Функциональные показатели пойкилотермных гидробионтов из природных и искусственных водных биоценозов

Растущая потребность в качественных продуктах стимулирует развитие аквакультуры и искусственного воспроизводства видов животных — традиционных членов естественных биоценозов (1). В то же время под давлением антропогенных факторов многие виды исчезают из водных биоценозов, что нарушает устойчивость сообществ гидробионтов. Так, в Москов- ском регионе в биоценозах крайне редки речные раки и осетровые рыбы. В последние годы резко уменьшилась численность земноводных, что приводит к неконтролируемому размножению насекомых — комаров, мух, слепней. Снижения численности популяций амфибий, вымирания отдельных популяций или видов целиком в последнее время приобретает глобальный масштаб (2). Очевидно, что вокруг и внутри крупных городов невозможно обеспечить экологическую безопасность без искусственного регулирования численности и видового состава животных сообществ. Искусственное воспроизводство и использование ракообразных, рыб, земноводных в качестве маркеров стабильности биоценозов сдерживается отсутствием детальной информации о физиологической норме для животных, в первую очередь обитателей водоемов — гидробионтов. Так как кровь — лабильная система организма, гематологические показатели наиболее полно отражают физиологические особенности этих животных и изменения среды их обитания при загрязнении водоемов, служат основой биоиндикационного метода (3).

Беспозвоночные гидробионты существенно отличаются от низших позвоночных не только строением тела, но и кровеносной системой. Дыхательный пигмент большинства ракообразных — гемоцианин (4), что придает ей голубой цвет. Кровеносная система ракообразных незамкнутая: в сосудах и межклеточных полостях циркулирует гемолимфа, состоящая из жидкой части — плазмы и клеточных структур — гемоцитов. У речных раков большинство авторов выделяют три типа гемоцитов (5-7). Мы идентифицировали четыре морфофункционально самостоятельных типа этих клеток (8), хорошо различимых при микрокопировании свежеотобранной гемолимфы, которые назвали агранулоцитами, полугранулоцитами, гранулоцитами, прозрачными клетками. Агранулоциты (ГЦ I) — это мелкие (3-17 мкм), обычно сферические клетки с небольшим количеством включений. Дольше других сохраняются на предметном стекле в неизменном виде. Полугранулоциты (ГЦ II) имеют размеры 8-40 мкм. Это промежуточные клетки между двумя другими типами. Содержат небольшое количество гранул разного размера. На предметном стекле их цитоплазма разрушается, и через 30-40 мин ГЦ II трудно отличить от агранулоцитов. Гранулоциты (ГЦ III) — самые крупные клетки гемолимфы (до 50 мкм и больше) с многочисленными и крупными гранулами с высоким лучепреломлением. Через 15 мин после отбора гемолимфы начинается выброс гранул с последующим растворением цитоплазмы. Размер прозрачных клеток (ГЦ IV) около 8-35 мкм, при световой микроскопии нативной гемолимфы они идентифицируются с трудом, ядра не просматриваются. Предположительно это недифференцированные предшественники клеток крови. Гемолимфа in vitro в аэробных условиях быстро изменяет реологические свойства, утрачивает текучесть и превращается в гелеобразную массу, гемоциты в течение 30-50 мин подвергаются структурно-функциональным изменениям, постепенно превращаясь из овально-веретеновидных клеток в округлые образования. В анаэробных условиях реологические изменения эндолимфы раков, по-видимому, не происходят (или процесс тормозится), о чем свидетельствует продолжение истечения лимфы при тампонаде травматического повреждения кутикулы (эндолимфа не сворачивается), тогда как при контакте гемолимфы с воздухом за несколько секунд образуется желеобразный сгусток (9).

Функции гемоцитов ракообразных изучены мало. Однако установлено, что разные типы гемоцитов участвуют в иммунной защите. Мембраны гемоцитов-агранулоцитов содержат распознающие рецепторы. При вторжении чужеродных агентов происходит распознавание антигенов (например, β -1,3-глюканов грибов или липополисахаридов бактерий) и активируется 338

Сведений о клеточном составе крови амфибий крайне мало. Известно, что эритроциты крови земноводных крупные и, как и у рыб, в основном ядерные (21-24). Число эритроцитов у хвостатых амфибий — примерно 0,070,08 млн/мкл, у бесхвостых, по разным данным, — 0,35-0,50 млн/мкл и 0,38-0,64 млн/мкл; лейкоцитов — 2,4-21,0 тыс/мкл, тромбоцитов — 8,521,6 тыс/мкл (25). Иногда встречаются безъядерные эритроциты (до 5 %) (19).

