Гемофильтроцитодиагностика - морфологический метод выявления злокачественных новообразований

Введение . Современные достижения науки и техники существенно расширили возможности распознавания злокачественных новообразований (ЗНО). Тем не менее, несмотря на широкий арсенал вспомогательных методов исследования, врач по-прежнему испытывает существенные затруднения в постановке правильного диагноза, что в конечном итоге отражается на результатах лечения.

Именно на этапах обследования больных в поликлиниках и стационарах общей лечебной сети возникает наибольшее количество ошибок в диагностике, следствием которых является задержка и нередко невозможность оказания им радикальной помощи. В настоящее время на уровне амбулаторно-поликлинического звена ЛПУ активно выявляют не более 10% всех больных со ЗНО (Чиссов В.И., Трахтенберг А.Х., 2001).

Другая основная причина запущенности онкологических больных, по мнению специалистов РОНЦ им. Н.Н. Блохина, до половины случаев обусловлена скрытым атипичным течением болезни. Серьезные трудности возникают при распознавании опухоли, развивающейся на фоне другого патологического процесса. До сих пор, например, значителен удельный вес диагностических ошибок при распознавании рака легкого у больных? страдающих хроническим туберкулезом этого органа.

Один из основных показателей состояния и качества оказания онкологической помощи: процент морфологического подтверждения диагноза ЗНО, к сожалению, в целом по Российской Федерации за 2007 г. имеет прирост всего 1%. Морфологическое подтверждение злокачественного характера опухоли является основным этапом диагностического процесса.

Цель исследования. Разработать и изучить клиническую значимость гемофильтроцитологического исследования венозной крови – лабораторного метода морфологической диагностики злокачественных новообразований (ЗНО).

Материалы и методы . В исследование были включены 52 больных. Из них 23 мужчин и 29 женщин. Возраст обследуемых пациентов составил от 23 до 71 года. Перед исследованием крови осуществляли сборку устройства для микропросеивания венозной крови. На дно стеклянного цилиндра, заключенного в пластиковый кожух, помещали пластмассовую решетку с закрепленным на ней с помощью металлического кольца калиброванным фильтром. Через верхнее отверстие в стеклянный цилиндр наливали из пробирки венозную кровь больного, взятую независимо от приема им пищи из локтевой вены в количестве 9 мл, разведенную в 1 мл цитрата натрия. Затем пропускали всю исследуемую венозную кровь через калиброванный фильтр с диаметром пор 6 мкм, при этом происходит задержка раковых клеток в осадке на фильтре. Осадок наносили на предметные стекла, предварительно обезжиренные и охлажденные для лучшего прилипания клеток и высыхания. Фиксировали мазки-отпечатки 3%-ным спиртовым раствором Лейшмана 2-4 мин. Затем смывали дистиллированной водой и красили азур-эозиновой смесью в соотношении 3:1 в течение 6-8 мин. После покраски промывали дистиллированной водой, сушили на воздухе и приступали к просмотру под микроскопом.

Результаты исследования и их обсуждение. Ангиогенез является ключевым фактором в развитии рака. Благодаря образованию новых сосудов опухоль более 2 мм в диаметре получает необходимые для роста и сосудистой инвазии питательные вещества и кислород, поскольку поддержание жизнеспособности таких опухолей за счет одной пассивной диффузии уже не возможно [1, 2]. Ангиогенез – сложный процесс, в регуляции которого участвуют как стимулирующие, так и ингибирующие факторы [3]. Он начинается тогда, когда начинают доминировать факторы, стимулирующие ангиогенез, т.е. факторы, которые способствуют росту новых сосудов. Это в первую очередь фактор роста эндотелии сосудов (VEGF), фактор роста фибробластов (FGF) и трансформирующие факторы роста альфа и бета, они известны как факторы «запуска» ангиогенеза [4,5].

VEGF – это один из наиболее активных регуляторов как физиологического, так и патологического ангиогенеза [6]. Он способствует росту сосудистой сети внутри опухоли, однако и структурно, и функционально эта сеть отличается от нормальной: сосуды незрелые, проницаемы и очень извиты. В развитии таких патологи- ческих сосудов существенную роль играет действие VEGF на эндотелиальные клетки [7]. Высокая экспрессия VEGF в конечном итоге повышает проницаемость сосудов in vitro, что ведет к увеличению интерстициального и внутри-опухолевого давления, а следовательно, способствует проникновению опухолевых клеток в сосудистое русло. Таким образом, уже в начальных стадиях новообразований высока вероятность возникновения состояния карцинемии. Из 50 выявленных онкологических больных у 18 злокачественное новообразование диагностировано в I-II стадиях, у 22 – в III стадии и у 11 – в IV стадии.

Рис. 1. Больной И. Цитологическое иссле- дование фильтрата венозной крови. Среди эритроцитов 2 опухолевые клетки фильтрата венозной крови. Шесть опухолевых клеток мелких размеров с крупными ядрами, контуры кото-

Рис . 2. Больная Н. Цитологическое исследование

рых неровные

В подавляющем большинстве случаев из 17 больных после радикального оперативного вмешательства у 15 обнаружены в периферической крови опухолевые клетки, что потребовало проведение дополнительно полихимиотерапии

12 больным, согласным на комбинированное лечение.

Динамическое наблюдение за 5 больными в течение первого года после проведенной ради- кальной операции не выявило появление раковых клеток в периферической крови. Проведенные общепринятые методы обследования, вклю- чая инструментальные, также не выявили рецидива.

Характеристика полученных результатов представлена в таблице 1.

Таблица 1

Полученные результаты гемофильтроцитологического исследования венозной крови онкологических больных

Выводы . Таким образом, гемофильтроцито-диагностика позволяет с достаточной эффективностью выявлять у больных при первичном обращении ЗНО, оценить необходимость проведения после их радикального хирургического лечения адъювантной полихимиотерапии, ее полноту и качество, а также использовать при динамическом наблюдении.