Гистоморфологические показатели брыжеечных лимфатических узлов байкальской нерпы (Pusa sibirica) при обнаружении и отсутствии в кишечнике микроорганизмов, патогенных для белых мышей

Байкальская нерпа - эндемик и единственное водное млекопитающее озера Байкал. Одним из первых барьеров на пути биологической и химической агрессии является иммунная система организма животного. Особое место во взаимоотношении организма с внешней средой занимает пищеварительная система. Стенка кишечника испытывает максимальную антигенную нагрузку. Поэтому изучение состояние лимфоидных органов, ассоциированных с кишечником, в частности, у морских млекопитающих, представляет особый интерес. Из анализа литературных источников следует, что большинство исследований лимфатических узлов проводилось на наземных млекопитающих.

По литературным данным, развитие патогенной микрофлоры в организме млекопитающих приводит к изменению иммунного статуса животных, а также структурной перестройке органов иммунной системы (Marino, Kirshner, 2004).

Целью настоящих исследований явилось изучение структурной организации и клеточного состава брыжеечных лимфатических узлов байкальской нерпы, а также изменений этих параметров в зависимости от присутствия в организме сапрофитной микрофлоры. В задачи исследований входило: 1) исследовать особенности структурной организации и клеточного состава брыжеечных лимфатических узлов байкальской нерпы; 2) определить изменения структурной организации и клеточного состава брыжеечных лимфатических узлов байкальской нерпы в присутствии в кишечнике микроорганизмов, патогенных для белых мышей.

Материал и методы

Материалом для гистологических исследований служили брыжеечные лимфатические узлы байкальской нерпы. Возраст животных - от 1 месяца до 1 года. Забор материала производился от особей байкальской нерпы в ходе комплексных научных экспедиций в течение 2001-2005 гг. Отлов животных производился в Чивыркуйском заливе и в районе с. Сухая Кабанского района Республики Бурятия. Всего был исследован материал от 17 животных.

Для гистологических исследований вырезали кусочки брыжеечных лимфатических узлов объемом 1-2 см3, которые затем фиксировали в 10%-ом растворе нейтрального формалина и заключали в парафин.

Структурную организацию и клеточный состав брыжеечных лимфатических узлов изучали на срезах 4-6 мкм, окрашенных гематоксилин-эозином, азур-2-эозином, метиловым зеленым -пиронином по Браше в модификации Курника (Волкова, Елецкий, 1982).

Для микробиологических исследований вырезали кусочки внутренних органов байкальской нерпы: сердца, легких, печени, почек, селезенки, матки и кишечника. Пробы из органов были консервированы в 30%-ом растворе глицерина. Для выделение чистой культуры производили посевы из исходного материала на питательные среды по методу Дригальского (Биргер, 1982).

Идентификацию бактерий осуществляли с использованием “Краткого определителя бактерий Берги” (1980).

Патогенные свойства изучали на белых мышах. Заражение проводили суточной взвесью чистой культуры, смытой с мясо-пептонного агара стерильным физиологическим раствором. Микробную взвесь животным вводили внутрибрюшинно в дозе 0,5 мл в концентр аци и 1 млрд, бак. кл./мл.

Результаты и обсуждение

У байкальской нерпы брыжеечные лимфатические узлы лежат в корне брыжейки. Капсула узлов широкая, местами плотная, местами разволокненная. Краевой синус выражен в основном только в области отхождения трабекул в виде узких щелей или широких лакун, в остальных местах капсула плотно прилегает к паренхиме узла. Краевой синус переходит в промежуточные синусы брыжеечного лимфатического узла. Соединительно-тканный компонент брыжеечных лимфатических узлов занимает относительную площадь 15.0±2.23%.

Корковое вещество представлено лимфоидными узелками и паракортикальной зоной. Пространство между узелками и под узелками занято паракортикальной зоной, обладающей густой сетью кровеносных сосудов. Корковое вещество занимает относительную площадь 42.1±2.12%, паракортикальная зона - 20.7±2.64%.

В корковом веществе брыжеечных лимфатических узлов байкальской нерпы различают первичные и вторичные лимфоидные узелки. Относительная площадь всех лимфоидных узелков составляет 21.4±1.88%. Из них на долю первичных лимфоидных узелков приходится 4.1 ±1.56%, на долю вторичных - 17.4±2.23%.

В мозговом веществе слабо дифференцируются мозговые тяжи и мозговые синусы. Для мозговых синусов характерно неравномерное распределение клеток. Относительная площадь мозгового вещества составляет 42.8±5.22%.

В центрах размножения лимфоидных узелков преобладают малые и средние лимфоциты (26.2±0.22% и 22.3±0.17% соответственно). Малодифференцированных форм клеток - больших лимфоцитов и бластов - в этой зоне содержится больше, чем в других структурных компонентах лимфатического узла (11.8±0.33% и 5.8±1.32%). В центрах размножения лимфоидных узелков также самый высокий уровень деструктивных процессов (14.8±3.51%), наряду с мозговыми синусами и мозговыми тяжами, в которых число деструктивно измененных клеток достигает 14.8±1.67% и 10.3±0.22% соответственно. В связи с этим в центрах размножения лимфоидных узелков отмечаются макрофаги (0.8±0.04%).

