Идентификация и мониторинговые исследования мясных продуктов на содержание ГМО и соответствие требованиям нормативно-технической документации

модификация придает им устойчивость к пестицидам, вредителям, болезням, неблагоприятным климатическим воздействиям, обеспечивая снижение потерь урожая при выращивании и хранении. На стадии разработки и внедрения находятся продукты из ГМО с повышенной пищевой ценностью, обладающие длительным сроком хранения, улучшенной органолептикой, отсутствием аллергенов и другими свойствами. Совершенствование методом генно-инженерной модификации, а также углубление знаний о функциях такой продукции и ее влиянии на обмен веществ даст возможность производить продукты из ГМО, снижающие риск возникновения заболеваний.

Рассматривая использование генно - инженерных технологий в сфере производства мясных продуктов , как исключительно перспективное направление , следует учитывать потенциальную возможность непреднамеренного или преднамеренного создания продуктов из ГМО , способных оказать негативное влияние на организм человека в условиях неконтролируемой генно - инженерной деятельности . Это обуславливает необходимость обеспечения многоуровневого контроля за мясной продукцией , имеющей генно - инженерно - модифицированные аналоги , включая госсанэпиднадзор и производственный контроль с обязательным осуществлением лабораторных исследований .

Кроме того , исходя из мировой практики по контролю продукции за соблюдением научно обоснованных рецептур и определению сырьевого состава готовых мясных продуктов на соответствие требованиям НД , нередко отмечаются нарушения данных требований . Фальсификация качественного состава пищевой продукции – наиболее распространенный вид нарушений Закона РФ « О защите прав потребителей ». Качественная фальсификация – подделка товаров с помощью пищевых или непищевых добавок для улучшения органолептических свойств при сохранении или утрате других потребительских свойств либо замена товара высшей градацией качества низшей . Информационная фальсификация – обман потребителя с помощью неточной или искаженной информации о товаре . Этот вид фальсификации осуществляется путем искажения информации в товарно - сопроводительных документах , маркировке и рекламе . Одной из разновидностей информационной фальсификации товара является фальсификация с помощью упаковки , чаще всего производственной . Создание блока методических стандартов по идентификации сырьевых компонентов готовой продукции , с одной стороны , серьезно укрепит доказательную базу технических регламентов , с другой – будет способствовать выявлению фальсифицированной продукции , поступающей на российский рынок , что в конечном итоге окажет влияние на повышение уровня безопасности и качества пищевой продукции , обеспечение интересов потребителя .

Однако далеко не всегда и не в полном объеме возможно выявление в готовых мясных изделиях различных немясных компонентов, таких как соевые добавки, крахмал, каррагинаны, камеди. Химические методы не дают исчерпывающей информации, трудоемки и зачастую дорогостоящие. В то же время рыночные условия диктуют тенденцию к использованию экспресс-методов исследования, среди которых необходимо выделить ГОСТ Р 52723 – 2007 «Продукты пищевые и корма. Экспресс-метод определения сырьевого состава пищевой продукции методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) [1]. Метод ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени в настоящее время является признанным стандартом для проведения такого рода анализов. Особенностью этого метода является определение продуктов ПЦР непосредственно в ходе реакции. Для постановки ПЦР в режиме реального времени необходим специальный амплификатор, отличительной особенностью которого является возможность детектировать флуоресценцию. Для выявления продуктов амплификации в режиме реального времени используют ДНК-зонды, в состав которых входит флуоресцентная метка и гаситель флуоресценции. В ходе ПЦР происходит разъединение флуоресцентной метки и гасителя, что приводит к появлению свечения, интенсивность которого зависит от количества ампликонов. Интенсивность флуоресценции измеряется в виде графика зависимости флуоресценции от количества циклов, график выносится на монитор компьютера.

Метод отличается высокой чувствительностью и специфичностью , отсутствием контаминации продуктами ПЦР ( анализ идет в закрытой пробирке , отсутствует стадия электрофореза ), значительной экономией лабораторной площади и меньшей продолжительностью анализа . Специфичность задается нуклеотидной последовательностью праймеров , что исключает возможность получения ложных результатов .

