Гистоморфологическая характеристика ткани печени и морфологического состава крови крыс как реакции на шрот семян кунжута

В настоящее время патология печени занимает ведущее место среди болезней органов пищеварения. По данным Всемирной организации здравоохранения, в мире более 2 миллиардов человек с патологией печени, что в 100 раз превышает распространенность ВИЧ-инфекции. Ежегодно в странах СНГ регистрируется от 500 тысяч до 1 миллиона человек, страдающих заболеваниями печени [6,7]. На сегодняшний день существенно увеличился уровень заболеваемости вирусными гепатитами [9]. Наиболее часто встречаются заболевания печени у лиц с сопутствующей соматической, токсикологической и хирургической патологиями, требующими применения гепатопротекторных средств [6]. Многообразие нарушений функций печени существенно осложняет задачу медикаментозной коррекции патологических состояний органа и требует применения фармакологических средств широкого спектра действия. К тому же следует иметь в виду, что в патогенезе самых различных заболеваний печени важную роль играют иммунологические сдвиги, сопровождающие патологию этого органа, а также изменения состава крови [2,4,12].

Сложившаяся ситуация требует все более частого назначения гепатопротекторов, действие которых направлено на восстановление гомеостаза в печени, повышение устойчивости органа к действию патогенных факторов, нормализацию функциональной активности и стимуляцию репаративно-регенерационных процессов в печени [8,12,13,15].

В зависимости от химического состава и происхождения гепатопротекторы подразделяются на препараты растительного и животного происхождения, препараты, содержащие эссенциальные фосфолипиды, аминокислоты или их производные, а также витамины-антиоксиданты и витаминоподобные соединения [12,13]. Препараты растительного происхождения чаще всего содержат в своем составе экстракты алкалоидов, гликозидов, кумаринов, сапонинов, эфирных масел, витаминов и других биофлавоноидов [1,3]. В основе действия препаратов растительного происхождения на процессы регенерации печени лежит либо прямое активирующее влияние на синтез РНК и белка, либо вторичный опосредованный эффект, связанный с наличием у данных средств противомикробной, противовоспалительной, желчегонной и антиоксидантной активности. У многих препаратов первичное и вторичное действие могут сочетаться [12,13].

Препараты растительного происхождения нашли широкое применение в клинической гепатологии [1,3,4,10,11]. Наиболее часто в настоящее время используются лечебные сред- 65

ства в разных лекарственных формах, созданные на основе расторопши пятнистой, арники горной, арники облиственной, солянки холмовой, шлемника байкальского, родиолы розовой, горечавки желтой, астрагала шерстистоцветкового [1,3,8,10,11].

По мнению исследователей [12,13], при некоторых поражениях печени и дополнительных сопутствующих заболеваниях наиболее эффективно применять гепатопротекторы на основе растительного сырья в виде шротов, так как они, по сути, являются концентрированными экстрактами полифенольных соединений и практически не содержат масла, которое препятствует высвобождению водорастворимых биофлавоноидов в желудочно-кишечном тракте [1,11]. Из литературных данных известно, что шрот семян кунжута отличается повышенным содержанием белка, богатым минеральным составом, а также имеет ценный набор биологически активных соединений.

В связи с вышесказанным, цель нашего исследования состояла в изучении гистоморфо-логической структуры ткани печени и морфологического состава крови крыс на фоне влияния шрота семян кунжута, как потенциального гепатопротекторного средства.

Для реализации поставленной цели предстояло решить следующие задачи: провести гистологический анализ ткани печени в эмбриогенезе и онтогенезе, а также изменения морфологического состава крови здоровых половозрелых крыс на фоне дополнительной нагрузки внутрижелудочно шротом семян кунжута в виде суспензии.

Исследования проводили на 20 (14 – самок, 6 – самцов) белых беспородных крысах массой 190-210 г, которые были поделены на контрольную (интактную) и опытную группы.

Материалом для гистоструктурного анализа тканей печени послужили эмбрионы на 15 и 21 сутки развития, а также печень взрослых половозрелых крыс, которые в течение 30 дней, до наступления беременности и до родов, в качестве дополнительной нагрузки, внутрижелудочно получали шрот семян кунжута в виде суспензии в дозе 10 мг/100 г веса тела, объемом 1 мл. Суспензию шрота готовили на дистиллированной воде [5,14].

Контролем послужил материал от интактных крыс аналогичных сроков развития.

