.1 Гц, H-2’), 9.27 (с, 3‘-OH), 9.31 (с, 4‘-OH), 9.55 (с, 3-OH), 10.75 (с, 7-OH), 12.48 (с, 5-OH). Спектр ЯМР ¹³C (CD 3 OD, 5 , м.д.): 148.0 (C-2), 137.2 (C-3), 177.3 (C-4), 162.5 (C-5), 99.2 (C-6), 165.6 (C-7), 94.4 (C-8), 15 8.2 (C-9), 104.5 (C-10), 124.1 (C-1'), 116.0 (C-2'), 146.2 (C-3'), 148.7 (C-4'), 116.2 (C-5'), 121.7 (C-6').

Данные 1H- и 13C-ЯMР спектров соответствуют опубликованным сведениям [5,7].

Изорамнетин (№ 3). Кристаллы желтого цвета состава С₁₆Н₁₂О₇, М + 316 (100%), т. пл. 294-297 °С (водный спирт), X max EtOH 257, 270 пл., 371 нм. ¹Н-ЯМР спектр (ДМСО^, 5, м.д.): 3.85 (с, 3Н, -ОСН 3 ), 6.35 (д, 2,0 Гц,

Н-6), 6.68 (д, 2,0 Гц, Н-8), 6.83 (д, 9,0 Гц, Н-5') 7.69 (дд, 2,0 и 9,0 Гц, Н-6'), 7.58 (д, 2,0 Гц, Н-2'), 12.56 (c, 5-ОН) [5,7].

Кверцетин-7-0-β-D-глюкопиранозид (№ 4) - кристаллы желтого цвета состава С 21 Н 20 О 12 с т. пл. 245-247 ºС, λ max 257, 266, 374 нм; +NaOAc 273, 390. ¹H ЯMР-спектр (Py-d 5 δ, м.д.): 3.87-4.60 (протоны глюкозы), 5.73 (д, 6,5 Гц, Н-1''), 6.69 (д, 2,5 Гц, Н-6), 6.91 (д, 2,5 Гц Н-8), 7.25 (д, 8,5 Гц, Н-5'), 7.96 (дд, 2,5 и 8,5 Гц, Н-6') и 8.50 (д, 2,5 Гц, Н-2) T[8,9].. T

В результате кислотного гидролиза вещества № 4 5%-ным раствором HCl получили кверцетин и D-глюкозу.

Изорамнетин-7-0-β-D-глюкопиранозид (5) - кристаллы светложелтого цвета состава С 22 Н 22 О 12 , с т. пл. 250-252 ºС, λ max 255, 271, 327, 376 нм; +NaOAc 273, 390. ¹H ЯMР-спектр (Py-d 5 , δ, м.д.) содержит сигналы при 3.77 (с, -ОСН 3 ), 3.90-4.57 (протоны глюкозы), 5.70 (д, 6,5 Гц, Н-1''), 6.72 (д, 2,5 Гц, Н-6), 7.02 (д, 2,5 Гц, Н-8), 7.24 (д, 8,0 Гц, Н-5'), 8.08 (дд, 2,5 и 8,0 Гц, Н-6'), 8.14 (с, Н-2'), 13.08 (уш. с, 5-ОН) [7,8].

В результате кислотного гидролиза вещества № 5 5%-ным раствором HCl получили кверцетин и D-глюкозу.

Сапонаретин (апигенин-6-С-β-D-глюкопиранозид) (№ 6) - кристаллы светло-желтого цвета состава С 21 Н 20 О 10 с т.пл. 222-224 ºС, λ max 272, 294, 339 нм. Спектр ¹³С-ЯМР (DMCO-d 6 , δ, м.д.): 61.4 (С-6''), 70.2 (С2''), 70.5 (С-4''), 73.2 (С-1''), 78.9 (С-3''), 81.3 (С-5''), 93.8 (С-8), 102.9 (С-3), 103.5 (С-10), 108.9 (С-6), 116.1 (С-3',5'), 121.3 (С-1'), 128.3 (С-2',6'), 156.4 (С-5), 160.6 (С-4'), 161.2 (С-9), 163.3 (С-2), 163.7 (С-7), 182.0 (С-4) [10,11].

При окислении гликозида 6 раствором FeCl 3 получили апигенин и D-глюкозу [7,9].

Витексин (апигенин-8-С-β-D-глюкопиранозид) (№ 7) - кристаллы желтого цвета состава С 21 Н 20 О 10 с т.пл. 247-249 ºС, λ max 285, 337 нм. ¹H ЯMР-спектр (Py-d₅, δ, м.д.): 4.05-4.55 (протоны углеводной части), 4.75 (т,

8,0 Гц, Н-2''), 5.79 (д, 8,0 Гц, Н-1''), 6.76 (с, Н-3), 7.07 (д, 9,0 Гц, Н-3',5'), 7.35 (с, Н-6), 7.74 (д, 9,0 Гц, Н-2',6') [7,11].

Выводы

Из надземной части Russowia sogdiana впервые выделены флавоноиды апигенин, кверцетин, изорамнетин, кверцетин-7-0-β-D-глюкопиранозид, изорамнетин-7-0-β-D-глюко- пиранозид, сапонаретин и витексин. Полученные флавоноиды идентифицированы на основании результатов кислотного гидролиза и данных УФ-, ¹Н-, ¹³С-ЯМР-спектров.