Иммуногистохимическая оценка экспрессии GATA3, FOXA1, ELF5 в опухоли - дополнительный фактор прогноза при люминальном раке молочной железы

Цель: Изучить клинико-морфологические параметры первичной опухоли и экспрессионные характеристики факторов транскрипции GATA3, FOXA1 и ELF5 при люминаль- ном субтипе рака молочной железы (РМЖ), сопоставить полученные данные с показателями различных вариантов опухолевой прогрессии.

Материалы и методы: Группу исследования составили 101 пациентка с подтвержденным диагнозом РМЖ стадии заболевания T1–4N1–3M0. Пациентки проходили лечение в НИИ онкологии Томского НИМЦ в период с 2015–2019 гг. Неоадъювантную терапию пациентки не получали, объём оперативного этапа во всех случаях соответствовал радикальной мастэктомии либо секторальной резекции молочной железы. В адъювантном режиме во всех случаях применялись тамоксифен и ингибиторы ароматазы, динамическое наблюдение осуществлялось в течение 5 лет. Средний возраст пациенток составил 54,9 ± 10,4 лет. В 68% случаев было отмечено состояние менопаузы. Определение молекулярно-биологического субтипа опухоли проводилось на основании иммуногистохимической оценки cor-биопсии ткани молочной железы (ER, PR, Ki-67, Her2/neu статус). Среди критериев включения в группу исследования были выделены люминальный РМЖ (люминальный А, B1, B2 субтипы) и отсутствие неоадъювантного лечения, критерием исключения явилась IV стадия заболевания. Морфологический этап осуществлялся по стандартной методике с оценкой первичной опухоли и удаленных аксиллярных лимфоузлов. Гистологический тип РМЖ диагностировали в соответствии с классификацией ВОЗ (2012), степень злокачественности карциномы определяли по Ноттингемской шкале (Bloom–Richardson – Elston grading). Иммуногистохимический этап исследования проводился по стандартным протоколам с применением антител к GATA3 (polyclonal rabbit antibody «Flarebio»; 1:200), FOXA1 (polyclonal rabbit antibody «Flarebio»; 1:100), ELF5 (polyclonal rabbit antibody «Flarebio»; 1:150). Положительный контроль — ткань молочной железы без патологии. Оценка препаратов включала следующие параметры: наличие экспрессии маркера (позитивная либо негативная), процент позитивно окрашенных опухолевых клеток (на 1000 клеток в 10 полях зрения при увеличении × 400), характер распределения экспрессии анализируемых маркеров в опухоли (гомогенный или гетерогенный). В лимфатических узлах оценивали наличие фокусов метастатического поражения. На этапах динамического наблюдения проводилась оценка наличия местного рецидива, наличие и локализация отдаленных метастазов. Статистический анализ данных производился программой Statisticа 10 с применением дисперсионного анализа и критерия χ², непараметрического критерия U-критерий Манна–Уитни. Обсуждались результаты с достоверностью различий при p < 0,05.

Результаты: Проведенный на первом этапе анализ экспрессии изучаемых маркеров в зависимости от клинико-морфологических параметров (возраст пациенток, состояние менструальной функции, вариант люминального подтипа, стадия заболевания) показал, что частота позитивной экспрессии и процент экспрессии GATA3, FOXA1, ELF5 не имеют статически значимых различий в зависимости от представленных выше характеристик. Частота позитивной экспрес-