В связи с этим , в аккредитованной научно исследовательской лаборатории Орел ГАУ ( аттестат аккредитации № РОСС .RU.0001.21 ПЦ 26 от 19 февраля 2003 г .) совместно с кафедрой технологии мяса и мясных продуктов были проведены мониторинговые исследования мясных продуктов на содержание ГМО и осуществлена идентификация сырьевого состава мясопродуктов .

Объектами исследования являлись более 50 образцов мясных изделий , изготовленных по ГОСТу и реализуемых на рынках Орловской области .

Полимеразную цепную реакцию ( ПЦР /PCR) в реальном времени (RT) проводили с использованием амплификатора с оптической частью IQ-5 (BIO-RAD) и электрофоретической детекцией в агарозном геле ( МУК 4.2.2305-07) [2].

Для выделения ДНК из клинического материала использовали набор « Проба ЦТАБ » ( ручной метод ) и InviMAG_Virus_KFml на автоматизированной станции King Fischer.

Для определения генно - инженерно - модифицированных организмов ( ГМО ) в исследуемых образцах использовали тест - систему « Квантум - П - соя » ( ДНК - технологии ) со специальными стандартами ДНК с известной концентрацией в формате ПЦР с флуоресцентной детекцией в режиме « реального времени » (RT).

Для определения видовой принадлежности тканей жвачных животных , кур и свиней методом ПЦР с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле использовали тест - системы « БИГ » и « ЧИС » ( ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора ).

Анализ с использованием тест-системы «Квантум-П-соя» заключался в определении наличия ДНК сои и рекомбинантной ДНК промотора 35 S в исследуемых образцах. Для флуоресцентной детекции продуктов ПЦР в реальном времени были использованы флуорофоры FAM (FAM - 490) – специфичный продукт (рекомбинантная ДНК промотора 35 S), HEX

Рис . 1. Флуоресцентная детекция при проведении

ПЦР в режиме реального времени (FAM- флуорофор )

Наличие четких линий отрицательного « К -» и положительных « К +» контрольных образцов подтверждают отсутствие контаминации и чистоту постановки эксперимента . Присутствие уровня пороговой флуоресценции (thresphold) или линии С T позволяет утверждать о начале детекции экспоненциальной фазы амплификации , о наличии которой наиболее точно отвечает репортерная флуоресценция . Обычно оптимальными являются пороговые уровни порядка 0,05-0,1 единиц флуоресценции , что и наблюдается в данном опыте ( С T =51,29 и 51,28).

Рис . 2. Флуоресцентная детекция при проведении ПЦР в режиме реального времени (HEX- флуорофор )

Кривые флуоресценции на рисунке 2 позволяют утверждать , что все экспериментальные образцы содержат ДНК сои , что не отражено на упаковке продукта .

Метод флуоресцентной детекции представляет собой регистрацию флуоресцентного сигнала, уровень которого пропорционален содержанию ДНК в реакционной смеси, при этом детекцию осуществляют непосредственно во время амплификации – в режиме реального времени (RT).

Количественный анализ наличия / отсутствия рекомбинантной ДНК промотора 35 S в исследуемых образцах ( рис . 1) показал , что найденный видоспецифичный ген содержится в количествах , не превышающих установленное Постановлением Главного Государственного врача РФ № 42 от 25.06.2007 г .

Анализ с использованием тест - систем « БИГ » и « ЧИС » ( ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора ) показал фальсификацию качественного состава мясных продуктов ( рис . 3).

1 2 3 4             1 2   5 6

Рис . 3. Электрофореграмма фрагментов видоспецифичной ДНК : 1 - исследуемая вареная колбаса высшего сорта № 1; 2 - исследуемая вареная колбаса высшего сорта № 2; 3 - ДНК свиньи (398 н . п .);

4 - ДНК кур (431 н . п .); 5 - ДНК крупного рогатого скота (274 н . п .); 6 - ДНК мелкого рогатого скота

На рисунке 3 видно , что в первом исследуемом образце содержатся ткани кур и свиней , тогда как на упаковке в качестве рецептурных ингредиентов заявлены свинина и говядина , во втором образце тканей жвачных животных , кур и свиней не обнаружено .

Таким образом , исследованиями установлены факты фальсификации , когда на мясные продукты , содержащие растительные ингредиенты , представляются документы , в которых декларируется их отсутствие . Это в равной мере касается как отечественной , так и импортной продукции и требует усиления госсанэпиднадзора за продукцией , в том числе , содержащей ГМО , и ее этикетированием .