Гематологические и иммунологические показатели инфицированных BLV лактирующих маститных коров

Введение. Энзоотический лейкоз крупного рогатого скота (BLV) вызывает ретровирус, под действием которого нарушается регуляция иммунной системы и повышается риск развития вторичных инфекций, в том числе маститов [1,2].

Лейкозная инфекция вызывает изменения апоптотических и иммунных процессов в эпителиальных клетках молочной железы коров, снижая защитную реакцию клеток к S.aureus [3,4] и другим возбудителям маститов [5,6].

Генотипическое разнообразие BLV требует глубокого изучения патогенеза инфекционного (BLV), в том числе лейкозного процесса с учетом цикличности и ритмичности в живом организме [7], с учетом уровня показателей обменных процессов и их корреляции с клинико-гематологическими показателями [8,9].

Цель исследования. Изучить морфологию и биохимию крови у инфицированных BLV лактирующих маститных коров.

Условия, материалы и методы. Объект исследований инфицированные BLV, РИД-положительные голштинизированные лактирующие коровы (возраст 46 лет) из животноводческого хозяйства Амурской области. Исследования проводили в летний период. Лактирующих коров группировали по пять голов: контрольная – клинически здоровые, свободные от BLV коровы; первая – инфицированные BLV без клинических признаков лейкоза и других заболеваний; вторая - инфицированные BLV без клинических признаков лейкоза с маститами. Анализ молока на мастит проводили в конце дойки из каждой четверти с использованием быстрого маститного теста (БМТ) «Масттест».

Биохимические исследования сыворотки крови проводили на фотометре StatFax 1904+R с применением наборов реагентов, а фракции белка -нефелометрическим методом [10]. Уровень общего белка измеряли на рефрактометре. Концентрацию эритроцитов и лейкоцитов определяли по общепринятым методикам[11]. Лизоцим определяли методом В.Г. Дорофейчук (1968) [12]. Проводили стандартную обработку полученных результатов.

Результаты и обсуждение. При бактериологическом исследовании молока от лактирующих лейкозных коров с субклиническим маститом диагностировались бактерии семейств Staphylococcaceae, Streptococcaceae и Enterococcaceae.

У инфицированных BLV коров, в сравнении со здоровыми, были выше концентрации эритроцитов на 5,0%, гемоглобина на 10,2 % (р<0,05, r<0,198), лейкоцитов на 13,8%, эозинофилов в 1,4 раза, лимфоцитов в 1,2 раза; ниже было количество сегментоядерных нейтрофилов на 55,6% и моноцитов на 42,9% (табл.1).

У маститных инфицированных BLV коров, в сравнении со здоровыми, были выше концентрации лейкоцитов на 3,1%, лимфоцитов на 12,3%. палочкоядерных нейтрофилов (в 2,0 раза) и моноцитов в 2,0 раза; ниже было количество эритроцитов на 36,7% (р<0,05, r<0,198), гемоглобина на 0,6%, сегментоядерных нейтрофилов на 26,1% и эозинофилов на 25,0%.

Таблица 1 - Гематологические показатели лактирующих коров, M±m, n=5

Показатель	Гр	/ ппы животных		Межгрупповое соотношение, %
	Контрольная	Первая	Вторая	1-ой к контрольной	2-ой к контрольной	2-ой к 1-ой
Эритроциты, 1012/л	6,0±0,35	6,3±0,23 ***	3,8±0,54**	105,0	63,3* r<0,198	60,3
Гемоглобин, г/л	119,4±1,63	131,6±4,5 2 ***	118,7±3,8 7 ***	110,2* r<0,198	99,4	90,2
Цветовой показатель	0,8±0,05	0,9±0,05 ***	0,6±0,07**	112,5	75,0* r<0,785	66,7** r<0,62 9
Лейкоциты,109/л	6,5±0,89	7,4±1,90**	6,7±0,79**	113,8	103,1	90,5
Эозинофилы, %	2,4±1,17	3,4±1,08	1,8±0,58*	141,7	75,0	52,9
Палочкоядерные,%	0,4±0,24	0,4±0,24	0,8±0,37	100,0	200	200
Сегментоядерные, %	30,6±10,61	13,6±2,80 **	22,6±5,44 **	44,4	73,9	166,2
Лимфоциты, %	65,2±11,41	80,8±4,31 ***	73,2±6,75 ***	123,9	112,3	90,6
Моноциты,%	1,4±0,40	0,8±0,58	2,8±1,46	57,1	200,0	350,0
Фагоцитарная активность нейтрофилов, %	97,8±1,50	89,8±6,82 ***	91,8	80,5±12,7 8**	82,3	89,6

Примечание: *р<0,05; **р<0,01, ***р<0,001; метамиелоциты, миелоциты и базофилы отсутствовали.

