Использование с-концевого домена альфа-фетопротеина для направленной доставки метотрексата в опухолевые клетки

Материал и методы. В нашем институте был получен экспрессионный конструкт 3DAFP, на основе которого был создан высокоэффективный штамм-продуцент, а также разработана методика его выделения, очистки и рефолдинга. Биологическую активность ФИТЦ-меченого 3DAFP оценивали на клетках линии MCF7 (карцинома молочной железы человека) и лимфоцитах периферической крови методом проточной цитофлуорометрии. Цитотоксич- ность препаратов определялась с помощью МТТ-теста. Показана высокая эффективность связывания и эндоцитоза полученного 3DAFP в клетках линии MCF7 в отличие от лимфоцитов периферической крови. Для осуществления направленной доставки препарата метотрексата был синтезирован его конъюгат с полученным нами 3DAFP.

Результаты . Токсичность (IC50) полученного конъюгата на клетках линии MCF7 составила 70 nМ, для лимфоцитов периферической крови токсичность не выявлена в пределах от 0 до 2μМ. В качестве сравнения был использован раствор метотрексата в том же диапазоне концентрации, IC₅₀ для которого составила 780 nМ для лимфоцитов периферической крови человека и 850 nМ для клеток линии MCF-7.

Выводы. Полученные результаты показывают, что токсичность полученного нами конъюгата для лимфоцитов значительно ниже, чем таковая метотрексата. В то же время токсичность для клеток линии MCF7 полученного конъюгата 3DAFP с метотрексатом на порядок выше, чем таковая для исходного препарата метотрексата. Проведенные испытания биологической активности 3DAFP подтвердили возможность его применения в качестве векторного белка для создания препаратов направленного действия. Специфичность и направленность токсического действия полученного ковалентного конъюгата метотрексата с 3DAFP показывают возможность использования описанной нами стратегии для снижения общей токсичности противоопухолевых препаратов.

СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2011. Приложение № 1