Использование фитокомплекса как дополнительного компонента в лечении злокачественных новообразований

Актуальной проблемой в онкогинекологии остается улучшение результатов терапии рака шейки матки, основными методами лечения которого являются химио- и лучевая терапия [8]. Проведенные в последние десятилетия исследования по планированию лечения и оптимальному распределению доз значительно снизили процент ранних и поздних осложнений, связанных с токсическим влиянием на организм ионизирующего излучения и цитостатиков. В то же время не менее четверти пациенток имеют в той или иной степени выраженные лучевые реакции во время облучения или в первые 1–2 мес после него, а также поздние лучевые осложнения, которые составляют не менее 5–6 % и зачастую лимитируют дальнейшее лечение онкологических больных [2, 4, 5, 7, 9]. Для профилактики и лечения лучевых циститов предложен сбор из листьев толокнянки и семян укропа. Дополнительно в качестве мягкого иммуномодулятора рекомендован аптечный экстракт элеутерококка.

Цель настоящей работы – изучение влияния данного фитокомплекса на рост и развитие опухолевого процесса, возможности снижения токсического действия циклофосфана при их совместном применении.

Материал и методы

Эксперименты проведены на 74 беспородных мышах-самках с аденокарциномой Эрлиха (АКЭ) и 81 мыши-самке линии С57Вl/6 с карциномой легких Льюис (3LL) и меланомой В-16 (В-16) массой 20 г в возрасте 3 мес, содержащихся на обычном режиме вивария. Перевивку опухолей проводили согласно общепринятым методикам [11].

Лечение фитосбором (укроп, толокнянка) начинали через 24 ч после перевивки АКЭ, с 7-х сут после трансплантации 3LL и В-16, продолжая в течение 8, 11 и 12 сут соответственно. Фитосбор вводили зондом в желудок в дистиллированной воде: мышам с АКЭ в дозах 100, 200 и 300 мг/кг; мышам с 3LL и В-16 – в дозе 100 мг/кг. Экстракт элеутерококка вводили внутрижелудочно в дозе 5 мл/кг. Для проведения цитостатической терапии использовали цикло-фосфан (ЦФ), выпускаемый промышленностью (ОАО «Биохимик», г. Саранск) в виде стерильного порошка, помещенного в герметически укупоренные флаконы по 0,2 г, мышам с АКЭ вводили через 72 ч после перевивки однократно внутримышечно в дозе 150 мг/кг, мышам с 3LL и В-16 – на 13–14-е сут после трансплантации опухолей однократно внутрибрюшинно в дозе 125 мг/кг. Контрольные мыши получали эквиобъемные количества растворителя в дни введения препаратов.

В конце экспериментов мышей умерщвляли, соблюдая «Правила работы с лабораторными животными». Определяли объем и массу первичной опухоли, массу легких с метастазами, подсчитывали количество и площадь метастазов в легких, вычисляли торможение роста опухоли (ТРО, %), частоту метастазирования, индекс ингибирования метастазирования (ИИМ, %) [1, 11]. Кроме того, на 3-и сут после введения ЦФ проводили подсчет количества лейкоцитов в периферической крови мышей. Результаты обрабатывали с применением непараметрических критериев Вилкоксона–Манна–Уитни и точного метода Фишера [6].

Результаты и обсуждение

В эксперименте на беспородных мышах-самках обнаружено, что введение ЦФ в применяемом режиме достоверно не влияло на объем АКЭ. В то же время добавление в схему цитостатического лечения фитосбора в дозе 100 мг/кг и экстракта элеутерококка вызывало торможение роста АКЭ на 34 %, объем опухолевых клеток при этом статистически значимо уменьшался по сравнению с группой мышей, получавших только химиотерапию. Применение фитосбора в других изучаемых дозах совместно с экстрактом элеутерококка не влияло на эффективность цитостатика. Изолированное назначение животным фитосбора в дозе 100 мг/кг и экстракта элеутерококка (ЭЭ) привело к достоверному уменьшению объема опухолевых клеток в 1,4 раза (ТРО=29 %) по сравнению с контрольными значениями (табл. 1).

Введение ЦФ мышам-самкам линии С57ВL/6 с 3LL вызывало торможение роста опухоли: масса основного опухолевого узла оказалась в 1,4 раза меньше контрольного уровня. Под влиянием цитостатика наблюдалась существенная ингибиция и процесса диссеминации опухоли: частота метастазирования снизилась со 100 % в контроле до 50 % в группе цитостатического лечения; количество метастазов уменьшилось в

Таблица 1

Влияние фитосбора (укроп, толокнянка) и экстракта элеутерококка на развитие АКЭ у беспородных мышей-самок и эффективность лечения ЦФ

