Глюкокортикоид-зависимое изменение поведенческой активности и свободнорадикального окисления в головном мозге при введении экзогенного глюкокортикоида

Введение. В настоящее время в экспериментальных исследованиях экзогенные глюкокортикоиды вводят или с целью воспроизведения глюкокортикоид-зависимых эффектов стресса или для изучения регуляции по механизму обратной связи в пределах ГГАС [4]. В этом аспекте наибольшей популярностью в экспериментальных и клинических исследованиях пользуется дексаметазоновый тест [4]. По его показателям идентифицируется повышение или снижение порога чувствительности гипоталамических центров к ингибирующим сигналам циркулирующих глюкокортикоидов. В связи с тем, что дексаметазону не свойственна длительная активность, с его помощью трудно изучать регуляцию ГГАС со стороны гормон-чувствительных органов и тканей. Для этих целей более предпочтительно использовать пролонгированные глюкокортикоиды типа триамцинолона ацетонида (ТА), который вызывает гипоплазию лимфоидных органов через 96 ч после введения [5]. В высоких дозах, а также при синд- роме отмены, ТА способен вызывать надпочечниковую недостаточность [7]. Существуют данные о способности совместного введения ТА и ингибитора изоформ цитохрома Р450 CYP3A вызывать надпочечниковую недостаточность [6]. Поэтому считаем целесообразным рассматривать тест с триамцинолона ацетонидом как более информативный для изучения регуляции ГГАС со стороны гормон-чувствительных органов и тканей по сравнению с дексаметазоновым тестом.

Методика. Для оценки глюкокортикоид-зависимых изменений свободнорадикального окисления животным вводили глюкокортикостероидный препарат триамцинолона ацетонид (кеналог, Veb Berlin-Chemie, Германия, доза: 2 мг/кг, подкожно) [5]. Поведенческие реакции животных изучались с использованием актографа «открытое поле». Содержание продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали спектрофотометрически в липидном экстракте исследуемых тканей [5]. Уровень спонтанной и металл-катализируемой окислительной модификации белков (ОМБ) в исследуемых тканях оценивали по образованию динитрофенилгидразонов [3]. Активность моноаминоксидазы – Б определялась альдегидометрическим методом с использованием в качестве субстрата солянокислого бензиламина [5]. Содержание кортикостерона – флюорометрическим микрометодом Ю.Г. Балашова [1]. Активность 11β-гидроксистероидде-гидрогеназы определялась с использованием методического подхода, описанного О.П. Черкасовой [4]. Оценку эритромицин N-деметилазной активности (ЭРНД-активность, CYP3A-зависимое монооксигенирование) осуществляли по методу J. Werringloer [9].

Результаты обрабатывались общепринятыми методами дескриптивной статистики и выражались в виде среднеарифметической (М) и её стандартной ошибки (m). Статистически значимые различия определяли с использованием критериев непараметрической статистики: Манна–Уитни (U).

Результаты и обсуждение. Введение ТА сопровождалось снижением ориентировочной реакции (количество вертикальных стоек) и поведения самоочистки (груминга) при тестировании животных в актографе «открытое поле». При этом наблюдалось резкое снижение содержания кортикостерона. Экзогенный глюкокортикостероид значительно повышал активность ключевых ферментов биотрансформации ГКГ в печени активность изоформы цитохрома Р450 CYP3A увеличилась более чем в четыре раза, а 11β-ГСДГ – более чем в два.

Введение ТА интактным животным приводило к увеличению содержания гептан-растворимых продуктов ПОЛ в головном мозге при одновременном снижении активности каталазы, МАО-Б, а также уровня спонтанной и металл-катализируемой окислительной модификации белков. Введение триамцинолона ацетонида оказывало супрессивное действие на процессы свободнорадикального окисления в печени. Это проявлялось снижением содержания вторичных гептан- и изопропа-нол-растворимых продуктов перекисного окисления липидов, а также ограничением уровня спонтанной и металл-катализируемой окислительной модификации белков. При этом выявлено снижение активности моноаминок-сидазы – Б. Известно, что экзогенные глюкокортикостероиды способны оказывать инги- бирующее действие на МАО [8]. В наших условиях ингибирование активности МАО ассоциировано со снижением уровня карбонилирования белков. Возможно, что окислительная деструкция белков имеет МАО зависимый характер. Однако факт повышенного ПОЛ на фоне сниженной МАО активности говорит об отсутствии прямой зависимости между этими событиями. Тем не менее представляется возможной ситуация, когда сниженный уровень МАО косвенно способствует усилению ПОЛ. Одним из субстратов МАО-Б является дофамин. Помимо его самостоятельной роли в качестве нейромедиаторов он еще является непосредственным предшественником в биосинтезе норадреналина. Снижение скорости дезаминирования дофамина может привести к его накоплению с последующим аутоокислением, Аналогично аутоокислению может подвергнуться норадреналин. В свою очередь это может способствовать развитию окислительного стресса в виде усиления ПОЛ.

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о том, что экзогенный глюкокортикоид за счет индукции микросомальных ферментов тканевого метаболизма глюкокортикоидов приводит к снижению уровня кортикостерона. На этом фоне снижен уровень активности МАО-Б головного мозга и усиливается уровень ПОЛ. Наблюдаемые нейро-химические изменению являются фоном для развития сниженной поведенческой активности.