Гистологические и морфометрические изменения в печени поросят при неспецифическом гастроэнтерите и его коррекции пробиотическими препаратами

Известно, что гастроэнтерит является постоянным спутником новорожденных в первые дни жизни и, как правило, продолжает беспокоить молодняк и в более старшем возрасте [3; 4].

Поэтому одним из важнейших направлений современной науки ветеринарной медицины является разработка и совершенствование средств и методов ранней диагностики болезней молодняка сельскохозяйственных животных и на этой основе создание надежной защиты от болезней, среди которых часто регистрируются болезни пищеварительной системы.

Цель данных исследований изучить гистологические и морфометрические изменения печени поросят, больных неспецифическим гастроэнтеритом, до и после применения пробиотических препаратов.

Материалы и методы

Исследования проводили в период с 2006 по 2010 г. в лаборатории кафедры физиологии и незаразных болезней животных, Института ветеринарной медицины и зоотехнии Дальневосточного государственного аграрного университета, а также в ФГУСП «Поляное», села Кресто- воздвиженки Константиновского района Амурской области.

Объектом исследования были поросята-отъемыши живой массой 10-13 кг в возрасте 3540 дней. Поросята содержались в маточниках. Животных кормили 5 раз в день, в одно и то же время суток. Рацион состоял из комбикорма СПК-3 для поросят-отъемышей и овсяной каши. Поение осуществлялось при помощи автоматической поилки.

Для проведения опыта среди поросят-отъемышей отбирались животные с явной клинической картиной гастроэнтерита, из которых были сформированы четыре группы по 10 голов в каждой. Одна группа – контрольная, три – опытных. В контрольной группе лечение проводилось по схеме, принятой в хозяйстве, применяли антибиотик амоксоил-ретард (амоксициллин) внутримышечно по 1 мл/10 кг 1 раз в день. В опытной 1 – применяли препарат «Стрепто-бифид» на фоне лечения предприятия, в опытной 2 – «Ветом 3», в опытной 3 – применяли «Интестевит» на фоне лечения, принятого в хозяйстве.

Для установления гистологических и морфометрических изменений печени на микроскопическом уровне после лечения материал получали от вынужденно убитых и павших животных. Вскрытие проводили в ФГУСП «Поляное», села Крестовоздвиженки Константиновского района Амурской области и в прозектории ИВМЗ ДальГАУ.

Для установления микроскопических изменений брался патологический материал для гистологического исследования (печень), который фиксировали в 10%-ном водном нейтральном формалине, дегидрировали в спиртах возрастающей крепости, заливали в парафиновые блоки, делали гистосрезы на санном микротоме МС-2 толщиной 4-6 мкм и окрашивали гематоксилином и эозином. Фотографии получали с помощью микроскопа Альтами 104 и цифровой фотосъемки «Samsung ST 50». Микрометриче- ские исследования печени выполняли при помощи окуляр-микрометра МОВ-1-15М. Постмортальные исследования печени проводили с учетом рекомендаций А.В. Жарова и соавт. [1]. Оценку гистологических данных проводили по методике Н.С. Кухаренко и С.Б. Стефанова [2].

Математическую обработку данных осуществляли с помощью программы Microsoft Excel 2003. Достоверность различий сравниваемых величин определяли по t- критерию Стьюдента и F- критерию Фишера.

Результаты исследований

При гистологическом исследовании печени поросят больных гастроэнтеритом нами выявлялось преобладание картины клеточной инфильтрации, дистрофии гепатоцитов. Паренхима органа полиморфна, балочное строение имело тенденцию к нарушению. Ткань печени кровенаполнена. В отдельных дольках центральные вены и синусоидальные сосуды резко расширены и заполнены элементами крови. В отдельных случаях, в основном в центре долек, встречались участки кровоизлияния, где и отмечалось разрушение паренхимы печени.

Клетки печени, как указывалось выше, в основном в состоянии дистрофии различного характера, но с преобладанием картины мелкой и крупной зернистости. В центральной части долек печени гепатоциты подвергнуты дегенеративным изменениям. В гепатоцитах наблюдалось как уменьшение размеров ядер и стертость рисунка (кариопикноз), так и увеличение их размеров и более светлая окраска (кариолизис) (рис. 1).

Клетки периферических отделов долек печени имеют зернистую цитоплазму, а ядра их светлые. Среди гепатоцитов, подвергшихся зернистой дистрофии, располагались печеночные клетки, находящиеся в состоянии некроза и некробиоза. Купферовские клетки – в стадии пролиферации, увеличены в объеме, местами образовали скопления.