В короне лимфоидных узелков превалируют малые лимфоциты (56.3±3.22%). В короне и центрах размножения лимфоидных узелков самая большая доля средних лимфоцитов (23.5±2.12% и 22.3±О.17%). В короне, паракортикальной зоне и мозговых тяжах самая большая плотность клеток (47.2±0.10,46.0±0.92 и 43.3±0.02 клеток на условную единицу площади).

В паракортикальной зоне преобладают малые лимфоциты (67.9±0.64%). В этой морфофункциональной зоне их содержится больше, чем в остальных компонентах лимфатического узла. В паракортикальной зоне наблюдается самое низкое содержание ретикулярных клеток (3.2±0Л4%).

В мозговых тяжах преобладают малые лимфоциты (40.3±0.56%). Большую долю занимают плазматические клетки. Плазмобластов содержится 17.8±0.67%, плазмоцитов - 5.5±0.27%, В этой зоне содержится большое количество ретикулярных клеток (18.6±2.87%). На высоком уровне находятся процессы разрушения клеток: деструктивно измененных клеток содержится 10.3±0.22%. ■

В мозговых синусах преобладающими типами клеток являются малые лимфоциты, плазмоб-ласты и ретикулярные клетки (23.1±3.73%, 22.9±0.33% и 21.1±3.86% соответственно). В большом количестве здесь представлена и другая группа плазматических клеток - плазмоциты (10.5±1.91%).

Из 17 исследованных животных у 5 особей в кишечнике были обнаруженны микроорганизмы, патогенные для белых мышей. Исследованные микроорганизмы относятся к грамположи-тельным стафилококкам. В присутствии в кишечнике вышеупомянутых микроорганизмов в 1,2 раза увеличивается относительная площадь лимфоидных узелков, в частности, вторичных лимфоидных узелков (в 1,5 раза). А это свидетельствует о сильном антигенном воздействии на орган, при котором Стимулируется развитие В-зависимых зон (в данном случае - лимфоидных узелков), (Fontaine и соавт., 1994). Относительная площадь первичных лимфоидных узелков сокращается в 8,2 раза. Уменьшается также относительная площадь соединительнотканных элементов в 1,5 раза, вероятно, за счет увеличения площади лимфоидных узелков.

В присутствии в кишечнике микроорганизмов, патогенных для белых мышей, в корковом веществе брыжеечных лимфатических узлов байкальской нерпы происходит увеличение числа ретикулярных клеток в 1,8 раза и снижение количества больших лимфоцитов в 4 раза. Снижение числа лимфоцитов и увеличение числа ретикулярных клеток наблюдалось также при введении крысам в организм культуры Staphylococcus aureus (Шайхова и соавт., 1999). Вероятно, увеличение числа ретикулярных клеток связано с их способностью при антигенной стимуляции превращаться в свободные макрофаги (Сапин М.Р., Этинген Л.Е., 1996). Если в центрах размножения лимфоидных узелков особей, не содержащих указанные микроорганизмы, в небольшом количестве обнаруживаются плазмоциты и митотически делящиеся клетки, то у особей, содержащих в кишечнике микроорганизмы, патогенные для белых мышей, эти типы клеток отсутствуют. Однако в центрах размножения лимфоидных узелков увеличивается более чем в 2 раза число плазмобластов. Увеличение числа плазматических клеток в лимфатических узлах закономерно происходит при введении в организм патогенной микрофлоры (Ковалевский, 1976).

В мозговых тяжах под влиянием микроорганизмов, обладающих патогенностью, происходит снижение числа малых лимфоцитов в 1,7 раза, митотически делящихся (в 3,25 раза) и деструктивно измененных (в 1,8 раза) клеток. Так же под влиянием микроорганизмов, обладающих патогенностью, в мозговых синусах отмечается снижение плотности распределения клеток на условной единице площади в 1,2 раза. Снижение плотности клеток в мозговых синусах регионарных лимфатических узлов крыс наблюдалось при введении в организм крыс культуры Staphylococcus aureus (Шайхова и др., 1999). Автор объясняет такое явление межклеточным отеком.

Увеличение содержания плазмобластов наряду с увеличением площади, занимаемой вторичными лимфоидными узелками, указывает на усиление процессов иммунопоэза (Сапин и соавт., 1996; Григоренко, 2004). Увеличение содержания макрофагов наряду с увеличением содержания деструктивно измененных клеток отражает повышение макрофагальной активности в органе (Сапин и соавт., 1996) в ответ на антигенную стимуляцию. Снижение числа малых лимфоцитов в мозговых тяжах происходит, по-видимому, за счет^усиления макрофагальной активности и увеличения числа деструктивно измененных клеток.

Заключение

У особей байкальской нерпы, в кишечнике которых обнаружены микроорганизмы, патогенные для белых мышей, в брыжеечных лимфатических узлах происходит увеличение относительной площади лимфоидных узелков, в частности, вторичных лимфоидных узелков; увеличение числа ретикулярных клеток; увеличение числа плазмобластов в центрах размножения лимфоидных узелков; снижение числа малых лимфоцитов, повышение числа митотически делящихся и деструктивно измененных клеток в мозговых тяжах; снижение плотности распределения клеток на условной единице площади в мозговых синусах, что свидетельствует о напряженности иммунной системы особей.