Мы впервые изучили ряд гематологических, цитохимических и биохимических показателей у представителей водной фауны разных таксономических (ракообразные, рыбы, земноводные) и гендерных групп в Мос- ковской, Псковской областях и Чувашской Республике. Полученные данные можно использовать при оценке устойчивости природных биоценозов и адекватности условий содержания этих гидробионтов в аквакультуре.

Цель работы заключалась в определении референтных границ значений для основных показателей гомеостаза у гидробионтов из искусственных и природных водоемов.

Методика . Исследования (2005-2015 годы) проводили на половозрелых клинически здоровых животных разных таксономических групп: двух видах речных раков (широкопалый Astacus astacus и длиннопалый Pontastacus leptodactylus ), трех видах рыб (карп Cyprinus caprio L., линь Tinca tinca L., сом обыкновенный Silurus glanis L.) и двух видах амфибий (травяная лягушка Rana temporaria и гладкая шпорцевая лягушка Xenopus laevis ) из природных и сельскохозяйственных водоемов средней полосы европейской части России (кроме гладкой шпорцевой лягушки, выращенной в аквари-альных условиях). Широкопалый речной рак обитает в водоемах Псковской области, длиннопалый — Московской. Карпа и сома обыкновенного выращивают в рыбоводных прудах рыбхоза «Киря» (Чувашская Республика), линя — в рыбхозе «Осенка» (Московская обл.). Группы животных формировали по принципу аналогов, учитывая видовую принадлежность, пол, возраст, живую массу. Численность групп зависела от доступности объекта и колебалась в пределах малой выборки (от 5 до 20 особей).

Согласно разработанной нами методике (26), пробы циркулирующих жидкостей гидробионтов (речных раков и рыб) для анализа получали неинвазивным методом с соблюдением асептики. Гемолимфу раков отбирали in vivo пункцией вентрального синуса, кровь рыб — прижизненно из хвостовой вены. У земноводных кровь для приготовления мазков для гематологических и цитохимических исследований отбирали прижизненно из пальца, для биохимического анализа — из сердца.

При окрашивании по Паппенгейму (позволяет различать ядра клеток и цитоплазматические включения) сначала проводили окрашивание и фиксацию раствором Май-Грюнвальда в течение 3 мин, затем препараты промывали дистиллированной водой, обрабатывали раствором Романовского 40 мин, промывали водопроводной водой и высушивали на воздухе.

Общее число гемоцитов (ОЧГ) для расчета гемоцитарной формулы у речных раков подсчитывали в камере Горяева в нативной гемолимфе непосредственно после отбора. Для определения показателей эритропоэза и дифференциального подсчета лейкоцитов рыб (лейкоформула) использовали мазки периферической крови, окрашенные по Паппенгейму. Активность гемопоэза у рыб оценивали по доле незрелых форм эритроцитов. Клетки крови земноводных подсчитывали в камере Горяева. Для подсчета эритроцитов образец крови разводили в 200 раз в 0,9 % растворе NaCl (20 мкл крови и 4 мл раствора). Число эритроцитов Хэ в 1 мкл крови рассчитывали по формуле: Xэ = (aэ ½ 4000 ½ 200)/80, где, aэ — число клеток в 80 малых квадратах камеры Горяева. Для подсчета лейкоцитов образец разводили в 20 раз 5 % раствором уксусной кислоты с метиленовым синим. Число лейкоцитов Хл в 1 мкл крови рассчитывали как Xл = (aл ½ 250 ½ 20)/100, где ал — число лейкоцитов в 100 больших квадратах камеры Горяева. Для просмотра препаратов использовали цифровой микроскоп Optika DM 15 с программным обеспечением OPMIAS (OPTIKA Micro Image Analysis Software) (OOO «ПриборУфа», Россия).

