Гистологические и морфометрические изменения яичника кур под влиянием адаптогенов

В Красноярском крае отмечается довольно высокая заболеваемость цыплят различных пород в раннем возрасте и связанная с ней низкая продуктивность. Среди них и аутосексный четырехлинейный кросс «Хайсекс браун», который недостаточно адаптирован к условиям птицефабрик края. У птиц механизмы иммунной системы несовершенны, так как у них отсутствует связь плода с материнским организмом [1, 3, 4]. В доступной нам литературе недостаточно сведений о формировании и развитии яичников куриц при добавлении в качестве иммуномодуляторов природных адаптогенов, которые играют значительную роль для полноценного роста цыплят с высокой резистентностью и продуктивностью. Выяснение механизма этой взаимосвязи в возрастном аспекте даст возможность применить направленную коррекцию иммунобиологического статуса птицы, а в дальнейшем повысить ее продуктивность. Все вышеизложенное и предопределило актуальность и направленность наших исследований.

Цель исследований . Изучить гистологические и морфометрические показатели яичников у курочек четырехлинейного аутосексного кросса «Хайсекс браун» в возрасте от 40 до 180 дней под влиянием адапто-генов растительного (шроты биоженьшеня, облепихи) отдельно и в сочетании, а также животного происхождения (энтерофар).

Материалы и методы исследований . Объектом исследований служили куры-несушки кросса «Хай-секс браун». Опыты проводились на птицефабрике «Заря» Емельяновского района Красноярского края. Материалом для гистологических и морфометрических исследований служили яичники кур. В течение всего периода опыта велись клинические наблюдения за цыплятами, учитывались случаи заболеваний и вынужденного убоя, проводились контрольные взвешивания.

Фиксировали полученный материал в 10 %-й нейтральном формалине. Заливку в парафин и изготовление парафиновых срезов толщиной 5–6 мкм с их окрашиванием гематоксилин-эозином проводили на санном микротоме по общепринятым методикам.

Живую массу и абсолютную массу внутренних органов цыплят определяли взвешиванием на электронных весах серии EK-200i с точностью до 0,001 г. О скорости роста яичников птиц судили по абсолютной и относительной величине прироста, рассчитанной по формуле Броди.

Изучение гистологической структуры срезов яичников от опытных и контрольных курочек проводили под микроскопом «Микмед-5». Определение плотности расположения клеток на условной единице площади препарата, равной 0,25 см2 (на 30 препаратах в 120 полях зрения в каждом), исследовали при помощи объ-ект-микрометра «ОМ-П №135» с применением бинокулярного микроскопа «Микмед-5». Статистическую обработку полученных данных проводили с применением компьютерной программы Excel 2003. Микрофотосъемку гистопрепаратов проводили на камере DIGITAL CAMERA CAM V200 и фотокамере CANON Power Shot A710 IS. Достоверность полученных результатов определяли с помощью критериев Стьюдента.

Схема опыта . Под опыт было взято 2160 цыплят. Сформировано четыре группы цыплят по принципу аналогов, одна из которых контрольная. В каждой группе по 540 гол. цыплят (табл. 1). Добавляли адаптоге-ны к основному рациону вручную с момента вылупления цыплят в течение 30 дней однократно с утренним кормом. Шроты применяли в соответствии с рекомендациями авторов, проводивших эксперименты по изучению влияния оптимальных доз адаптогенов [2, 5].

Схема опыта

Таблица 1

Номер группы	Количество голов	Введение адаптогенов с расчетом живой массы цыпленка в возрасте от              1 до 30 дней
1	540	Контроль (без добавок к ОР*)
2	540	ОР* + энтерофар + шрот облепихи (энтерофар 0,2 г на 1 кг живой массы, облепиха – 0,7г на 1 кг живой массы)
3	540	ОР* + шроты биоженьшеня (0,3 г на 1 кг живой массы)
4	540	ОР* + шрот облепихи + шрот биоженьшеня (облепиха – 0,7 г на 1 кг живой массы, биоженьшень 0,3 г на 1 кг живой массы)

* ОР – основной рацион .

Продолжительность опыта составляла 180 дней, в течение которого проводились контрольные убои цыплят до начала опыта, а также через 40, 60, 120, 180 дней от начала опыта, по 6 цыплят из каждой группы.

Энтерофар был изготовлен в лаборатории Красноярского государственного аграрного университета в соответствии с ТУ 938002-40407001-97 от 01.02.1998 г. (разработано Красноярским госагроуниверситетом. Регистрационное удостоверение Департамента ветеринарии РФ № РООЗ 2. 1800 от 10.03.1998г.).

Шроты каллусной культуры биоженьшеня и шрот облепихи были получены после экстракции данного сырья на предприятии ООО «Канский биокомбинат». Жмых после экстракции первичного сырья был высушен в термостате и измельчен до состояния мелкодисперсного порошка в лаборатории Красноярского государственного аграрного университета.