Рис. 1. Зернистая дистрофия печени. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.: ок. 15, об. 90. 1 – зернистость в цитоплазме клетки; 2 – эритроциты в синусоидном капилляре;

3 – кариолизис; 4 – плазмолизис

Также отмечалось уменьшение числа неизмененных и двухъядерных клеток, увеличение голоядерных, появление безъядерных клеток печени. Отсутствие двухъядерных печеночных клеток являлось отражением резкого снижения регенераторной способности печени. В результате цитолиза некрозы представляли собой очаги гибели отдельных гепатоцитов или небольших групп клеток. Некроз клеток преимущественно локализовался в центральных зонах долек печени. Значительное расширение портальных трактов приводило к сдавливанию желчных протоков. Явления дегенерации печеночных клеток имеют тенденцию к прогрессированию, а печеночные дольки утрачивали свое трабекулярное строение. В некоторых случаях наблюдались глыбки гемосидерина в синусоидных капиллярах и участки жировой дистрофии. При этом периферическая часть долек окрашена светлее, чем центры. В клетках периферии видны пустоты, соответствующие местам жира, растворившегося в спирте и ксилоле. Печеночные клетки, содержащие жир, круглой формы, увеличены в объеме. Ядро и протоплазма отнесены к одному из полюсов клетки и сдавлены. Ядра печеночных клеток уменьшены в объеме, сморщены и интенсивно окрашены гематоксилином в темный цвет. Трабекулярное строение долек нарушено. Морфометрические изменения в печени подопытных поросят представлены в таблице 1. Из нее видно, что у больных поросят отмечалась резкая сосудистая реакция, выражающаяся в увеличении диаметра вен печени. Так, диаметр поддольковой вены увеличился в 2,5 раза по сравнению со здоровыми животными.

В результате венозного застоя печени диаметр центральной дольковой вены также увеличился в 2 раза. Со стороны триад печени больных поросят отмечалось увеличение диаметра междольковых вен в 2,2 раза. Венозное полнокровие сопровождалось артериальной гиперемией, что выражалось в увеличении диаметра артерий триад на 72%. Также наблюдались холестатические явления, которые проявлялись расширением диаметра желчного протока на 3,8 мкм по сравнению со здоровыми животными. После проведенного лечения в контрольной группе гистологическая картина печени незначительно отличалась от той, что наблюдали до лечения.

Таблица 1

Морфометрические изменения печени подопытных поросят до лечения, n=5, M±m

Показатели	Животные
	Здоровые	Больные
Диаметр поддольковой вены, мкм	53,2±1,82	133,9±3,50*
Диаметр центральной вены, мкм	35,4±1,37	70,8±2,18**
Триада:
Диаметр артерии, мкм	5,9±0,39	10,2±0,88**
Диаметр вены, мкм	29,5±1,61	65,1±3,04*
Диаметр желчного протока, мкм	8,9±0,72	12,7±1,18*

Примечание : * – р < 0,05, ** – р < 0,01

Балочное строение слабое, однако видны со-единительно-тканные септы долек. Дольки печени имели нечеткие границы, полиморфны, уменьшены в размерах. Синусоиды расширены, заполнены кровью. Междольковое пространство отечно, инфильтровано гистиолимфоцитарными и купферовскими клетками. Наблюдались небольшие очаги некроза гепатоцитов, гиперемия сосудов печени.

Центральные вены умеренно кровенаполнены, вокруг некоторых имелось разрастание фиброзной ткани, а также инфильтрация лим-фогистиоцитарными клетками, распространяющаяся на центральные части долек.

Гепатоциты находились в стадии атрофии и дистрофии, ядра слабо окрашены. Отмечался гемосидероз. В этом случае дольки уменьшены в размерах, в центральных отделах синусоиды расширены отдельными, или в виде небольших скоплений, клетками, содержащими бурый пигмент (рис. 2).

Рис. 2. Печень поросят после лечения в контрольной группе. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.: ок. 15, об. 10. 1 – гепатоциты в стадии дистрофии, 2 – глыбки гемосидерина в просветах капилляров

На микроскопическом уровне в печени поросят опытных групп наблюдалась положительная динамика. Нормализация балочного строения, хорошо выражена дольчатость, в области триад еще наблюдались лимфоидные клетки. Признаки белковой и жировой дистрофии отсутствовали, зернистость сохранялась за счет гранул желчных пигментов. Сосуды умеренно кровенаполнены. Наряду с этими изменениями имелись и явления регенерации, которая происходила главным образом путем митотического деления, о чем говорит наличие двухъядерных клеток (рис. 3). Гепатоциты полигональной формы, с однородно прокрашенной цитоплазмой. Ядро округлой формы с хорошо заметными ядрышками.