Иммунологические показатели оценивали цитохимически по среднему цитохимическому коэффициенту (СЦК) лизосомального катионного белка в нейтрофилах крови рыб и гемоцитах речных раков в реакции с 340

бромфеноловым синим (27), адаптированной для гидробионтов (28). СЦК для рыб и речных раков вычисляли по формуле:

СЦК = [0 ½ Н 0 (Г 0 ) + 1 ½ Н 1 (Г 1 ) + 2 ½ Н 2 (Г 2 ) + 3 ½ Н 3 (Г 3 )]/100, где Н₀(Г₀), Н₁(Г₁), Н₂(Г₂), Н₃(Г₃) (%) — число нейтрофилов рыб (гемоцитов речных раков) с активностью соответственно 0, 1, 2 и 3 балла.

При биохимических исследованиях гемолимфу раков для предотвращения быстрой коагуляции центрифугировали 5 мин при 3000 об/мин и 6 ° С. У рыб кровь для получения сыворотки помещали в сухую стерильную пробирку и оставляли на 1 ч при комнатной температуре, после чего сыворотку осторожно отбирали шприцом с тонкой иглой, замораживали при - 15-20 ° С и в замороженном виде в термоконтейнерах со льдом транспортировали в лабораторию для анализа. Биохимические показатели крови рыб и гемолимфы раков определяли на программируемом автоматическом анализаторе Chem Well («Awarenes Technology, Inc.», США), используя наборы реактивов АО «Витал Девелопмент Корпорэйшн»» (г. Санкт-Петербург) (анализ белков — биуретовым методом) согласно протоколу производителя.

Рассчитывали средние ( M ) и стандартные ошибки средних (±SEM). Обработку результатов осуществляли методом вариационной статистики с использованием t -критерия Стьюдента. Статистически значимыми считали различия при P < 0,05.

Результаты . У объектов определяли гематологические, цитохимические и биохимические показатели, на основании чего делали заключение о физиологической норме для представителей вида.

О с о бе нно сти го ме о стаз а р ако в. Речные раки — группа культивируемых гидробионтов, физиология которых наименее изучена. Общеклинический анализ показателей внутренней среды у речных раков дает объективную информацию об адаптированности животного к условиям обитания и может использоваться для биомониторинга окружающей среды в целом и водной — в частности. Характеристику особенностей гематологических, биохимических и цитохимических показателей гемолимфы у двух видов речных раков иллюстрирует таблица 1.

1. Характеристика гемолимфы речных раков двух видов из природных акваценозов (M±SEM, Московская и Псковская области, 2010-2012 годы) В эндолимфе число клеток всех трех типов (агранулоциты, полу- Показатель Широкопалый рак Аstacus astacus (а) (n =10) Длиннопалый рак Pontastacus leptodactylus (n =10) агранулоциты, гранулоциты) варьировало в среднем в пределах 32-35 %. Однако у P. leptodactylus число прозрачных клеток было на 18,2 % меньше, чем у A. astacus. По другим элементам гемоци-тарной формулы межвидовые различия оказались несущественными. Средний цитохимический коэффициент лизосомального катионного белка в гемоцитах у речных раков P. leptodactylus на 9,4 % Гемоцитарная формула, %: агранулоциты            40,0±3,9              34,9±4,8 полугранулоциты        24,2±5,7              29,7±3,4 гранулоциты             27,8±2,8              32,1±2,4 прозрачные клетки        8,0±1,9               3,3±1,6 Гематологические и биохимические показатели: ОЧГ, кл/мкл            384±111             911±137а глюкоза, ммоль/л         2,2±0,6                < 0,5а АлАТ, IU/л              80,6±11,7             55,1±17,8 АсАТ, IU/л              57,7±7,3              55,3±33,5 ЩФ, IU/л               17,1±2,1              78,0±20,2а Цитохимические показатели: СЦК, ед.                    1,70±0,06               1,87±0,17 П р и м е ч а н и е. ОЧГ — общее число гемоцитов, АлАT и АсАТ — соответственно аланин- и аспартатаминотрансфераза, ЩФ — щелочная фосфатаза, СЦК — средний цитохимический коэффициент. а Различия с показателями у широкопалого рака статистически значимы при P < 0,05. превышал таковой у A. astacus.