Для получения самок с датированным сроком беременности использовали 4-4,5 месячных крыс, которым вечером подсаживали самцов, а утром брали влагалищные мазки. Учитывая, что у крыс покрытие происходит в 1-2 часа ночи, считали день обнаружения спермы в мазке первым днем беременности. По окончанию эксперимента животных подвергали декапитации после ночного голодания, а затем извлекали печень. Фиксацию печени взрослых крыс и эмбрионов проводили в 10 %-ном нейтральном формалине, затем заливали в парафиновые блоки, из которых приготавливали срезы толщиной 6-7 мкм. Срезы ткани печени окрашивали гематоксилином – эозином.

Фотографическую съемку образцов ткани печени проводили с помощью светового микроскопа «Микромед» при увеличении 100х и 400х. Исследование морфологического состава крови крыс изучали, используя те же группы животных в течение 35 дней.

Взятие крови у крыс проводилось из хвостовых вен по общепринятой методике. Состав крови определяли до начала исследований, а также на 1, 4, 6, 8, 10, 12, 15, 18, 23, 28, 35 дни эксперимента. Оценивали следующие показатели: количество эритроцитов и лейкоцитов, лейкоформула, содержание гемоглобина и СОЭ [5,14].

Результаты исследований представлены в фотографиях (рис. 1-6), и в таблицах 1-3. Исследование реакции морфологических изменений ткани печени на введение суспензии шрота семян кунжута показало, что в целом развитие органа в эмбриогенезе и онтогенезе не нарушено. На 15 сутки эмбриогенеза балочное строение печени находится в стадии формирования (рис. 1).

Рис. 1. Печень на 15 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 100х

Гепатоциты хорошо выражены и крупнее ближе к капсуле, в глубь, к центру печеной бухты, печеночные балки разветвляются. Дольчатое строение печени не развито. Капилляры синусоидного типа ветвящиеся с выраженными расширениями, которые заполнены эритробластами и другими дифференцирующимися клетками эритроцитарного ряда. Наблюдаются участки эритропоэза и лимфопоэза (рис. 2).

В целом развитие печени в эмбриогенезе на 15 сутки у крыс опытной группы не отличалось от контроля.

К 21 суткам эмбриогенеза наблюдается сформированное балочное строение печени (рис.3)

Рис. 2. Печеночные балки с расширенными капиллярами, заполненными дифференцирующимися клетками эритроцитарного ряда. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 400х

Рис. 3. Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 100х

Наблюдается развитое радиальное строение печени. В целом в структуре органа опытных крыс нет отличий от печени крыс контрольной группы за исключением того, что желчные протоки несколько крупнее, а желчные капилляры расширены (рис.4).

Рис. 4. Расширенные желчные протоки на 21 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилин – эозин.

Увеличение 100х

В печени крыс опытной группы отмечается мелковакуольная и средняя мелкокапельная жировая дистрофия. Расширенные синусоидные капилляры содержат единичные эритробласты.

Структура печени взрослых 4-хмесячных крыс опытной группы также не имела выраженных нарушений. Отмечалось сформированное балочное строение печени, некоторые гепатоциты двуядерные, лишены гликогена (рис.5). Сохраняется мелкокапельная и среднекапельная жировая дистрофия (рис. 6).

Рис. 5. Ткань печени опытных крыс на 4 месяц онтогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 100х.

Рис. 6. Мелкокапельная и среднекапельная жировая дистрофия в ткани печени опытных крыс на 4 месяц онтогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 100х.

Результаты изучения морфологического состава крови крыс на фоне дополнительной нагрузки шротом семян кунжута внутрижелудочно представлены в таблицах 1-3.

Исследование реакции морфологического состава крови на суспензию шрота семян кунжута показало, что содержание эритроцитов у животных опытной группы достоверно увеличивается в зависимости от продолжительности поступления шрота в организм (табл. 1).