Рис. 3. Печень поросят в группе после лечения интестевитом. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.: Ок. 15, об. 40. 1 – митоз; 2 – двухъядерные гепатоциты

Таким образом, при гистологическом анализе печени было выявлено, что в контрольной группе, где лечение проводили по схеме хозяйства, наблюдали полнокровие сосудов и синусоидальных пространств печени, нарушение балочного строения, полиморфность долек, очаговый некроз и гемосидероз. В группах, где лечение проводили препаратами стрептобифид, ветом 3 и интестевит, было заметно улучшение балочного строения, сосуды были умеренно полнокровны, дольчатое строение хорошо выражено, гепатоциты полигональной формы, имелись двухъядерные клетки.

Данные гистологического исследования показали, что в группе, где лечение проводили амоксициллином, имелись нарушения строения печени. В группах, где лечение проводили с ис- пользованием стрептобифида, ветома 3 и инте-стевита, были выявлены структурные улучшения печени. Для подтверждения гистологических исследований был использован морфометрический метод.

Из данных таблицы 2 видно, что у поросят, получавших помимо амоксициллина стрепто-бифид, ветом 3 и интестевит, резко спала сосудистая реакция. Наблюдалось достоверное уменьшение диаметра поддольковой вены в первой опытной группе на 20,7% (p<0,001), в группе, где применяли ветом 3, влияние оказалось меньше – на 15,4% (p<0,001), этот показатель максимально снизился у животных, которым назначали интестевит – на 21,1% (p<0,001) по сравнению с контролем.

Таблица 2

Морфометрические изменения печени при неспецифическом гастроэнтерите поросят после лечения, n=10, M±m

Показатели	Группы
	Контрольная	Опытная 1	Опытная 2	Опытная 3
Диаметр поддольковой вены, мкм	94,2±1,60	74,7±2,24***	79,7±2,07 ***	74,3±1,48 ***
Диаметр центральной вены, мкм	50,5±1,92	41,6±1,53*	43,9±1,09**	40,0±1,03**
Триада:
Диаметр артерии, мкм	6,8±0,64	5,7±0,34*	5,0±0,31**	5,4±0,42*
Диаметр вены, мкм	43,9±2,14	32,2±1,64**	33,5±1,60**	30,7±1,73**
Диаметр желчного протока, мкм	9,8±0,77	6,6±0,29*	7,6±0,63	5,8±0,47**

Примечание : * – p<0,05, ** – p<0,01, *** – p<0,001

Диаметр центральной дольковой вены максимально снизился в третьей опытной группе, где применяли интестевит, – на 26,3 % (p<0,05). В первой и второй опытных группах этот показатель достоверно снизился на 16,1% (p>0,05) и 24,7% (p>0,05) соответственно. В контрольной группе все еще наблюдалась венозная гиперемия, диаметр центральной вены был на 42,7% больше показателя здоровых животных.

В триадах печени поросят после лечения отмечалось снижение диаметра междольковых вен в первой опытной группе на 26,7%, во второй – на 27,8% и в третьей – на 30,1%. В контрольной группе этот показатель был на 48,8% больше, чем у здоровых животных. Диаметр артерий триад в первой опытной группе достоверно снизился на 1,1 мкм (p<0,05), во второй и третьей – на 1,8 мкм (p<0,05) и 1,4 мкм (p>0,05) соответственно. Диаметр желчных протоков также снизился в первой опытной группе по сравнению с контрольной на 32,7%, на 22,4% – во второй и максимально (на 38,8%) – в третьей опытной группе.

Заключение

Структурно-функциональные изменения в печени при гастроэнтерите характеризуются острыми застойными процессами, что проявляется увеличением диаметра кровеносных сосудов – поддольковой вены до 142,8±2,83 мкм (р>0,05) и центральной вены до 75,8±3,01 мкм (р>0,05). Также увеличиваются показатели протоковой системы органов, что проявляется уве- личением желчного протока до 13,4±1,13 мкм (р>0,05). Отмечаются явления атрофии и дистрофии паренхиматозных клеток, общие нарушения архитектоники органов и клеточных элементов.

В группе, где применяли интестевит, снизились явления портальной гипертензии, о чем свидетельствует уменьшение диаметра поддольковой вены до 74,7±2,24 мкм (p>0,05), центральной вены – до 43,5±3,15 мкм (p>0,05), что на 21,3% и 13,9% меньше, чем в контрольной группе.

Таким образом, более выраженные улучшения в гистологической и морфометрической картине печени после выздоровления отмечали в группе, где проводили лечение интестевитом.