По биохимическим показателям эндолимфы речных раков выявили несколько закономерностей. По ферментам переаминирования активность аланинаминотрансферазы гемолимфы (АлАТ) у A. astacus была на треть выше, чем у P. leptodactylus. Другие субстратные показатели крови изменялись заметнее: средняя концентрация глюкозы в гемолимфе у A. astacus превышала аналогичный показатель у особей P. leptodactylus на 64 %, а активность щелочной фосфатазы (ЩФ) оказалась почти в 5 раз ниже.

Фагоцитами у раков являются агранулоцитарные и полуагрануло-цитарные гемоциты. Кроме того, способностью к фагоцитозу обладают так называемые прозрачные клетки (предположительно ювенильные формы) (9). Наблюдения показали, что в среднем фагоцитарный резерв у особей двух видов раков примерно одинаков.

Особенности гомеостаза рыб. В эволюционной иерархии рыбы располагаются ниже теплокровных животных, соответственно, пределы изменения показателей внутренней среды организма у них шире. На примере карпа, линя и сома обыкновенного (табл. 2) мы показали, что гемопоэз у этих видов происходил примерно одинаково. Лейкопоэз интенсивнее у линя (присутствовали бластные формы лейкоцитов — промиелоциты). За счет палочкоядерных форм доля нейтрофилов была наибольшей у самцов линя (в 2-3 раза выше, чем в других группах). Эозинофилы отсутствовали у всех видов рыб, базофилы — у самок линя и сома обыкновенного (у самок карпа имелись в незначительном количестве).

2. Гематологические показатели у рыб разных видов ( M ±SEM, рыбоводные хозяйства, Волгоградская обл., Чувашская Республика, 2010-2012 годы)

Показатель	Карп Cyprinus caprio L.		Линь Tinca tinca L.		Сом обыкновенный Silurus glanis L.
	самцы (а) ( n =23)	самки (б) ( n =10)	самцы (в) ( n =7)	самки (г) ( n =5)	самцы (д) ( n =12)	самки (е) ( n =10)
Гемоцитобласты,		Эритропоэз, %
эритробласты	0,3±0,2	0,6±0,2	1,0±0,4		0,7±0,4
Нормобласты Базофильные	2,9±0,4	3,4±0,3	2,9±0,1	3,0±0,1	2,7±0,4	3,0±1,4
эритроциты	8,6±0,4	9,1±1,1	6,0±3,8	12,1±4,2	11,6±4,0	7,5±0,7
Зрелые эритроциты	88,2±1,5	86,9±1,4   90,1±1,1 Лейкоцитарная		84,9±4,3     85,0±4,4 ф ормула, %		89,5±2,1
Миелобласты
Промиелоциты			1,0±0,7	2,0±1,4
Миелоциты	0,8±0,4	1,3±0,5		5,7±1,7а, б	0,5±0,4г	1,0±0,4г
Метамиелоциты Нейтрофилы:	4,0±0,9	4,3±0,4		6,2±4,2	3,0±1,4	3,5±0,7
палочкоядерные	1,4±0,3	1,0±0,4	6,0±0,2а, б	2,0±0,9в	0,7±0,5в	1,5±0,4в
сегментоядерные	1,6±0,4	2,4±0,5	3,2±0,4а	4,5±0,1а, б	4,3±0,6а, б	4,5±0,8а, б
всего	3,0±0,3	3,4±0,9	9,2±0,9а, б	6,5±0,9а, б	5,0±0,8а	6,0±1,2а
Эозинофилы
Базофилы	0,4±0,2	0,1±0,2	2,3±0,8а, б		0,3±0,3в
Моноциты	3,0±0,3	2,2±0,5	2,1±1,1	5,5±3,5	3,3±2,0	2,5±0,7
Лимфоциты	88,8±1,2	88,7±1,3    85,4±4,4 74,1±5,6а    87,9±2,3г Фагоцитарная активность				87,0±2,8
СЦК, ед.	1,81±0,07	1,94±0,05   1,68±0,01б 2,05±0,01в Биохимические показат			1,30±0,15 а, б, в, г ели	1,72±0,11г, д
АлАТ, IU/л	40,2±10,5	41,3±12,2	39,6±8,9	32,6±5,9	45,0±4,4	75,1±12,8
АсАТ, IU/л	164±13	133±39	346±18а, б	310±40а, б	402±12а, б	367±29а, б
Глюкоза, ммоль/л	3,6±1,2	4,5±1,1	9,4±1,3а	6,6±0,5а	7,4±1,1а	8,1±1,3а
КК, IU/л	3896±63	3877±161	3054±18а, б	2990±107а, б	527±93 а, б, в, г	1185±430 а, б, в, г
Лактат, мг/дл	66,9±7,5	68,5±5,7	19,9±4,5а, б	19,1±2,7а, б	116,2±5,3 а, б, в, г	121,1±9,8 а, б, в, г
ЩФ, IU/л	25,5±1,5	17,5±0,5а	43,6±4,7а, б 56,3±11,4а, б		9,9±6,3 а, в, г	9,3±4,0 а, в, г
Альбумин, г/дл	11,5±3,4	9,1±1,7	15,2±1,7	14,8±1,4	12,2±0,3	13,7±2,7
Общий белок, г/л	26,8±6,4	22,3±1,7	24,9±3,3	21,5±1,2	29,9±2,5	31,0±5,1
Триглицериды, мг/дл	124±42	105±32	76±33	94±25	271±105	178±25
Холестерин, мг/дл	109±12	118±21	121±39	133±16	134±28	107±26
П р и м еч а ни е. АлАT и АсАТ — соответственно аланин- и аспартатаминотрансфераза, ЩФ — щелоч-
ная фосфатаза, КК — креатинфосфокиназа, означает отсутствие данных.			СЦК — средний цитохимический коэффициент. Прочерк
а, б, в, г, д, е Буквы в верхнем индексе указывают, различия с показателями в каком варианте статистически значимы при P < 0,05.

