Иммунологический статус хронического вирусного гепатита В в репликативную фазу у детей, ответивших и не ответивших на противовирусную терапию

Эпидемиологическая ситуация заболеваемости хроническими вирусными гепатитами у детей остается важной и пока нерешенной проблемой общества. Инфекция, вызываемая вирусом гепатита В (HBV) – одно из наиболее часто встречаемых инфекционных заболеваний [1]. На сегодняшний день для назначения терапии большое значение имеет изучение патологии хронических вирусных гепатитов (ХВГ) с клинико-иммунологических позиций. По литературным данным в реализации инфекционного процесса при вирусных гепатитах одним из важных факторов является состояние иммунной системы. Нарушения иммунного статуса сопровождают фактически все патологические процессы и нередко приобретают важную, или даже ведущую роль в патогенезе заболеваний, в том числе и при ХГ [2]. Если рассматривать иммунологические аспекты в патогенезе в развитии и исходах ХВГ, решающее значение имеет состояние организма ребенка, в частности, его иммунной системы. В патогенезе, течении и исходах парентеральных гепатитов ведущая роль отводится иммунным механизмам [3, 4].

В соответствии с поставленными задачами и учитывая данные, полученные при клиникобиохимическом обследовании, нами проведено исследование состояния иммунной системы

хронического вирусного гепатита В (ХВГВ) в репликативную фазу детей, ответивших и не ответивших на противовирусную терапию.

Цель работы: изучить иммунологические особенности ХВГВ в репликативную фазу у детей, ответивших и не ответивших на противовирусную терапию.

Материалы и методы исследования. Под нашим наблюдением находилось 100 детей с ХВГВ в репликативную фазу в возрасте от 7 месяцев до 18 лет. Давность заболевания составила от 6 месяцев до 14 лет. Диагноз ставился в соответствии с современными требованиями, с учетом классификации хронических гепатитов (Лос-Анжелес, 1994.) и МКБ 10 пересмотр (1995.) (Международная статистическая классификация, 1995). В соответствии с поставленными задачами были проведены клинические наблюдения и исследования с применением общеклинических, биохимических, инструментальных, иммунологических методов, позволяющих получить наиболее полную и объективную информацию о наблюдаемых детях, больных ХВГВ. Верификация диагноза проводилась методом ПЦР и ИФА.

Иммунологические исследования проводились на базе Института экспериментальной медицины и биотехнологий Самарского государственного медицинского университета. Идентификацию лимфоцитов и их субпопуляций осуществляли стандартным методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител (ИКО-86 и ИКО-31), выпускаемых Нижегородским НПК «Препарат», к их поверхностным антигенам (СD). Полученные в ходе работы данные, регистрировались в индивидуальных картах с одновременным кодированием для последующей компьютерной обработки. Анализ проводился при помощи современных пакетов статистического анализа: STATGRAPHICS Plus for Windows версии 4.0, STA-TISTICA for Windows версии 8.0. Для работы применялись статистические методы описательной статистики, определения достоверности разницы между данными в основной и контрольной группах на основе расчета критерия Стьюдента. Для оформления результатов исследований применялись пакеты из системы Microsoft Office-2010 и CorelDraw-13.

Результаты исследования и их обсуждение. В своей работе мы обследовали 100 пациентов с ХВГ с определением показателей клеточного иммунитета (содержания основных популяций лимфоцитов), гуморального иммунитета (определение уровня основных иммуноглобулинов и содержание ЦИК в сыворотке крови): с устойчивым вирусологическим ответом на проведенную терапию – 58 пациентов, не ответившие на противовирусную терапию – 42. Мы оценили характер изменений отдельных популяций и субпопуляций лимфоцитов с оценкой их возможной роли в патогенезе ХВГВ в репликативную фазу. При анализе иммунограммы определили дисбаланс хелперного и супрессорного звеньев иммунитета (табл. 1). Недостаток супрессоров усиливает выработку антител и образование иммунных комплексов, что вызывает аутоиммунные поражения. Показатели Т-клеточного звена включали общее количество Т-лимфоцитов (клеток, имеющих поверхностный СD3+ рецептор).

Таблица 1. Иммунологические показатели крови у детей и подростков, больных ХВГВ в репликативную фазу

Примечание: уровни достоверности различия с контролем: *- р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001

В исследованиях выявлено снижение показателя CD3+ маркера Т-лимфоцитов в исследуемых группах: у больных не ответивших на противовирусное лечение – 46,1±2,96% и с устойчивым вирусологическим ответом – 53,4±1,41%.

