Характеристика фагоцитарной активности моноцитов периферической крови новорожденных крысят от матерей с экспериментальным поражением печени

Введение. Актуальность настоящего исследования определяется повсеместным ростом заболеваемости печени, в том числе у женщин фертильного возраста. Ранее нами [1, 2] было показано, что у самок крыс с экспериментальным хроническим поражением гепатобилиарной системы рождается потомство с нарушением морфофункционального становления систем жизнеобеспечения, в том числе репродуктивной, эндокринной, пищеварительной, кроветворной. Учитывая, что резистентность организма во мно- гом определяется функциональным состоянием лейкоцитарных и макрофагальных клеток, представляет особый интерес изучение особенностей фагоцитарной активности моноцитов периферической крови у потомства самок крыс с хроническим поражением печени различного генеза.

Цель исследования – анализ особенностей поглотительной и киллинговой активности моноцитов периферической крови у потомства самок крыс с экспериментальным хроническим поражением печени различного генеза в период новорожденности.

Материал и методы исследования. Исследование проведено на белых лабораторных крысах. Для достижения поставленной цели у половозрелых крыс (самок) моделировалось хроническое поражение печени различного генеза.

Для моделирования токсического алкогольного поражения печени осуществлялось поение животных 15% этиловым спиртом в условиях свободного доступа в течении 5 месяцев. При этом воду животные не получали [3].

Для воспроизведения хронического аутоиммунного гепатита животные (опытная группа 2) подвергались длительной сенсибилизации гомологичным антигеном печени, приготовленным по общепринятой методике с адъювантом Фрейнда [4] в нашей модификации [5]. Полный цикл иммунизации составил 4 месяца. За весь курс иммунизации животные получали около 400 мг печеночного антигена.

О развитии патологического процесса в печени экспериментальных животных судили на основании морфологических (очаговые бионе-кротические изменения гепатоцитов, периваскулярная лимфогистиоцитарная инфильтрация, гипертрофия и гиперплазия купферовских клеток, дискомплексация печеночных балок, расширение синусоидных капилляров), биохимических (повышение концентрации билирубина, аланин- и аспартатаминотрансфераз, лактатдегидрогеназы) и иммунологических (повышение титра печеночных аутоантител 1:320 и 1:640) изменений.

Таблица 1

Активность и индекс фагоцитоза частиц латекса моноцитов периферической крови

Группа экспериментальных животных	Фагоцитарный показатель	Фагоцитарный индекс
Контрольная (К)	82,1 + 1,2	10,16 + 0,3
Токсическая (Т)	70,8 + 2,5*	4,52 + 0,5*
Аутоиммунная (А)	72,5 + 1,3*	4,36 + 0,4*

Примечание: * - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05)

Для оценки поглотительной активности моноцитов периферической крови подопытных крысят использовали биологически инертные, стандартизированные по размеру частицы мо-нодисперсного латекса с диаметром 1,2-1,5 мкм, который в концентрации 10 частиц /1мл (0,02 мл взвеси) добавляли на предметные стекла к монослою клеток. Затем инкубировали в течение одного часа при 37 °С. После чего подсчитывали фагоцитарный показатель (процент фагоцитирующих клеток) и фагоцитарный индекс (число частиц латекса, поглощенных 100 клетками в перерасчете на 1 моноцит).

При определении фагоцитов и внутриклеточного киллинга микроорганизмов моноцитарными клетками периферической крови в качестве тестовой культуры использовали живую суточную культуру клинического бактериального штамма St.aureus (штамм АТСС 25923). В этом случае поглотительную и бактерицидную способность моноцитов изучали с помощью общепринятого метода с использованием акридинового оранжевого [6]. Для оценки фагоцитарной и микробицидной способности моноцитов подсчитывали фагоцитарный показатель (процент фагоцитирующих клеток), фагоцитарный индекс (количество клеток St.aureus, поглощенных 100 моноцитами в перерасчете на одну клетку) и киллинг (количество убитых микроорганизмов, поглощенных 100 клетками в перерасчете на один моноцит).

Полученные результаты обработаны на компьютере с использованием программы Statistica v.6.0 (Statsoft, Inc.). Учитывая небольшую выборку животных, достоверность полученных результатов определялась при помощи непараметрического метода – критерия Манна-Уитни.

При проведении экспериментальных исследований были соблюдены «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ МЗ СССР от 12.08.1977 № 755).

Результаты исследования и их обсуждение. Общепризнанно, что фагоцитарные свойства макрофагальных клеток определяются, прежде всего, поглотительной и киллинговой активностью [7, 8, 9]. Поглотительную способность моноцитов периферической крови мы оценивали в двух тестах с использованием микросфер латекса и золотистого стафилококка (St.aureus).

Прежде всего, нами установлено, что фагоцитарная активность (фагоцитарный показатель) моноцитов периферической крови у новорожденных крысят всех подопытных групп снижен по сравнению с группой сравнения. Кроме того, у подопытных животных имеет место достоверное снижение фагоцитарного индекса.

Наибольший интерес, на наш взгляд, представляют данные, полученные с использованием золотистого стафилококка (St.aureus), поскольку они отражают не только поглотительную, но и переваривающую способность моноцитов периферической крови экспериментальных животных. Полученные результаты отражены в таблице №2.

Как видно из таблицы №2, фагоцитарная активность (фагоцитарный показатель) моноцитов периферической крови подопытных животных по отношению к золотистому стафилококку (St.

Таблица 2

Бактериоцидная активность (внутриклеточный киллинг золотистого стафилококка) моноцитов периферической крови экспериментальных животных

Группа экспериментальных животных	Фагоцитарный показатель	Фагоцитарный индекс	Киллинг St.aureus
Контрольная (К)	81,5+0,9	3,17+0,2	39,08+1,23
Токсическая (Т)	43,8+0,9*	2,06+0,09*	21,35+1,1*
Аутоиммунная (А)	43,3+0,7*	2,0+0,37*	22,10+0,9*

Примечание: * - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05)

aureus) снижен по сравнению с группой контроля. Наряду со снижением поглотительной активности у моноцитов периферической крови подопытных крысят происходит достоверное уменьшение фагоцитарного индекса.

Результаты данной серии исследования находятся в полном соответствии с данными, полученными при использовании микросфер латекса. Как видно из таблицы 2, у подопытных животных нарушение поглотительной активности моноцитов периферической крови сочетается с выраженным угнетением их бактериоцидных свойств, о чем свидетельствует снижение киллинговой активности на 43%–45%.

Выводы. Полученные результаты позволяют констатировать, что хроническая экспериментальная патология печени самок крыс обусловливает угнетение фагоцитарных свойств моноцитов периферической крови, о чем свидетельствует снижение их поглотительной и киллинговой активности. Ранее нами [1, 2] было показано, что у самок крыс с экспериментальным хроническим поражением гепатобилиарной системы рождается потомство со сниженной жизнеспособностью, на что указывает высокий процент мертворождаемости и смертности в различные сроки постнатального онтогенеза. Логично предположить, что нарушение функционального состояния моноцитов периферической крови у потомства самок крыс с хроническим поражением печени обусловливает снижение уровня их неспецифической резистентности.

Таким образом, на основании полученных результатов можно сделать заключение, что одним из патогенетических звеньев развития физиологической незрелости потомство самок крыс с хронической патологией печени является депрессия функционального состояния моноцитов периферической крови.