Количество неферментного катионного белка в лизосомах нейтро- филов (СЦК) у самок было больше, чем у самцов (у линя и сома различия достоверны). Различия можно объяснить усилением неспецифического клеточного иммунитета у самок. Активность аспартатаминотрансферазы (АсАТ) самцов у линя и сома была примерно в 3 раза выше, чему карпа, при высокой достоверности различий (для карпа и сома t = 13,5). Биологическая роль АсАТ заключается в трансаминировании, имеющем важнейшее значение для энергетического обмена. Установлено, что любые состояния, требующие срочной мобилизации компонентов белка для покрытия энергетических нужд организма, связаны с адаптивным гормонально стимулируемым биосинтезом этого фермента. Полученные результаты свидетельствуют о большей стрессоустойчивости сома и линя в сравнении с карпом. Можно констатировать достоверное повышение (более чем в 3 раза) содержания лактата у карпа и сома по сравнению с линем, что свидетельствует об интенсивном углеводном обмене. В то же время минеральный обмен, судя по активности ЩФ, у самцов линя был интенсивнее в 2-3 раза.

В целом изучаемые клинически здоровые рыбы имели различия в лейкограмме: у линя была больше доля микрофагов (нейтрофилов), что указывает на потенциал фагоцитоза. Фагоцитарная активность этих клеток у самок изучаемых рыб оказалась несколько выше, чем у самцов.

О с о бе нно сти го ме о стаз а з е мн ов одных (травяная лягушка Rana temporaria , гладкая шпорцевая лягушка Xenopus laevis ). В научной литературе гомеостатические показатели амфибий обсуждаются незаслуженно редко. Наши исследования показали, что число эритроцитов у травяной лягушки колеблется у самцов в пределах 0,12-0,37 млн/мкл, у самок — 0,22-0,39 млн/мкл; лейкоцитов у самцов — 0,14-0,38 млн/мкл, у самок — 0,13-0,47 млн/мкл. Анализ состава лейкоцитов свидетельствовал о том, что у лягушек имелись как гендерные, так и межвидовые различия лейкоцитарной формулы (табл. 3).

3. Гематологические показатели у лягушек разных видов ( M ±SEM)