Группа наблюдения (количество животных)	Доза/ интервал (ч) х число введений	Объем асцита (Х±m), Мл	Объем опухолевых клеток (Х±m), мл	Торможение или стимуляция (+) роста опухоли, %
1. Контроль (9)	-	3,94 ± 0,37	1,14 ± 0,13	-
2. Циклофосфан (10)	150 мг/кг х 1	4,34±0,36	1,08 ± 0,12	5
3. Фитосбор + ЭЭ (8)	100 мг/кг/24 х 7 5 мл/кг/24 х 7	3,99 ± 0,25	0,81 ± 0,07 1–3, р<0,05	29
4. ЦФ + Фитосбор + ЭЭ (8)	150 мг/кг х 1 100 мг/кг /24 х 7 5 мл/кг/24 х 7	3,39 ± 0,34 1–4 (р<0,01)	0,75 ± 0,08 1–4, р<0,05 2–4, р<0,05	34
5. Фитосбор + ЭЭ (10)	200 мг/кг/24 х 7 5 мл/кг/24 х 7	4,36 ± 0,39	0,99 ± 0,11	13
6. ЦФ + Фитосбор + ЭЭ (9)	150 мг/кг х 1 200 мг/кг /24 х 7 5 мл/кг/24 х 7	4,11 ± 0,35	1,28 ± 0,09	+12
7. Фитосбор + ЭЭ (10)	300 мг/кг/24 х 7 5 мл/кг/24 х 7	4,32 ± 0,17	1,20 ± 0,08	+5
8. ЦФ + Фитосбор + ЭЭ (10)	150 мг/кг х 1 300 мг/кг /24 х 7 5 мл/кг/24 х 7	3,60 ± 0,23 2–8, р<0,05	1,01 ± 0,08	11

Примечание: перед уровнем значимости р – номера сравниваемых групп.

3,1 раза, а их площадь – в 5,8 раза по сравнению с контрольными данными (р<0,01), индекс ингибирования метастазирования составил 84 % (табл. 2).

Применение растительного сбора и экстракта элеутерококка в сочетании с ЦФ значительно повысило эффективность лечения (табл. 2). Так, масса опухоли у мышей с 3LL, получавших комбинированную терапию, уменьшилась в 1,9 раза (р<0,01) по сравнению с этим показателем у леченных одним ЦФ животных. Еще более существенным оказалось влияние комбинированного лечения на процесс диссеминации: частота метастазирования составила 10 % против 50 % (р<0,001), многократно снизилось количество метастазов, их площадь уменьшилась в 13,4 раза (р<0,001) по сравнению с группой животных, получавших химиотерапию, индекс ингибирования метастазирования оказался наивысшим и составил 99,9 % (метастазы в легких отмечены лишь у 1 мыши этой группы). Введение фитосбора и экстракта элеутерококка без цитостатического воздействия мышам-самкам линии С57ВL/6 с 3LL достоверно не влияло на рост опухоли и метастазов (табл. 2).

На 3-и сут после введения цитостатика количество лейкоцитов в периферической крови животных уменьшилось в 7,2 раза по сравнению с контролем (р<0,01). Совместное назначение фитосбора и экстракта элеутерококка с ЦФ не меняло токсического влияния последнего на клетки белой крови (табл. 3). В то же время при изолированном назначении фитосбора и экстракта элеутерококка мышам с 3LL обнаружено уменьшение выраженности лейкоцитоза, имеющего место при развитии опухоли: количество клеток белой крови снизилось в 1,3 раза (р<0,01) и приблизилось к норме (табл. 3).

В эксперименте на мышах-самках линии С57ВL/6 с В-16 ЦФ в указанном режиме достоверно тормозил рост опухоли: масса основного опухолевого узла оказалась в 1,8 раза меньше контрольного уровня. Под действием цитостатика в 4,6 раза уменьшилось количество и в 5,8 раза – площадь метастазов в легких, однако наблюдаемые изменения носили характер тенденции (табл. 4). В результате изолированного использования фитосбора и экстракта элеутерококка отмечалась тенденция к уменьшению количества метастазов в легких (в 1,8 раза), при

Таблица 2

Влияние фитосбора (укроп, толокнянка) и экстракта элеутерококка на развитие 3LL у мышей-самок линии С57ВL/6 и эффективность лечения ЦФ

Группа наблюдения, доза препарата (количество животных)	Масса опухоли (Х±m), г	Торможение или стимуляция (+) роста опухоли, %	Частота метастазирования, %	Количество метастазов на 1 мышь (Х±m)	Площадь метастазов на 1 мышь (Х±m), мм2	Масса легких (Х±m), мг	ИИМ, %
1. Контроль (11)	4,85 ± 0,33	-	100	21,09 ± 3,45	12,54 ± 3,77	202,64 ± 5,98	-
2. ЦФ 125 мг/кг х 1 (10)	3,35 ± 0,11 1–2, р<0,01	31	50 1–2, р<0,001	6,70 ± 3,34 1–2, р<0,01	2,15 ± 1,15 1–2, р<0,01	200,10 ± 4,82	84
3. Фитосбор 100 мг/кг х 12 + ЭЭ 5 мл/кг х 12 (10)	5,21 ± 0,19	+7	100	30,30 ± 3,15	22,30 ±5,75	226,20 ± 17,53	+44
4. ЦФ + фитосбор 100 мг/кг х 12 + ЭЭ 5 мл/кг х 12 (10)	1,75 ± 0,20 2–4, р<0,01	64	10 2–4, р<0,001	0,30 ± 0,30 2–4, р<0,01	0,16 ± 0,16 1–4, р<0,01	231,70 ± 3,91	99,9

Примечание: перед уровнем значимости р – номера сравниваемых групп.

