Химико-токсикологический анализ рисперидона и галоперидола в слюне

Лазарян Джон Седракович, доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой токсикологической химии

Максименко Татьяна Ивановна, кандидат фармацевтических наук, старший преподаватель кафедры фармацевтической химии

В последнее время интенсивно развиваются методы терапевтического мониторинга, основанные не на анализе крови, а на определении концентрации ксенобиотика в слюне, являющейся почти безбелковым ультрафильтратом крови. Уровень его концентрации в слюне пропорционален плазматической концентрации токсического вещества, не связанного с белками плазмы [4]. Слюна – секрет слюнных желез – представляет собой слабощелочную жидкость, содержащую в своем составе ферменты, белок, а также муцин.

В работе использовалась слюна здоровых добровольцев, не принимавших лекарственные средства за 14 дней до взятия проб. Сбор слюны проводился с использованием соответствующего коллектора при первоначальной стимуляции слюноотделения жеванием его в течение 30-45 секунд. Проба слюны бралась в объёме 5 мл. Количество слюны, выделяемое человеком за сутки, зависит от характера и режима питания, в среднем оно составляет около 1000-1500 мл. Основной недостаток слюны в качестве объекта анализа заключается в трудности получения достаточного ее количества, поэтому оптимальным объемом пробы слюны, которую можно взять в течение 3 минут при стимуляции слюноотделения жеванием, является 5 мл.

Нами готовилась следующая модельная смесь: к 5 мл слюны добавляли спиртовый раствор, содержащий 2 мг рисперидона и 5 мг галоперидола (концентрации веществ соответствуют минимальной терапевтической дозе, исходя из среднесуточного объема слюны 1500 мл), и оставляли для связывания исследуемого вещества с компонентами биологической жидкости на сутки. При проведении исследования для изолирования рисперидона и галоперидола из слюны нами были проверены разработанные методики при проведении анализа на другие лекарственные средства. После доведения значения рН среды слюны до 10 к ней добавляли натрия сульфат безводный до образования кашицы. При трёхкратной экстракции хлороформом по 10 мл выход рисперидона составлял 24,0%, а галоперидола – 38%. Также использовали методику, по которой предварительно проводили извлечение галоперидола этанолом при значении рН среды 2 с последующей реэкстракцией исследуемого вещества этанолом при значении рН среды 9-10. Рисперидон экстрагировали этанолом при значении рН среды 10 с последующей реэкстракцией исследуемого вещества 0,05 М раствором кислоты серной. Далее водную фазу отделяли и доводили значение рН среды до 10 аммиаком водным, экстрагировали тремя порциями хлороформа по 10 мл с добавлением в качестве электролита аммония сульфата до насыщения и без него. Выход рисперидона при использовании этих условий не превышает 34%.

Слюна, как известно, содержит белки, ферменты и муцин, которые могут дать «фоновое» поглощение при анализе методом УФ-спектрофотометрии. В связи с этим необходимо предварительно удалить эндогенные соединения слюны, искажающие результаты на стадии изолирования. Осаждение эндогенных веществ, содержащихся в слюне, осуществляли ацетонитрилом в соотношении 1:3. Водную фазу сливали и выпаривали до сухого остатка. Сухой остаток растворяли в этаноле и исследовали.

Обнаружение рисперидона и галоперидола в извлечениях из слюны проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ). На стартовую линию пластины «Сорбфил» размером 10×10 см наносили по 0,01 мл из 3 серий испытуемых растворов. Рядом в качестве «свидетелей» наносили 0,01 мл 0,01% раствора рисперидона и галоперидола. Подготовленные пластины помещали в хроматографические камеры, заполненные разными системами растворителей. Хроматографировали восходящим способом. Детекцию пятен проводили путем просмотра пластин в УФ свете при длине волны 254 нм, парами йода и с помощью опрыскивания реактивом Драгендорфа с предварительной обработкой пластины 10% раствором серной кислоты и без неё. Полученные результаты при использовании общих и специальных хроматографических систем [5-7] представлены в таблицах 1 и 2. Полученные данные свидетельствуют о том, что максимальное разделение наблюдается в системе хлороформ – ацетон (100:10). Полученные данные свидетельствуют о том, что максимальное разделение наблюдается в системе хлороформ – ацетон (100:10).

Таблица 1. Значения R f исследуемых лекарственных веществ в общих хроматографических системах (n=6)

Таблица 2. Значения R f исследуемых лекарственных веществ в частных хроматографических системах (n=6)

Выбранные нами при проведении предварительного исследования системы растворителей позволяют хорошо отделить друг от друга рисперидон и галоперидол как в извлечениях из раствора с рН=2, так и в извлечении из раствора с рН=9-10. Зону адсорбции галоперидола на хроматографической пластине элюировали спиртом 96%. Измеряли спектр полученного раствора в области 200-300 нм с помощью спектрофотометра в кюветах с длиной рабочего слоя 10 мм относительно раствора сравнения

(извлечение из контрольного опыта без добавления рисперидона и галоперидола). Раствор извлечения характеризуется наличием максимума при длине волны 245±2 нм. В извлечениях из контрольной пробы слюны максимумов поглощения не наблюдали. Результаты обнаружения галоперидола в извлечении из слюны представлены в таблице 3. Представленные данные свидетельствуют о том, галоперидол изолируется из слюны на 65,75%.

Таблица 3. Результаты количественного определения галоперидола в извлечениях из слюны методом УФ спектрофотометрии

Таблица 4. Результаты количественного определения рисперидона в извлечениях из слюны методом УФ спектрофотометрии

Зону адсорбции рисперидона элюировали спиртом 96%. Оптическую плотность полученного раствора измеряли в области 200-300 нм с помощью спектрофотометра в кюветах с длиной рабочего слоя 10 мм относительно раствора сравнения (извлечение из контрольного опыта без добавления рисперидона). Извлечения из слюны характеризуется наличием одного максимума при 238±2 нм. В извлечениях из контрольной пробы слюны максимумов поглощения не наблюдали. Результаты определения рисперидона в извлечениях из слюны представлены в таблице 4. Представленные данные свидетельствуют о том, что рисперидон изолируется из слюны на 65,5%.

Выводы: предложена методика изолирования рисперидона и галоперидола из слюны. Обнаружение рисперидона и галоперидола в извлечениях из слюны предлагается проводить методом ТСХ. Разработана методика количественного определения рисперидона и галоперидола методом УФ спектрофотометрии после очистки с помощью метода ТСХ, которая может быть использована в схеме их химико-токсикологического анализа.