Рак молочной железы сии маркера ELF5 в опухоли достоверно отличалась в зависимости от размера первичной опухоли. При негативной экспрессии данного маркера размер новообразования был значимо больше по сравнению со случаями, в которых отмечалась позитивная экспрессия (2,45 ± 0,9 см и 1,8 ± 0,8 см, F = 5,2 p = 0,02 соответственно). Подобная закономерность была выявлена при оценке фактора FOXA1 (2,43 ± 1,08 см и 1,9 ± 0,8 см, F = 3,7; p = 0,05 соответственно). В отношении маркера GATA3 описанной зависимости обнаружено не было (1,8 ± 08 см и 1,9 ± 0,8, F = 0,08; p = 0,76 соответственно). При исследовании наличия взаимосвязи между процентом экспрессии маркеров GATA3, FOXA1, ELF5 и размером карциномы, статистически значимых данных получено не было. К наиболее значимым прогностическим критериям при РМЖ относится степень злокачественности карцином. Согласно полученным результатам экспрессия исследуемых транскрипционных факторов не имела статистически значимой связи с данным гистологическим параметром. Вторым этапом проводился анализ взаимосвязей между экспрессионными характеристиками изучаемых маркеров и частотой различных вариантов опухолевой прогрессии. Исследование частоты лимфогенного метастазирования у пациенток с люминальным РМЖ в исследуемой группе от особенностей экспрессии маркеров позволило определить наличие взаимосвязи с характером их экспрессии в опухоли. Было установлено, что гомогенный характер экспрессии факторов GATA3 и ELF5 в клетках карциномы отмечался чаще в группе пациенток с наличием метастазов в лимфатических узлах. Процент случаев с гетерогенным характером экспрессии маркера GATA3 при наличии метастазов в лимфоузлах был статистически значимо меньше в сравнении с аналогичным показателем гомогенного окрашивания клеток (17% и 42% соответственно; χ2=5,8; p = 0,01). В отношении маркера ELF5 была обнаружена идентичная закономерность (18% и 42% соответственно; χ2=4,0; p = 0,04). Анализ характера экспрессии фактора транскрипции FOXA1 с частотой лимфогенного метастазирования выявил тенденцию аналогичной направленности (χ2=3,6; p = 0,05). Анализ первичной медицинской документации показал, что при динамическом наблюдении локальные рецидивы опухоли были зарегистрированы у 9 пациенток (8,9%), в 8 (88,9%) случаях — в области послеоперационного рубца, в 1 (11,9%) случае — в оставшейся ткани молочной железы после органосохраняющей операции. Оценка зависимости экспрессии маркеров GATA3, FOXA1, ELF5 в опухоли не выявила существенно значимых закономерностей с частотой развития локальных рецидивов в данной группе. Возникновение отдаленных метастазов было подтверждено в 15 случаях (n = 101), что составило 14,8%. Пациентки были разделены на группы в зависимости от локализации метастатических очагов с определением срока их возникновения. Изолированные метастазы в кости были обнаружены в 9 (60 %; n = 15) случаях, в 6 (40%) случаях отмечено множественное опухолевое поражение костей и висцеральных органов. Исследование экспрессии FOXA1 и ELF5 в клетках опухоли показало, что при разви- тии отдалённых метастазов процент экспрессии указанных факторов был достоверно ниже в сравнении с теми случаями, в которых признаки прогрессии болезни отсутствовали (Me Q1÷Q3. 70 (42÷76) p = 0,000015 и 76 (65÷100), p = 0,000002 соответственно). Гетерогенный характер экспрессии маркеров FOXA1 и ELF5 в опухоли обнаруживался значимо чаще у пациенток с гематогенными метастазами в кости и висцеральные органы (χ 2 = 6,42, p = 0,01 и χ 2 = 14,46, p = 0,0001 соответственно). Экспрессия маркера GATA3 не была ассоциирована с особенностями гематогенной дис-семинации.

Заключение: Результаты исследования отчетливо показывают значимость факторов транскрипции GATA3, FOXA1, ELF5 в отношении оценки риска развития разных вариантов опухолевой прогрессии у пациенток с люминальным субтипом РМЖ и, соответственно, могут быть представлены в качестве прогностических маркеров. Анализ экспрессионных характеристик изучаемых транскрипционных факторов может выполняться на дооперационном этапе при проведении стандартного иммуноморфологического исследования, что позволит учитывать их значение при планировании тактики ведения и прогнозировании течения заболевания.