Показатель	Rana temporaria (травяная)		Xenopus laevis (гладкая шпорцевая)
	самцы (а) ( n =10)	самки (б) ( n =10)	самцы ( n =5)	самки ( n =5)
Эритропоэз, %:
гемоцитобласты, эритробласты	0,8±0,3	0,4±0,4	1,5±2,1	2,1±0,5
нормобласты	2,8±0,6	2,4±0,5	5,0±2,8	0,9±0,3
зрелые эритроциты Лейкоцитарная формула, %:	96,4±0,7	97,2±0,9	93,5±1,3	97,0±0,6
метамиелоциты	0,2±0,3			0,8±0,4
палочкоядерные нейтрофилы	0,2±0,3	0,6±0,4		1,2±0,6а
сегментоядерные нейтрофилы	12,2±0,9	16,8±1,5а	2,7±0,5а, б	4,3±0,3а, б
всего нейтрофилов	12,4±0,9	17,4±1,5а	2,7±0,5а, б	5,5±0,4а, б
эозинофилы	3,0±0,7	3,2±0,9	1,8±0,4	0,9±0,4а, б
базофилы		0,4±0,4	0,5±0,7
моноциты	2,8±0,5	2,0±0,4	2,6±0,8	2,2±0,5
лимфоциты	81,6±1,0	77,0±1,7	92,4±0,8а, б	90,6±1,2а, б
БА, ед.	1,78±0,27	1,78±0,24	2,02±0,06	1,74±1,20

П р и м е ч а н и е. БА — бактерицидная активность нейтрофилов крови. Травяные лягушки были взяты из природных акваценозов (Московская обл., 2014 год), шпорцевые — выращены в аквариальных условиях. Прочерк означает, что показатель находится за пределами чувствительности прибора.

а, б Буквы в верхнем индексе указывают, различия с показателями в каком варианте статистически значимы при P < 0,05.

В крови самцов травяной и самок гладкой шпорцевой лягушек были обнаружены метамиелоциты. По числу палочкоядерных нейтрофилов самки вида Xenopus laevis на 67 % превосходили самцов. Доля сегментоядерных нейтрофилов у травяной лягушки более чем в 4 раза превышала таковую у гладкой шпорцевой. Гендерные вариации по числу сегментоядерных клеток выглядели следующим образом: их было соответственно на 27 и 33 % меньше у самцов травяной и гладкой шпорцевой лягушек, чем у самок. У самцов и самок травяной лягушки доля эозинофилов в гранулоцитарном ряду белой крови оказалась сопоставима, а у самок гладкой шпорцевой лягушки изучаемый показатель был достоверно ниже. Количество лимфоцитов крови у Rana temporaria было достоверно меньше, чем у Xenopus laevis. У травяной лягушки СЦК нейтрофилов самцов и самок имел примерно одинаковые значения, у шпорцевой — у самцов оказался на 22 % выше, чем у самок.

4. Биохимические показатели крови у самцов и самок травяной лягушки Rana temporaria из природных акваценозов ( M ±SEM, Московская обл., 2014 год)

Показатель	Самцы (а) ( n =10) Самки ( n =10)
АлАТ, IU/л	164±36	174±33
АсАТ, IU/л	88±29	109±36
Глюкоза, ммоль/л	0,8±0,3	1,4±0,2
КК, IU/л	985±159	1388±362
Креатинин, мкмоль/л	46±10	47±5
ЛДГ, IU/л	3798±417	3430±220
Лактат, мг/дл	49±16	52±6
Мочевая кислота, мкмоль/л	262±110	377±151
ЩФ, IU/л	28±16	69±45
Альбумин, г/дл	21±2	25±0,5
Мочевина, мг/дл	48±2	56±1а
Общий белок, г/л	24±6	34±2
Триглицериды, мг/дл	3±1	11±6
Холестерол, мг/дл	57±11	85±18
Гемоглобин, г/л	93±15	172±6а
П р и м еч а ни е. АлАT и	АсАТ — соответственно аланин- и
аспартатаминотрансфераза,	КК — креатинфосфокиназа, ЛДГ —
лактатдегидрогеназа, ЩФ —	щелочная фосфатаза.
а Буквы в верхнем индексе указывают, что различия с показате-
лями у самцов статистически значимы при P < 0,05.

Объем крови у амфибий небольшой, что осложняет ее биохимические исследования. Поэтому нам удалось определить лишь некоторые показатели (табл. 4). У Rana temporaria имелись половые различия: у самок б о льшая, чем у самцов, активность АлАТ и АсАТ (соответственно на 6 и 19 %), креатинкиназы (на 29 %) и щелочной фосфатазы (на 60 %).