Таблица 3

Количество лейкоцитов в периферической крови мышей линии С57ВL/6 с 3LL после терапии ЦФ и фитосбором в сочетании с экстрактом элеутерококка

Группа наблюдения (количество животных)	Количество лейкоцитов на 3-и сут после введения ЦФ (Х±m), Г/л
1. Контроль (6)	15,97 ± 0,70
2. ЦФ (6)	2,23 ± 0,17; 1–2, р<0,01
3. Фитосбор + ЭЭ (6)	12,50 ± 0,65; 1–3, р<0,01
4. ЦФ + Фитосбор + ЭЭ (6)	2,53 ± 0,07; 1–4, р<0,01

Примечание: перед уровнем значимости р – номера сравниваемых групп.

Таблица 4

Влияние фитосбора и экстракта элеутерококка на развитие меланомы В-16 у мышей-самок линии С57ВL/6 и эффективность лечения ЦФ

Группа наблюдения, доза препарата (количество животных)	Масса опухоли (Х±m), г	Торможение роста опухоли, %	Частота метастазирования, %	Количество метастазов на 1 мышь (Х±m)	Площадь метастазов на 1 мышь (Х±m), мм2	Масса легких (Х±m), мг	ИИМ, %
1. Контроль (10)	5,80 ± 0,40	-	60	3,10 ± 1,01	0,29 ± 0,10	177,60 ± 6,97	-
2. ЦФ 125 мг/кг х 1 (12)	3,25 ± 0,18 1–2, р<0,01	44	33	0,67 ± 0,33	0,05 ± 0,02	184,17 ± 2,86	88
3. Фитосбор 100 мг/кг + ЭЭ 5 мл/кг х 11 (8)	5,50 ± 0,23	5	75	1,75 ± 0,70	0,99 ± 0,91	161,00 ± 5,48	29
4. ЦФ + фитосбор 100 мг/кг + ЭЭ 5 мл/кг х 11 (10)	3,72 ± 0,36 1–4, р<0,01	36	50	3,00 ± 1,65	0,28 ± 0,16	187,33 ± 14,81	19

Примечание: перед уровнем значимости р – номера сравниваемых групп.

этом индекс ингибирования метастазирования в этой группе мышей составил 29 % (табл. 4). Использование растительного сбора и экстракта элеутерококка в сочетании с ЦФ значимо не изменяло эффективности противоопухолевой терапии.

Таким образом, в экспериментах на мышах с перевиваемыми опухолями не выявлено стимулирующего влияния фитосбора и экстракта элеутерококка на развитие бластом. Более того, на беспородных мышах-самках с АКЭ обнаружена ингибиция роста опухоли под влиянием испытуемых растительных средств. Особое внимание следует обратить на способность фитосбора в сочетании с экстрактом элеутерококка повышать противоопухолевый и противометастати-ческий эффект ЦФ (АКЭ, 3LL). Положительным моментом является выявленная способность растительных средств уменьшать выраженность лейкоцитоза, сопровождающего развитие опухоли, нормализуя количество лейкоцитов в периферической крови животных.

В основе механизма противоопухолевого действия фитосбора может лежать диуретическая активность укропа и толокнянки. Одним из патогенетических звеньев развития неопластического процесса является высокое содержание воды, ионов натрия, нередко и калия в опухоли, необходимых ей для усиленного роста [10]. Уменьшение поступления в клетки этих ведущих составных частей биосинтетических процессов ухудшает условия их существования, снижает потенциальные возможности прогрессивного развития новообразования. Снижение интенсивности поступления натрия и воды в опухолевые клетки, вероятно, достигнуто применением фитосбора, содержащего в своем составе растения с мочегонными свойствами, удаляющими из организма и опухоли электролиты, в первую очередь ионы натрия и воду. На этом же фоне происходит усиление эффективности цитостатической терапии, так как при использовании лекарственных растений с диуретическим действием нарушается водно-натриевый баланс опухолевой ткани в связи с усилением диуреза и натриуреза, что ухудшает условия существования опухолевых клеток и способствует более эффективному цитотоксическому действию применяемых антибластомных средств.

Выводы

• 1.    В эксперименте на беспородных мышах обнаружена способность фитосбора, вводимого совместно с экстрактом элеутерококка, ингибировать рост аденокарциномы Эрлиха.

• 2.    На животных с аденокарциномой Эрлиха и карциномой легких Льюис выявлено повышение эффективности лечения циклофосфаном фитосбором и экстрактом элеутерококка.

• 3.    На мышах с карциномой легких Льюис фитосбор и экстракт элеутерококка снижали выраженность лейкоцитоза в периферической крови.