Использование осей соцветий аралии манчжурской для восстановления липидного обмена при алкогольной интоксикации

Одним из сырьевых источников среди отходов от переработки дикоросов для получения фармакологических препаратов являются оси соцветий аралии Манчжурской ( Aralia mand-shurica Rupr. et Maxim ). Из них был выделен водно-спиртовый экстракт «Армафен» (патент № 2329056; свидетельство на товарный знак RU № 226923; En № 226932), в состав которого входит широкий спектр биологически активных по-лифенольных соединений: катехины, лейкоанто-цианы, флавонолы, процианидины, олигомерные таннины и лигнин. Полифенолы составляют свыше 60% сухого остатка экстракта и характеризуют его фармакологическую активность, так как эти вещества способны инактивировать су-пероксиданионы и выступать в качестве ловушек свободных радикалов [11], являющихся центральным звеном развития патологии печени при токсических гепатитах.

Цель работы: изучение применения экстракта «Армафен» для восстановления показателей липидного обмена в крови животных при алкогольном гепатите.

Методы исследования. Суховоздушное сырье экстрагировали 40% этиловым спиртом методом реперколяции. Выход экстракта составлял 1 л на 1 кг сырья. Эксперимент проводили на крысах-самцах Вистар массой 160-180 г, содержавшихся на стандартном рационе питания, по схеме, приведенной в работе A. Gajdos [7]. Сначала, в течение 7 дней крысам внутрибрюшинно вводили 33% этанол в дозе 7,5 мл на 1 кг массы тела животного 2 раза в сутки. Затем после последнего дня введения этанола вводили перорально через зонд в течение 7 дней водный раствор сухого остатка экстракта из осей соцветий аралии, а в качестве препарата сравнения вводили эталонный гепатопротектор коммерческий полифенольный препарат «Легалон» (MADAUS AG, Германия), содержащий в качестве активного начала комплекс флавоноидов из экстракта плодов расторопши пятнистой (Silybum maria-num). Комплекс полифенолов из армафена вводили в виде водного раствора (предварительно освобождали от спирта путем упаривания в вакууме), легалон – в виде взвеси в 1% крахмальном клейстере. Препараты вводили в дозе (в объеме 0,4 мл), эквивалентной 100 мг общих полифенолов/кг массы тела. Доза в 100 мг/кг соответствует известной терапевтической дозе для полифенольных гепатопротекторов [1]. Контролем служили животные, получавшие дистиллированную воду через зонд в соответствующем объеме.

Животные были разделены на 4 группы по 10 крыс в каждой: 1-я – контрольная (интактная); 2-я – введение 33% этанола в течение 7 дней; 3-я – введение экстракта аралии в период отмены токсиканта в течение 7 дней; 4-я – введение ле-галона в период отмены токсиканта в течение 7 дней. Через 14 дней животных выводили из эксперимента декапитацией под легким эфирным наркозом с соблюдением правил и международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (Страсбург, 1986).

Экстракты общих липидов из сыворотки крови готовили по методу J. Folch et al. [6]. Фракционное разделение фосфолипидов осуществляли методом двумерной микротонкослойной хроматографии на силикагеле [12], а их идентификацию и количественное определение по методу [13]. Хроматографическое распределение нейтральных липидов и их количественное определение проводили методом одномерной мик-ротонкослойной хроматографии на силикагеле по методу [4]. Обнаружение пятен нейтральных липидов осуществляли с помощью паров йода. Количественное содержание отдельных фракций выражали в процентах от общей суммы нейтральных липидов и фосфолипидов, соответственно. Результаты обрабатывали по параметрическому критерию Стьюдента ( t ), используя статистическую программу Instat (Graph Pad Software Inc.USA, 2005).

Результаты и обсуждение. Алкогольная интоксикация в течение 7 дней сопровождалась достоверными изменениями в содержании фракций нейтральных липидов и фосфолипидов в сыворотке крови крыс (табл. 1). Они проявлялись в увеличении содержания триацилглицери-нов на 13% (р<0,05) и свободных жирных кислот на 30% (р<0,05), что связано с активацией периферического липолиза в жировой ткани в ответ на выброс в кровь катехоламинов (реакция на токсикант). Увеличение уровня холестерина на 19% (р<0,01) можно объяснить активацией его синтеза из ацетил-КоА, который образуется в избытке при окислении этилового спирта. Увеличение количества эфиров жирных кислот на 8% (р<0,05) обусловлено реакцией жирных кислот с этанолом. Снижение содержания эфиров холестерина на 17% (р<0,001) определяет нарушение этерифицирующей функции печени и, как следствие, синтеза и катаболизма липопротеинов. Кроме этого уровень ЭХС снижен на 17% (р<0,001) в результате ингибирования этанолом активности ЛХАТ (лецитин :холестерин-ацилтрансферазы) [5].