В крови у инфицированных BLV коров содержание плазматических клеток и мононуклеаров не превышало 3,0%.

У инфицированных BLV коров с маститами более низкими были уровни эритроцитов на 39,7%, гемоглобина на 0,8%, цветового показателя на 33,3% (р<0,01, r<0,629), лейкоцитов на 25,7%, эозинофилов на 47,1%, лимфоцитов на 20,8% и более высокими - палочкоядерных (в 2,0 раза) и сегментоядерных (в 2,3 раза) нейтрофилов, моноцитов (в 3,5 раза), чем у лейкозных коров без мастита.

У инфицированных BLV коров более высокими, чем у здоровых коров, были уровень общего белка на 7,1%, гамма-глобулинов в 1,5 раза (р<0,01, r<0,825), мочевины на 8,2%; низкими - концентрации альбуминов на 23,6 %, альфа-глобулиновна 0,9%, бета-глобулинов на 15,2%, и креатинина на 42,8% (р<0,01, r<0,030) (табл.2).

У инфицированных BLV маститных коров, в сравнении со здоровыми, были выше альбумины на 16,2%, альфа-глобулины на 17,7%, гамма-глобулины в 1,3 раза, мочевина на 12,2%; ниже, чем - общий белок на 2,5%, бета-глобулины на 22,4% и креатинин на 31,3%.

Белковый обмен у инфицированных BLV коров с маститами отмечен более высокими концентрациями альбумина в 1,5 раза, а-глобулинов на 18,8%, мочевины на 3,8 % и креатинина на 20,1% и, более низкими - общего белка на 9,0%, в- и ү-глобулинов, соответственно на 8,6% и 15,4%, чем у лейкозных коров без мастита.

В группе коров, инфицированных BLV, были ниже чем у здоровых концентрации глюкозы на 50,0% (р<0,01, r<-0,103), холестерина на 28,1%, АЛТ на 3,3%; выше были - уровни триглицеридов в 3,0 раза, билирубина на 5,4%, АСТ на 0,8% и щелочной фосфатазы на 10,7%.

Лизоцимная активность сыворотки крови у инфицированных BLV коров превышала показатель на 9,9% (у здоровых коров) и 14,6% (с маститами).

Фагоцитарная активность нейтрофилов у инфицированных BLV коров была ниже, чем на 8,2% (у здоровых коров) и 17,7% (с маститами).

Таблица 2 - Биохимические показатели крови лактирующих коров, М±m, n=5

Показатель	Группы животных			Межгрупповое соотношение, %
	Контрольна я	Первая	Вторая	1-ой к контрольной	2-ой к контроль -ной	2-ой к 1-ой
Общий белок, г/л	87,0±3,13	93,2±2,85** *	84,8±2,94** *	107,1	97,5	91,0
Альбумины, %	19,1±2,09	14,6±1,91**	22,2±3,24**	76,4	116,2	152,1
Глобулины, %: альфа	11,3±2,33	11,2±2,36**	13,3±3,82*	99,1	117,7	118,8
бета	46,8±2,45	39,7±5,01**	36,3±5,05**	84,8	77,6	91,4
гамма	22,5±1,17	34,5±3,2***	29,2±5,64**	153,3** r<0,825	129,8	84,6
Мочевина, ммоль/л	4,9±0,49	5,3±0,29***	5,5±0,44***	108,2	112,2	103,8
Креатинин, мкмоль/л	73,1±2,43	41,8±7,19*	50,2±10,22*	57,2** r<0,030	68,7	120,1
Холестерин, ммоль/л	3,2±0,34	2,3±0,25***	3,2±0,29***	71,9	100,0	139,1* r<0,72 8
Глюкоза, ммоль/л	1,6±0,07	0,8±0,17**	0,7±0,05***	50,0** r<-0,103	43,8** r<-0,614	87,5
Триглицерид ы, ммоль/л	0,02±0,01	0,06±0,017*	0,07±0,03	300,0	350,0	116,7
Кальций, ммоль/л	2,2±0,05	2,0±0,09***	2,3±0,02***	90,9	104,5* r<0,612	115,0* * r<0,55 9
Фосфор, ммоль/л	1,1±0,05	1,3±0,08***	1,7±0,25**	118,2* r<0,526	154,5	130,8
Магний, ммоль/л	0,8±0,05	0,7±0,01***	0,8±0,03***	87,5	100,0	114,3
Калий, ммоль/л	3,9±0,17	4,2±0,08***	4,2±0,30***	107,7	107,7	100,0
Билирубин, мкмоль/л	7,4±1,71	7,8±1,95*	7,2±0,99**	105,4	97,3	92,3
ЩФ, Ед/л	72,5±6,83	80,7±3,97** *	96,9±11,47* *	110,7	132,5	119,7
АСТ, Ед/л	83,6±8,34	84,3±11,88* *	87,2±16,71* *	100,8	104,3	103,4
АЛТ, Ед/л	24,4±2,36	23,6±1,48** *	28,8±1,54** *	96,7	118,0	122,0* r<0,36 5
Лизоцимная активность сыворотки крови,%	15,3±1,26	16,6±0,49** *	109,9	17,2±0,48** *	114,6	104,2

