Иммунохимический способ диагностики деструктивных форм острого холецистита

В настоящее время острый холецистит является одним из наиболее распространенных острых хирургических заболеваний органов брюшной полости [1, 2, 7, 15]. Значительный рост количества больных острым холециститом, отмечаемый в последние десятилетия, сопровождается увеличением доли пациентов пожилого и старческого возраста. Распространенность этой патологии сохраняющиеся, несмотря на совершенствование хирургической тактики. Уровень летальности и послеоперационных осложнений [3, 4, 12], обусловливают не только медицинскую, но и социальную значимость этой проблемы.

Разработка надежных методов своевременной диагностики острого холецистита является актуальной проблемой современной медицины. [5, 6, 7]. Важное значение имеет создание лабораторных панелей оценки степени тяжести и остроты патологического процесса при обострении хронических или скрыто протекающих форм этого заболевания. Она основывается на тщательном сборе анамнеза, объективных физикальных данных, лабораторных тестах, рентгенологического и компьютерного томографического исследования. Однако ни одна из этих позиций не дает надежного диагностического результата. Так точность только анамнестических и объективных данных при диагностике деструктивных состояний не превышает 57,19% .

Для оценки функционального состояния печени, желчных путей в клинической лабораторной диагностике применяется достаточно много биохимических тестов и маркеров [8, 9, 11].

В то же время, при диагностике многих деструктивных состояний хорошо зарекомендовал себя ферритин, который, по мнению многих исследователей, считается показателем деструкции тканей. [12, 13, 14].

Материалы и методы исследования

На первом этапе проведено исследование уровня ферритина в сыворотке больных острым холеци- ститом (80 пациентов), хроническим холециститом (56 пациентов). На втором этапе исследования проводилось определение титров ферритина в ткани желчного пузыря и сыворотке крови у 56 больных хроническим холециститом. При определении ферритина в сыворотке пациенты не воздерживались от приема пищи, никаких специальных приготовлений не требовалось. Собирали кровь обычной венепункцией в вакутейнеры и отделяли сыворотку от клеток центрифугированием после образования сгустка.

Концентрацию ферритина в сыворотке крови определяли методом непрямого иммуноферментного анализа в нг/мл коммерческими тест-системами ЗАО «БиоХим-Мак» (Москва), в ткани желчного пузыря определяли методом радиальной иммунодиффузии. Определение тканевого ферритина проводили после гомогенизации исследуемых тканей. Гомогенизация проводилась следующим образом. Патологически измененную ткань желчного пузыря, удаленного во время холецистэктомии, измельчали и растирали со стеклянным порошком до сметанообразной консистенции. Для разрушения клеточных мембран и структур проводили трехкратное размораживание и замораживание гомогената. Затем проводили экстракцию растворенных белков физиологическим раствором из расчета 3 объема на 1 г ткани.

Для идентификации ферритина в тканевых био-птатах использована та же стандартная тест-система, определяющая эквивалентное соотношение известного антигена и соответствующих ему антител. Изменения концентрации ферритина в сыворотке крови у большинства обследованных больных коррелировали с уровнями медиатора в тканях.

Полученные результаты исследований обработаны с помощью пакета статистического анализа Statistica 6, SPSS V 10.0.5, программ «STATLAND», «EXСEL-97», «Basic Statistic» c учетом стандартных методик вариационной статистики, включая вычисление критерия t Стьюдента для оценки достоверности различий. Данные представ- лены в виде М±m, достоверные различия обсуждались при t=<0,001.

Результаты и обсуждение

Аргументацией возможности использования ферритина для диагностики деструктивного состояния послужила высокая его надежность в диагностике деструктивных состояний при других нозологических формах. Установлена четкая зависимость концентрации тканевого ферритина от степени деструктивного процесса. Колебания ферритина в сыворотке крови варьировали при катаральном холецистите от 50 до 60 нг/мл а, при флегмонозном – до 306 нг/л. Значения ферритина в сыворотке от 0 до 10 нг/мл, в ткани желчного пузыря от 0 до 0,25 мг/л – приняты за 1 балл.

Уровень сывороточного ферритина был более высок при деструктивных формах острого холецистита, и составил (306,0±62,3 нг/мл р<0,01), что соответствует 30 баллам, по сравнению с уровнем при недеструктивных формах хронического холецистита 6 баллов (59,3±15,23 нг/мл, р<0,05) и контрольным уровнем 2 балла (21,9±1,35 нг/мл, р<0,01) (таблицы 1,2).

Уровень ферритина в сыворотке 70 нг/мл принят за 7 баллов, в ткани желчного пузыря 0,75 мг/л принят за 3 балла; в сумме 10 баллов – предполагается недеструктивный холецистит. При сумме от 10 баллов – вероятен деструктивный холецитит. Получены высокие цифры ферритина у больных осложненным деструктивным процессом.

Возможно, снижение содержания ферритина при гангренозном холецистите связано с тем, что на фоне некроза тканей увеличивается активность протеолитических ферментов (катепсины), которые разрушают

Табл. 1. Содержание ферритина (M±m) в сыворотке крови больных в зависимости от формы холецистита

Форма холецистита n Содержание ферритина (M±m), нг/мл р Катаральный 7 55,1±13,74 р<0,05 Флегмонозный 12 306,0±62,3 р<0,01 Гангренозный 5 78,3±21,73 р<0,05 Хронический 7 59,3±15,23 р<0,05 Контрольная группа 6 21,9±1,35 не только структурные элементы клеток, но и белки, в том числе и ферритин, фрагменты деградации которого иммунохимически не определяются.

Всем пациентам с такой суммой баллов выполнены санирующие операции холецистэктомии. Воспалительная деструкция подтверждена у всех больных при визуальной характеристике операционных находок и последующем гистологическом исследовании. Среди оперированных были, в том числе, и те больные, диагностика деструктивного состояния у которых традиционными методами была затруднительна, а операционные находки подтвердили необходимость и своевременность хирургического лечения.

Табл. 2. Содержание ферритина (M±m) в экстрактах желчного пузыря в зависимости от формы холецистита и зоны поражения

Форма холецистита	n	Содержание ферритина в морфологически измененных зонах желчного пузыря мг/л на 1 у.е. общего белка, M±m			Среднее содержание ферритина по всем зонам, M± m
		Наибольшая	Промежуточная	Наименьшая
Хронический	10	0,94±0,76	0,28±0,23	1,2±1,11	0,81±0,7
Катаральный	7	3,9±1,24	2,2±1,2	2,45±0,42	2,85±1,68
Флегмонозный	15	3,08±0,3	10,8±1,88	7,2±1,72	7,03±2,42
Гангренозный	7	1,0±0,73	0,64±0,56	0,94±0,54	0,86±0,61
Дефинитивный материал	10	–			–