Следует отметить достоверные изменения в содержании отдельных фракций фосфолипидов, которые служат основным источником структурного материала для обновления клеточных и субклеточных мембран. Так, отмечалось уменьшение в содержании основных структурных компонентов мембран - фосфатидилхолина на 7% (р<0,01) и фосфатидилэтаноламина на 25% (р<0,01) при одновременном увеличении лизофосфатидилхолина на 46% (р<0,001) и ли-зофосфатидилэтаноламина на 67% (р<0,001), что обусловлено увеличением активности фосфолипазы А 2 под действием этанола. Снижение содержания фосфатидилхолина также может быть связано со снижением его биосинтеза в результате ингибирования этанолом активности холи-нофосфотранферазы [5]. Достоверно возросло содержание сфингомиелина на 21% (р<0,001) и фосфатидилинозита на 15% (р<0,05), тогда как количество дифосфатидилглицерина уменьшилось на 34% (р<0,001). Эти результаты свидетельствуют о нарушении функции митохондрий и получении энергии через окисление этанола.

Известно, что сфингомиелин и холестерин имеют жесткую систему взаимной регуляции, при этом уровень сфингомиелина в мембранах определяет степень их способности абсорбировать холестерин. Сфингомиелин смещает направление потока холестерина в сторону плазматической мембраны, стимулируя его биосинтез de novo и ингибируя его этерификацию [10], что и обусловливает наблюдаемое снижение содержания этерифицированной формы холестерина. При введениия армафена (3 группа) после интоксикации этанолом показатели липидного обмена достоверно не отличались от таковых у интактных животных. При введении легалона в период отмены токсиканта (4 группа) наблюдалась выраженная тенденция к восстановлению липидных показателей в сыворотке крови, однако ряд величин еще достоверно отличался от контроля. Так, следует отметить повышенный уровень свободных жирных кислот

(на 27%, р<0,01), холестерина (на 13%, р<0,05), лизофосфатидилхолина (на 13%, р<0,01), лизо-фосфатидилэтаноламина (на 50%, р<0,001), а также сниженный уровень эфиров холестерина (на 9%, р<0,05) и дифосфатидилглицерина (на

22%, р<0,001). То есть, при введении легалона сохранялась повышенная активность фосфолипаз и не полностью восстановилась этерифици-рующая функция печени.

Таблица 1. Влияние растительных препаратов (армафен и легалон) на содержание нейтральных липидов и фосфолипидов в сыворотке крови крыс при алкогольной интоксикации (% от суммы всех фракций; М±m).

Примечание : различия от контроля статистически достоверны при: ¹ - р<0,05; ²- р<0,01; ³- р<0,001. ТАГ – триацилглицерины, СЖК – свободные жирные кислоты, ЭЖК – эфиры жирных кислот, ХС – холестерин, ЭХС – эфиры холестерина, ФХ – фосфатидилхолин, ЛФХ – лизофосфатидилхолин, СМ – сфингомиелин, ФЭ – фосфатидилэтаноламин, ЛФЭ – лизофосфатидилэтаноламин, ФС – фосфатидилсерин, ФИ – фосфа-тидилинозит, ФК – фосфатидная кислота, ДФГ – дифосфатидилглицерин

Биохимический механизм действия исследованных препаратов обусловлен тем, что растительные полифенолы, входящие в состав арма-фена и легалона стимулируют этерифицирую-щую функцию печени, подавленную стрессом (полифенолы активируют фермент ЛХАТ) [2]. Факт достоверного снижения уровня лизофрак-ций свидетельствует об ингибировании фосфолипаз полифенолами препаратов [9]. Однако при сравнении выраженности восстановительного эффекта действия легалона и армафена проявляются определенные преимущества последнего. Известно, что в состав легалона входит активная группа изомерных флавоноидных содинений (силибинин, силикристин, силидианин), не образующих олигомерных форм. Видимо армафен, будучи комплексом олигомерных и полимерных веществ, демонстрирует антиоксидантные и ан-тирадикальные свойства в большей степени, чем мономеры легалона. Кроме того, растительные полифенолы, входящие в их состав, имеют способность улавливать свободные оксигенные и пероксильные радикалы, образуя при этом относительно стабильный феноксил-радикал, который сдерживает процессы перекисного окисления липидов и снимает состояние оксида-тивного стресса [8].

Выводы: полученные результаты свидетельствуют о высокой эффективности применения природных комплексов полифенолов для сохранения биохимических показателей липидного обмена сыворотки крови в условиях острой алкогольной интоксикации. Эффективность ар-мафена не уступает, а по ряду показателей превосходит эталонный гепатопротектор «Легалон». Учитывая, что полифенольные соединения содержатся в растениях и фруктах, традиционно употребляемых человеком в пищу, и являются эволюционно-адаптированными для человеческого организма, можно рекомендовать армафен, как для использования в качестве профилактического средства для снижения токсического воздействия этанола на организм, так и в производстве крепких ликеро-водочных изделий с целью снижения их токсического действия на печень.