Гистологические красители на основе экстрактов коры дуба и вишни

Введение. В предыдущих исследованиях [1, 2] нами получены ядерные и цитоплазматические красители на основе экстрактов плодов и листьев некоторых представителей флоры ЦентральноЧернозёмного района России. Настоящая работа, являющаяся продолжением этой серии, ставит целью разработку красителей на основе коры некоторых широко произрастающих в нашем регионе деревьев. Издавна известно, что красильными свойствами обладает кора дуба, использующаяся для окраски шерстяных и льняных тканей. Яркий цвет характерен и для отвара вишнёвых веток, употребляемого в медицинских целях. Анализ химического состава коры дуба позволяет выделить несколько веществ, ответственных за красящие свойства. В эту группу входят флобафены, кверцетин и галловая кислота. Все они относятся к группе фенольных соединений и отличаются по углеродному скелету. Галловая кислота, обладающая восстановительными свойствами, является простейшим представителем фенольных соединений с формулой С6-С1, и используется в качестве красителя для приготовления чернил. Флобафены и кверцетин принадлежат к флавоноидам со структурой Сб-С3-С6, представленной двумя ароматическими ядрами, соединёнными трёхуглеродным фрагментом. Флобафены образуются в результате конденсации флавоноидов после обработки кислотами и представляют собой пигменты красного, оранжевого и коричневого оттенков. Полагают, что именно флобафены окрашивают кору дуба в тёмно-коричневый цвет. Кверцетин является флавонолом и, по совместительству, агликоном (несахаридным компонентом) многих растительных гликозидов [3, 4]. Химический состав коры вишнёвых деревьев в литературе описан менее подробно. Известно, что красящими свойствами в ней обладают фускофлобафен и руброфло-бафен из группы флавоноидов. Следует отметить, что флавоноиды способны образовывать окрашенные комплексы с ионами металлов, что делает их привлекательными для приготовления протравных красителей. Флобафены и кверцетин практически нерастворимы в холодной воде. Для их извлечения обычно используют горячую воду, спирт и водно-спиртовые смеси. В связи с этим в настоящей работе мы использовали двухступенчатую схему экстрагирования красящих веществ: сначала горячей водой, затем спиртом.

Материал и методы исследования. Мелко измельчённую кору дуба заливали водой, которая

Рис. 1. Окраска новым растительным красителем на основе вишнёвых веток. А. Срез миокарда крысы. Ув. 400. Б. Срез печени крысы. Ув. 1000.

должна лишь слегка покрывать сырьё сверху, доводили до кипения, держали 10 минут на медленном огне и настаивали 30 минут. Затем плотно укладывали кору в чистую стеклянную ёмкость и заливали 90% спиртом. На вторые сутки ёмкость со спиртовым раствором помещали в водяную баню на 30 минут (воду доводили до кипения, затем выдерживали на медленном огне). После этого в течение двух недель хранили в защищённом от света месте при комнатной температуре. По истечении этого срока процеживали через марлю. Экстракт мелко измельчённых веток вишни (1-2 см) готовили по такой же методике за исключением времени выдержки, которое составило в общем счёте 3-4 дня. Экстракт коры дуба был тёмно-бурого цвета, экстракт веток вишни – красно-коричневого цвета. Непосредственно перед гистологическим окрашиванием в 30 мл полученного раствора добавляли 10мл водного раствора железного купороса (2 грамма железного купороса на 50 мл дистиллированной воды).

Таким образом, в результате проведенных экспериментов получены ещё два потенциальных гистологических красителя растительного происхождения, окрашивающих цитоплазму в чёрный (бурый) и зелёный цвет. Разнообразие цветовой гаммы разработанных красителей позволяет выбирать нужные оттенки для окрашивания различных тканей и сочетать их с другими (в том числе ядерными) красителями. Важным достоинством самостоятельно приготовляемых спиртовых красителей является возможность длительного хранения и отсутствие необходимости готовить свежие растворы за 2-3 дня до эксперимента. Дополнительно следует отметить доступность и низкую себестоимость сырья, применение нетоксичных ингредиентов. Красители подходят для материала, зафиксированного в 10% растворе формалина.