Важную роль в энергетическом обмене животных играет глюкоза, которая представляет собой конечный продукт гидролиза и обеспечивает метаболиче- ские реакции организма. Интересно, что у самок травяной лягушки (по сравнению с другими изученными нами видами) этот показатель в наибольшей степени превышал таковой у самцов — на 43 %. Возможно, что выявленное почти 2-кратное превышение содержания глюкозы у самок относительно самцов вызвано большей зависимостью самок от физических факторов среды, особенно в периоды размножения, что делает этот показатель наиболее значимым. Кроме того, обращает на себя внимание превосходство самок земноводных над самцами и по таким биохимическим показателям крови, как содержанием креатинина, лактата, мочевой кислоты, альбумина, мочевины и общего белка (на 30 %).

Гендерная особенность липидного обмена амфибий изучаемого вида заключалась в преобладание липидных метаболитов в крови самок (триглицеридов больше на 68 %, холестерола — на 33 %) по сравнению с самцами. В целом все остальные биохимические показатели крови, за исключением активности лактатдегидрогеназы, у самок травяной лягушки выше таковых у самцов.

В отношении выявленных нами межвидовых различий у амфибий следует отметить, что содержание сегментоядерных клеток в крови самцов и самок травяной лягушки (см. табл. 3) превышало аналогичные показатели у гладкой шпорцевой лягушки соответственно на 78 и 76 %, число нейтрофилов — на 78 и 71 %, эозинофилов — на 40 и 69 %. Число эритробластов в крови самцов и самок гладкой шпорцевой лягушки по сравнению с травяной оказалось больше на 47 и 80 %. Содержание нор-мобластов у самцов травяной лягушки было на 44 % ниже, чем у самцов гладкой шпорцевой лягушки. По числу палочкоядерных, сегментоядерных нейтрофилов, их сумме и числу эозинофилов самки травяной лягушки превосходили самок гладкой шпорцевой соответственно на 67; 76; 71 и 69 %. Число палочкоядерных нейтрофилов у самцов вида Xenopus laevis превышало такое у особей вида Rana temporaria на 80 %. У самцов и самок вида Rana temporaria доля эозинофилов была соответственно на 44 и 67 % выше, чем у животных вида Xenopus laevis.

Межвидовые различия по числу лимфоцитов белой крови у изучаемых представителей земноводных оказались не так очевидны. По содержанию этих агранулоцитов самцы Xenopus laevis незначительно превосходили самцов Rana temporaria . Данные по числу лимфоцитов у самок и самцов оказались аналогичными. Однако в среднем у вида Rana temporaria число лимфоцитов в крови было недостоверно (на 15 %) выше, чем у особей вида Xenopus laevis . По среднему цитохимическому коэффициенту представители травяной и гладкой шпорцевой лягушки достоверно не различались между собой.

Таким образом, у исследованных видов амфибий есть значимые видовые и гендерные различия по гомеостатическим показателям, что отражает особенности адаптации этих животных к жизни в разных биотопах.

Следует отметить, что представители ракообразных, рыб и земноводных имеют ряд общих гомеостатических признаков, несмотря на большую эволюционную удаленность. Клеточный состав циркулирующих жидкостей представлен гранулярными, агранулярными и ювенильными формами. Гемоцитарная формула речных раков разных видов содержит определенные нами четыре типа гемоцитов в близком процентном соотношении. Лейкограмма изучаемых нами низших позвоночных гидробионтов имеет как сходство, так и некоторые различия по доле разных типов лейкоцитов; интенсивность эритропоэза у них примерно одинакова. Биохимия внутренней среды у представителей этих разных таксонов также довольно сходна: в составе гемолимфы речных раков, а также плазмы крови рыб и земноводных мы обнаружили глюкозу, белки, триглицериды в сопоставимых количествах.

Итак, у изученных гидробионтов нами установлены следующие значения показателей гомеостаза, которые можно принять в качестве критериев адаптированности животных к условиям обитания, а также устойчивости природных биоценозов и адекватности условий содержания в аквакультуре: у раков — общее число клеток в гемолимфе в пределах 700800 кл/мкл; у рыб и лягушек число число эритроцитов 1-2 млн/мкл, лейкоцитов 50-150 тыс/мкл; содержание общего белка в плазме крови позвоночных гидробионтов — 2-3 %, глюкозы — 1-4 ммоль/л, триглицеридов — 0-400 мг%; средний цитохимический коэффициент содержания неферментного катионного белка в лизосомах фагоцитирующих клеток — в пределах 1,5-2,1.