Примечание: *р<0,05; **р<0,01, ***р<0,001

У инфицированных BLV маститных коров были ниже, чем у здоровых концентрации глюкозы на 56,2% (р<0,05, r<-0,612), билирубина на 2,7 %; выше -уровни триглицеридов в 3,5 раза, щелочной фосфатазы на 32,5%, АСТ на 4,3% и АЛТ на 18,0%.

Углеводный, жировой, пигментный и ферментный обмены веществ у лейкозных маститных коров показал более высокие концентрации холестерина на 39,1% (р<0,05, r<0,728), триглицеридов на 15,0% (р<0,01, r<0,559), фосфора на 30,8%, магния на 14,3 %, щелочной фосфатазы на 19,7%, АСТ на 3,4%, АЛТ на 22,0% (р<0,05, r<0,365). Концентрации глюкозы на 12,5% и билирубина на 7,7% были ниже, чем у лейкозных коров без мастита.

Нарушения минерального обмена у лейкозных коров характеризовались более низкими концентрациями, чем в контрольной группе, кальция на 9,1%, фосфора на 18,2% (р<0,05, r<0,526), магния на 12,5%. Уровень калия был выше на 7,7%.

У инфицированных BLV маститных коров больше чем у здоровых были концентрации кальция на 4,5% (р<0,05, r<0,612), фосфора на 54,5% и калия на 7,7%. Минеральный обмен указывал на более высокие концентрации фосфора на 30,8% и магния на 14,3%, чем у лейкозных коров без мастита.

Гематологические исследования показали, что у исследуемых инфицированных BLV лактирующих коров была начальная, алейкемическая стадия лейкозного процесса, при которой концентрация лейкоцитов в крови была в пределах физиологической нормы, а количество лимфоцитов было выше 70% [13,14].

Нормальный уровень лейкоцитов у лейкозных коров может быть связан с глубокой и длительной ремиссией [7,15]. У лейкозных коров с маститами концентрация лейкоцитов не отражала воспалительный процесс в молочной железе коров, т.к. степень поражения альвеол при субклиническом мастите незначительная.

У лейкозных коров с маститами концентрация эритроцитов (3,8±0,54х1012/л, р˂0,01) и цветовой показатель (0,6±0,07, р˂0,01) были ниже, соответственно на 39,7% и 33,3% (р˂0,01, r=0,625), чем у лейкозных коров без маститов. Анемия, скорее всего, была обусловлена хронической вирусной (BLV) и бактериальной (Staphylococcaceae, Streptococcaceae и Enterococcaceae) инфекциями и лейкозным процессом, при которых понижена реакция костного мозга на эритропоэтин и сокращен срок жизни эритроцитов [16].

Лизоцимная активность сыворотки крови лейкозных коров превышала на 9,9% и 14,6% (мастит), показатель в контрольной группе. Лизоцим стимулирует фагоцитоз и изменения содержания фермента может способствовать атипичному течению патологического процесса [15]. Фагоцитарная активность крови лактирующих лейкозных коров была ниже, чем у здоровых коров на 8,2% и 17,7% (мастит).

Нарушения обмена веществ у инфицированных BLV коров характеризовались диспротеинемией, гиполикемий, нарушениями ферментного и пигментного обменов веществ, что часто отмечается при лейкозе крупного рогатого скота [8]. Такие нарушения были наиболее выражены у инфицированных лейкозом коров с маститами: высокий уровень билирубина, щелочной фосфатазы и аминотрансфераз.

Выводы.

В начальной стадии болезни у инфицированных BLV лактирующих коров с субклиническим маститом отмечались признаки нарушения гепатобилиарной системы: анемия (концентрация эритроцитов 3,8±0,54х1012/л, р˂0,01), лимфоцитоз (80,8±4,31 % (р˂0,001)), гипогликемия (0,7±0,05 ммоль/л, р˂0,001), гиперпротеинемия (84,8±2,94 г/л, р˂0,001), гипоальбуминемия (22,2±3,24 %, р˂0,01), повышенный уровень билирубина (7,2±0,99 мкмоль/л, р˂0,01), щелочной фосфатазы (96,9±11,47 Ед/л, р˂0,01) и аспартатаминотрансферазы (87,2±16,71 Ед/л, р˂0,01). Лизоцимная активность сыворотки крови лейкозных маститных коров на 14,6% превышала, а фагоцитарная активность была ниже на 17,7 % чем у здоровых коров.