Результаты исследований и их обсуждение . Курица – яйцекладущая птица. Оплодотворение у кур происходит внутри организма, а развитие эмбриона – во внешней среде. Взрослые птицы в норме имеют только левый развитый и функционирующий яичник и яйцевод. Продуктивность домашней птицы, особенно курицы-несушки, зависит от деятельности органов воспроизведения.

В наших опытах при изучении яичника курочек опытных и контрольных групп в возрасте 40 дней при внешнем осмотре различий не найдено. При гистологическом исследовании срезов яичника в этом возрасте у курочек как опытных, так и контрольных групп, отмечена тенденция к увеличению линейных размеров яичных фолликулов, что свидетельствует о подготовке яйцеклеток к созреванию. Линейные размеры яйцеклеток на единицу площади поперечного сечения в опытных группах курочек достоверно выше на 39,28 % в группе с применением энтерофара и облепихи, на 14,28 – в группе с применением шротов биоженьшеня, на 28,57 % – в группе с применением шротов биоженьшеня и облепихи (табл. 2) по сравнению с птицей контрольной группы. Количество яйцеклеток на единицу площади поперечного сечения достоверно выше у курочек опытных групп (рис. 1) на 65,99 % в группе с применением энтерофара и облепихи, на 17,89 – в группе с применением шротов биоженьшеня, на 59,67 % – в группе с применением шротов биоженьшеня и облепихи (табл. 2) по сравнению с птицей контрольной группы (рис. 2).

Рис. 1. Яичник курочки опытной группы.

Возраст 40 дней. Большое количество растущих фолликулов. Окраска гематоксилин – эозин (об. 10х)

Рис. 2. Яичник курочки контрольной группы.

Возраст 40 дней. Малое количество растущих фолликулов. Окраска гематоксилин – эозин (об. 10х)

Таким образом, уже в возрасте 40 дней у курочек опытных групп отмечено достоверное увеличение линейных размеров яйцеклеток и их количества по сравнению с курочками контрольной группы, что свидетельствует о целенаправленном действии адаптогенов на развитие репродуктивной системы птиц.

В возрасте 60 дней линейные размеры яйцеклеток (рис. 3) на единицу площади поперечного сечения в опытных группах курочек достоверно выше на 23,68 % в группе с применением энтерофара и облепихи, на 17,10 % – в группе с применением шротов биоженьшеня, на 10,52 % – в группе с применением шротов биоженьшеня и облепихи (табл. 2) по сравнению с курочками контрольной группы (рис. 4). Количество яйцеклеток на единицу площади поперечного сечения достоверно выше у курочек опытных групп (рис. 5) на 60,81 % в группе с применением энтерофара и облепихи, на 72,66 – в группе с применением шротов биоженьшеня, на 30,83 % – в группе с применением шротов биоженьшеня и облепихи (табл. 2) по сравнению с птицей контрольной группы (рис. 6).

Рис. 3. Яичник курочки опытной группы. Возраст

60 дней. Растущий фолликул. Окраска гематоксилин – эозин (об. 40х)

Рис. 4. Яичник курочки контрольной группы. Возраст 60 дней.Растущий фолликул. Окраска гематоксилин – эозин (об. 40х)

Рис. 6. Яичник курочки контрольной группы.

Возраст 60 дней. Один растущий фолликул в поле зрения. Окраска гематоксилин – эозином (об. 10х)

Рис. 5. Яичник курочки опытной группы.

Возраст 60 дней. Большое количество растущих фолликулов. Окраска гематоксилин – эозин (об. 10х)

Таким образом, показатели линейных размеров и количество яйцеклеток на единицу площади поперечного сечения достоверно выше у курочек в возрасте 60 дней в опытных группах по сравнению с контрольной группой.

В 120 дней линейные размеры яйцеклеток на единицу площади поперечного сечения в опытных группах курочек достоверно выше на 23,58 % в группе с применением энтерофара и облепихи, на 20,75 – в группе с применением шротов биоженьшеня, на 9,43 % – в группе с применением шротов биоженьшеня и облепихи (табл. 2) по сравнению с птицей контрольной группы. Количество яйцеклеток на единицу площади поперечного сечения достоверно выше у курочек опытных групп (рис. 7) на 30,53 % в группе с применением энтерофара и облепихи, на 19,34 % – группе с применением шротов биоженьшеня, на 22,55 % – в группе с применением шротов биоженьшеня и облепихи по сравнению с птицей контрольной группы (рис. 8, табл. 2).

Рис. 7. Яичник курочки опытной группы. Возраст Рис. 8. Яичник курочки контрольной группы. Возраст

120 дней. Растущие фолликулы. Окраска гематоксилин – эозин (об. 40х)

120 дней. Растущие фолликулы. Окраска гематоксилин – эозин (об. 40х)

Таким образом, увеличение линейных размеров и количество яйцеклеток на единицу площади поперечного сечения у курочек в опытных группах свидетельствуют о более раннем процессе полового созревания, в отличие от контрольной группы птицы, в которой количество яйцеклеток достоверно меньше.