Субпопуляционный состав Т-лимфоцитов: Т-хелперы/индукторы (СD4+). Отмечалось снижение показателя CD4+ у пациентов, не ответивших на противовирусное лечение – 26,2±1,83% и с устойчивым вирусологическим ответом – 30,9±0,8%. В иммунологических показателях у детей, не ответивших на противовирусное лечение, наблюдалось выраженное снижение относительного и абсолютного содержания CD3+ и CD4+ лимфоцитов [5], что подтверждается нашими результатами исследования. СD8+ – Т-лимфоциты представлены субпопуляцией цитотоксических лимфоцитов. Стойкое угнетение Т-клеточного звена, резкий дисбаланс иммунорегуляторных клеток в сочетании с толерантностью к вирусу гепатита В определяют прогрессирование патологических процессов в печени, высокую репликативную активность [6]. Из табл. 1 видно, что концентрация CD8+-лимфоцитов имела тенденцию к снижению по сравнению с контрольной группой: у пациентов, не ответивших на противовирусное лечение – 19,91±1,15% и с устойчивым вирусологическим ответом – 22,3±0,27%. Выявлены низкие показатели иммунорегуляторного индекса CD4+/CD8+: у больных, не ответивших на противовирусное лечение – 1,31±0,07, с устойчивым вирусологическим ответом – 1,38±0,05. Более низкий показатель иммунорегуляторного индекса у детей, не ответивших на противовирусное лечение, указывает на угнетение Т-хелперной составляющей с большим нарастанием активности хронического гепатита.

Проведенные исследования показали, что в фазу репликации у пациентов, не ответивших на противовирусное лечение, достоверно снижено количество CD3+, CD4+, соотношение CD4+/CD8+, отмечается снижение CD8+. Это указывает на выраженный иммунодефицит Т-клеточного звена.

СD16+ является важным эффекторным механизмом противовирусной резистентности. NК-клетки также как и Т-лимфоциты служат источником образования ИФН-γ. При ХГВ отмечается снижение количества цитотоксических Т-лимфоцитов [7] и повышение титра CD16+ [8, 9]. Значение показателей CD 16+ ХВГВ был снижен по сравнению с контрольной группой: у не ответивших на противовирусное лечение – 6,8±1,13% и с устойчивым вирусологическим ответом – 7,53±1,12%. CD95+ - рецептор, индуцирующий Fas-зависимый апоптоз клетки. Содержание CD95+ - лимфоцитов было увеличено во всех группах детей по сравнению с контрольной группой, особенно у не ответивших на противовирусное лечение – 46,18±0,94%. Наибольшая выраженность апоптоза молекулы CD95+ у не ответивших на противовирусное лечение говорит об ослаблении иммунной системы у этой группы больных. Значения показателя HLA-DR были ниже, чем в контрольной группе и составили у больных, не ответивших на противовирусное лечение, – 17,72±1,19% и с устойчивым вирусологическим ответом – 19,56±0,73%. Снижение HLADR+ лимфоцитов может приводить к нарушению представления антигена, что в конечном итоге препятствует развитию приобретенных иммунных реакций [10-13].

Нами выявлен дисбаланс гуморального звена иммунитета в репликативную фазу заболевания при хроническом вирусном гепатите В у детей. Показатели гуморального звена включали содержание ЦИК и количество иммуноглобулинов основных классов A, M, G. В таблице 1 представлены данные о состоянии гуморальных факторов иммунитета у больных с ХВГВ. Содержание Ig A в репликативную фазу было более повышено у пациентов, не ответивших на противовирусное лечение – 1,55±0,07г/л.

Хронические вирусные болезни печени протекают преимущественно с увеличением концентрации Ig G и Ig M [14], что подтверждается нашими результатами. Отмечалась тенденция к повышению содержания Ig G: у больных, не ответивших на противовирусное лечение – 13,3±0,38г/л, с устойчивым вирусологическим ответом – 11,9±0,21г/л. Увеличенное содержание Ig G обусловлено длительным персистированием вируса в организме человека. Содержание Ig M при ХВГВ в репликативную фазу у детей колебалась от 1,18±0,05г/л у детей с устойчивым вирусологическим ответом до 1,25±0,06 г/л у пациентов, не ответивших на противовирусное лечение.

Одним из способов элиминации антигенов при хронических вирусных гепатитах является формирование циркулирующих иммунных комплексов. В то же время их значительное и стойкое повышение может быть показателем предрасположенности к развитию иммунопатологических реакций [15]. По сравнению со здоровыми донорами отмечалось повышение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК): у не ответивших на противовирусное лечение – 53,29±5,07и с устойчивым вирусологическим ответом – 144,2±7,7. Выявленное повышение иммунных комплексов может определять прогрессирующее течение хронического вирусного гепатита В.

Выводы:

• 1.    Снижение CD4+, CD8+ у детей с ХВГВ в репликативную фазу свидетельствует о том, что Т-клеточный пролиферативный ответ на антигены вирусов гепатита В является достаточно слабым у не ответивших на противовирусное лечение и усиливается после проведения терапии.

• 2.    Низкие значения содержания CD4+, CD8+ и их соотношения - CD4+/CD8+ говорят о хелперно-супрессорном иммунодефиците.

• 3.    Увеличение сывороточных иммуноглобулинов классов А, M, G и ЦИК свидетельствует о выраженной активации гуморального звена иммунитета в репликативную фазу при ХВГВ у детей.

• 4.    В иммунном статусе больных регистрировались признаки комбинированной иммунной недостаточности, которая проявлялась дисбалансом хелперного и супрессорного звеньев иммунитета и увеличении сывороточных иммуноглобулинов классов А, M, G и ЦИК.