Использование целлюлозных диагностикумов для экспресс-диагностики респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота

Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота наносят огромный экономический ущерб животноводству, особенно при условии его интенсивного ведения. В хозяйствах мясо-молочного направления они чаще протекают по типу энзоотической бронхопневмонии [1].

Одним из многих возбудителей, вызывающих болезни органов дыхания у крупного рогатого скота, является вирус респираторно-синцитиальной инфекции (РСИ), относящийся к семейству парамиксовирусов, роду пневмовирусов. Клинически болезнь проявляется в основном поражением нижних отделов респираторного тракта, повышением температуры, затрудненным дыханием, одышкой, выделениями из носа, сильным кашлем с последующим развитием интерстициальных бронхопневмоний и эмфизем [2].

Вирус впервые выделен от крупного рогатого скота с симптомами острого респираторного заболевания М.F. Paccaud с соавт. в 1970 году. В настоящее время РС-инфекцию крупного рогатого скота регистрируют во всех странах мира с развитым животноводством, а в нашей стране – с 1975 года [2–5].

В отличие от других вирусных респираторных инфекций, эта болезнь остается недостаточно изученной в связи со сложностью выделения и культивирования возбудителя. Трудности культивирования, в свою очередь, затрудняют получение вирусного сырья в достаточном количестве и с высокой инфекционной активностью для изготовления диагностических препаратов и средств специфической профилактики [2–7].

В литературе имеются сообщения о создании диагностических тест-систем на основе полимерных суспензий для диагностики респираторно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота вирусной этиологии [8,9].

В свое время в Институте иммунологии МЗ СССР были разработаны антительный и антигенный диа-гностикумы на основе порошковой целлюлозы для экспресс-диагностики респираторно-синцитиальной инфекции человека.

Цель исследований . Изучение возможности использования целлюлозных диагностикумов для экс-пресс-диагностики РС-инфекции крупного рогатого скота.

Материалы и методы исследований . Использовали РС-вирус крупного рогатого скота штамма «РС-Б» с титром 3–4 lg ТЦД50/мл.

Вирус культивировали в линиях клеток: почки эмбриона овцы (FLK), почки эмбриона коровы (П 5 Э), почки теленка (Т-1).

Для культивирования вируса применяли питательные среды Игла и Игла МЕМ с содержанием 2% фетальной сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиков по 100 ЕД/мл.

Инфекционную активность вируса определяли титрованием по цитопатическому действию.

Специфические сыворотки к штамму «РС-Б» получали на морских свинках и использовали с титром антител к РС-вирусу крупного рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) 6-7 log2.

Результаты исследований и их обсуждение . Сотрудниками лаборатории препаративной биохимии антигенов Института иммунологии были изготовлены 8 микросерий диагностикумов, антигенных для выявления антигена РС-вируса крупного рогатого скота, и антительных для выявления специфических антител к нему, испытанные нами в экспресс-методе реакции агглютинации целлюлозы (РАЦ).

Механизм реакции РАЦ основан на непрямой реакции агглютинации частиц целлюлозы, сенсибилизированных антигенами РС-вируса или иммуноглобулинами соответствующей специфичности.

РАЦ применяли в качественной и количественной постановке. На предметное стекло наносили 40–50 мкл исследуемого и контрольного образцов с последующим добавлением антигенного или антительного диагно-стикума в равном объеме. Положительные результаты РАЦ учитывали через 3–5 мин в крестах по 3-балльной системе:

++++ – крупнозернистая агглютинация;

+++ – мелкозернистая агглютинация;

• ++ – мелкозернистая агглютинация в незначительных количествах;

• – – кучкование диагностикума в центре или его равномерное распределение в исследуемом образце.

Определение специфичности диагностикумов проводили в сравнительных исследованиях культуральных сред без вируса и содержащих PC-вирус, ротавирус, виpyc инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, аденовирус, а также специфических сывороток к указанным вирусам. Результаты показали, что диагно-стикумы антигенный и антительный были специфичными и реагировали только с гомологичными антигеном и сывороткой.

Чувствительность диагностикума антигенного определяли по накоплению штамма «РС-Б» в линии клеток FLK и П 5 Э. С этой целью готовили десятикратные разведения вируса, которые исследовали в РАЦ и параллельно титровали по ЦПД.

Было установлено, что РАЦ менее чувствительна, чем метод титрования по ЦПД. В вируссодержащей культуральной жидкости антиген РС-вируса в РАЦ выявлялся в титре на 1,5 lg ниже.

Чувствительность диагностикума антительного определяли в сравнительном исследовании сывороток крови крупного рогатого скота в РАЦ и РНГА. Всего исследовали 638 сывороток. Совпадение результатов исследований (положительных и отрицательных) установили в 396 случаях, что составило 62,07%.

Полученные данные свидетельствуют о том, что РАЦ с использованием диагностикума антительного менее чувствительна, чем РНГА (чувствительность РНГА изучена в сравнении с реакцией нейтрализации). Совпадение результатов РАЦ и РНГА составило 62,07%.

Выводы

В результате проведенных исследований было установлено, что при помощи РАЦ с использованием целлюлозных диагностикумов, изготовленных из штамма «РС-Б» РС-вируса крупного рогатого скота, можно в короткий срок (2–5 мин) получить результат, а постановка реакции не представляет методических сложностей. Однако диагностикумы антигенный и антительный, являясь специфичными, недостаточно чувствительны для выявления истинных титров вируса и антител.