В возрасте 180 дней линейные размеры яйцеклеток на единицу площади поперечного сечения в опытных группах курочек достоверно выше на 9,68 % в группе с применением энтерофара и облепихи, на 6,12 – в группе с применением шротов биоженьшеня, на 3,06 % – в группе с применением шротов биоженьшеня и облепихи (табл. 2) по сравнению с курочками контрольной группы. Количество яйцеклеток на единицу площади поперечного сечения достоверно выше у курочек опытных групп на 27,55 % в группе с применением энтерофара и облепихи, на 36,15 – в группе с применением шротов биоженьшеня, на 21,90 % – в группе с применением шротов биоженьшеня и облепихи (табл. 2) по сравнению с птицей контрольной группы.

Увеличение количества яйцеклеток, а также их линейных размеров в яичнике у курочек опытных групп (рис. 9–10) по сравнению с контрольными (рис. 11–12) свидетельствует о более интенсивном развитии их под влиянием адаптогенов растительного и животного происхождения (табл. 2).

Рис. 9. Яичник курочки опытной группы. Возраст 180 дней. Первичные фолликулы. Окраска гематоксилин – эозин (об. 40х)

Рис. 10. Яичник курочки контрольной группы.

Возраст 180 дней. Растущие фолликулы. Окраска гематоксилин – эозин (об. 40х)

Рис. 11. Яичник курочки опытной группы.

Возраст 180 дней. Первичный фолликул в стадии формирования гладкомышечного слоя теки. Окраска гематоксилин – эозин (об. 40х)

Рис. 12. Яичник курочки контрольной группы.

Возраст 180 дней. Растущие фолликулы Окраска гематоксилин – эозин (об. 40х)

Таблица 2

Влияние адаптогенов растительного и животного происхождения на морфогенез яичников курочек в возрасте 40–180 дней

Адаптогены, г/кг живой массы	Масса яичников без растущих фолликулов, г	Линейные размеры яйцеклеток в месте поперечного сечения, мкм	Количество яйцеклеток на единицу площади поперечного сечения (абсолютные цифры)
Курочки в возрасте 40 дней
Контроль	0,05±0,04	0,56±0,13	28,17±5,61
Энтерофар /облепиха 0,2 г /0,7 г	0,06±0,04	0,78±0,02	46,76±4,63**
Биоженьшень 0,3 г	0,07±0,08	0,64±0,12	33,21±2,67**
Биоженьшень/облепиха 0,3 г/0,7 г	0,07±0,02	0,72±0,01	44,98±5,39**
Курочки в возрасте 60 дней
Контроль	0,08±0,01	0,86±0,23	35,96±6,03
Энтерофар /облепиха 0,2 г/0,7 г	0,11±0,07	0,94±0,08	57,83±3,24**
Биоженьшень 0,3 г	0,10±0,01	0,79±0,14	62,09±2,34**
Биоженьшень/облепиха 0,3 г/0,7 г	0,09±0,002	0,84±0,12	47,05±1,87*
Курочки в возрасте 120 дней
Контроль	0,10±0,02	1,06±0,02	57,94±3,21
Энтерофар /облепиха 0,2 г /0,7 г	0,17±0,03*	1,31±0,13	75,63±1,83**
Биоженьшень 0,3 г	0,13±0,001	1,28±0,06*	69,15±2,84**
Биоженьшень/облепиха 0,3 г /0,7 г	0,11±0,02	1,16±0,09	71,01±1,14**
Курочки в возрасте 180 дней
Контроль	0,12±0,02	1,96±0,11	64,37±5,62
Энтерофар /облепиха 0,2 г/0,7 г	0,18±0,03	2,15±0,32*	82,11±2,09**
Биоженьшень 0,3г	0,15±0,02	2,08±0,01	87,64±3,07**
Биоженьшень/ блепиха 0,3 г/ 0,7 г	0,14±0,01	2,02±0,23	78,47±1,09*

* P < 0,05; ** P < 0,01; *** P < 0,001.

Заключение . Применение шротов адаптогенов (облепихи, биоженьшеня, энтерофара) способствует более раннему созреванию яйцеклеток у курочек и увеличению их количества. При этом необходимо отметить, что наиболее интенсивный рост и развитие яйцеклеток, увеличение их линейных размеров отмечается у опытных курочек в возрасте 40 дней. Этот фактор необходимо учитывать при выращивании маточного стада кур-несушек, а применение адаптогенов растительного и животного происхождения способствует нормализации постнатального развития яичников как у молодняка, так и у взрослого поголовья птицы.

Данных по развитию яйцеклеток под влиянием адаптогенов в доступной нам литературе не найдено. Поэтому, исходя из наших опытов, можно сделать вывод, что адаптогены растительного и животного происхождения как в отдельности, так и в сочетании, дают возможность осуществлять направленную коррекцию постнатального морфогенеза яичников у курочек и могут применяться в качестве существенной замены дорогих фармацевтических препаратов для стимуляции иммунитета.