Таблица 1

Количества эритроцитов в крови крыс на фоне нагрузки внутрижелудочно суспензией шрота семян кунжута, (М4012/л)

дни	контроль	суспензия шрота семян кунжута
0	2,80±0,18	2,78±0,14
1	2,73±0,10	2,79±0,16
4	2,85±0,15	2,83±0,13
6	2,90±0,13	2,95±0,11
8	2,93±0,12	3,09±0,12
10	2,88±0,14	3,21±0,13
12	2,96±0,14	3,46±0,14
15	3,02±0,18	3,54±0,15

Продолжение табл.1

дни	контроль	суспензия шрота семян кунжута
18	2,98±0,15	3,74±0,13
23	3,15±0,22	3,96±0,18
28	3,28±0,18	4,11±0,22
35	3,45±0,19	4,40±0,181

Примечание . В этой таблице различия достоверны при P<0,05: ¹ – по сравнению с показателями животных контрольной групп

Увеличение количества эритроцитов в 1 л крови животных опытной группы на 35 день эксперимента, по сравнению с контрольной группой, составило 27,53 %. Концентрация гемоглобина в крови на момент окончания эксперимента по сравнению с контролем, в группе животных, получавших суспензию шрота семян кунжута, была выше 17,6 %.

В контрольной группе наблюдались незначительные колебания концентрации гемоглобина в крови на протяжении всего эксперимента (табл. 2).

Таблица 2

Концентрации гемоглобина в крови крыс на фоне нагрузки внутрижелудочно суспензией шрота семян кунжута, (г/л)

дни	контроль	суспензия шрота семян кунжута
0	74,5±3,5	77,1±2,3
1	72,1±4,3	72,6±1,8
4	74,0±5,5	76,7±2,4
6	75,9±4,8	76,7±2,2
8	78,7±3,4	81,2±2,9
10	80,7±2,8	84,6±2,3
12	81,1±2,7	87,3±3,6
15	84,9±3,6	89,3±3,7
18	84,9±2,1	90,6±3,2
23	84,7±2,8	93,0±2,6
28	85,8±2,6	99,3±3,1
35	87,0±4,0	102,3±3,61

Примечание. В этой таблице различия достоверны при P<0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы.

В группе животных, получавших шрот семян кунжута, количество лейкоцитов по сравнению с контрольной группой снизилось на 27,65 % (табл.3).

Таблица 3

Изменение содержания лейкоцитов в крови крыс на фоне нагрузки внутрижелудочно суспензией шрота семян кунжута, (М409/л)

дни	контроль	суспензия шрота семян кунжута
0	5,82±0,43	5,78±0,37
1	6,10±0,36	6,91±0,30
4	6,55±0,22	6,97±0,26

Продолжение табл.3

дни	контроль	суспензия шрота семян кунжута
6	8,45±0,27	7,38±0,34
8	10,45±0,37	7,85±0,36
10	11,37±0,51	8,13±0,46
12	11,82±0,66	8,39±0,57
15	12,75±0,69	8,65±0,49
18	12,67±0,71	8,99±0,42
23	12,91±0,72	9,11±0,40
28	13,03±0,66	9,42±0,32
35	13,63±0,64	9,86±0,351

Примечание. В этой таблице различия достоверны при P<0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы.

В контрольной группе в течение эксперимента также отмечается рост числа лейкоцитов, но в целом, все эти колебания также находились в пределах физиологической нормы. В лейкоцитарной формуле статистически значимых колебаний лейкоцитов не наблюдалось в течение всего эксперимента. Отклонения в содержании лимфоцитов и СОЭ у подопытных животных происходили в минимальных и статистически незначимых пределах.

Таким образом, по результатам исследования можно сделать следующие выводы:

• 1)    длительное введение шрота семян кунжута в виде суспензии в организм крыс не вызывает патологических изменений ткани печени взрослых особей и тканей печени их потомства;

• 2)    расширение желчных протоков в печени крыс на 21 сутки эмбриогенеза позволяет предположить, что шрот семян кунжута усиливает пролиферацию клеток желчевыводящих протоков;

• 3)    внутрижелудочное введение в организм здоровых животных в виде суспензии на дистиллированной воде шрота семян кунжута сопровождается увеличением количества эритроцитов в крови 27,53 %, а также увеличением концентрации гемоглобина на 17,6 %, что морфологически проявляется у эмбрионов наличием сохраненных красных островков кроветворения до момента рождения;

• 4)    установлено, что на фоне введения животным шрота семян кунжута, наблюдается снижение количества лейкоцитов по сравнению с животными контрольной группы на 27,65 %, что, на наш взгляд, объяснимо возникновением перераспределительной кратковременной лейкопении, которая обусловлена скоплением лейкоцитов в органах пищеварения крыс, вследствие введения суспензии шрота кунжута;

• 5)    в экспериментальной группе животных не наблюдалось статистически значимых изменений количества эозинофилов в крови, это свидетельствует о том, что шрот семян кунжута не вызывают аллергических реакций.