Исследование активности ядрышковых организаторов в клетках эпителиальных опухолей толстой кишки с использованием компьютерного анализа изображений и внутреннего контроля окрашивания

Определение площади ядрышковых организаторов с использованием компьютерных программ анализа изображений является объективным методом диагностики. Однако окрашивание серебром ядрышковых организаторов протекает крайне вариабельно и требует стандартизации как условий окрашивания, так и морфометрического исследования. Для решения последней задачи используют соотноше-ниe морфометрических данных в изучаемых клетках с аналогичными в непролиферирующих клетках, напримeр, малых лимфоцитах, которые служат контролем окрашивания.

Цель исследования – изучение активности ядрышковых организаторов с использованием компьютерного анализа изображений и внутреннего контроля окрашивания в эпителиальных опухолях толстой кишки.

Исследована 51 аденома ректосигмоидного отдела толстой кишки, полученная послe проведения эндоскопической полипэктомии. В тубулярных (26) и тубулярно-ворсинчатых (25) аденомах легкая, умeрeнная и выраженная дисплазия встречалась соответственно в 14; 8; 4 и 7; 13; 5 случаях. Средний возраст пациентов с аденомой составил 59,2 года (25–75 лет), 24 женщины и 27 мужчин. Также исследованы биопсии 5 высокодифференцированных аденокарцином (средний возраст пациентов 58,2 года, 41–70 лет) и 10 случаев неизмененной слизистой оболочки толстой кишки (средний возраст пациентов 55,5 года, 45–79 лет). Кусочки ткани фиксировали в 10 % нейтральном забуференном формалине. Послe стандартной депарафинизации срезы толщиной 2 мкм автоклавировали при 1200С 20 мин в 0,01 М цитратном буфере (рН=6,0). Послe охлаждения помещали в 2н. муравьиную кислоту на 12 мин при комнатной температуре. Окрашивали по одностадийной методике (Ploton

D. et al., 1986), в течение 16 мин при 370С. В каждом случае с 10 полей зрения микроскопа при увеличении х1000 (200 клеток) получали цифровые изображения. Изображения анализировали в программe Leica QWin 2.0, автоматически определяя индекс площади гранул серебра в ядрах клеток как отношение площади гранул серебра в ядрах эпителиальных клеток к площади гранул серебра в ядрах малых лимфоцитов этого же среза (внутренний контроль окрашивания). Статистический анализ полученных результатов осуществляли в программe STATISTICA 6.0, данные представляли в виде медианы и интерквартильного интервала, использовали непараметрические методы: U-тест Манна–Уитни и коэффициент корреляции Спирмeна (r).

В нижних 2/3 крипт слизистой оболочки индекс площади гранул серебра в ядрах клеток составил 2,33 (2,18– 2,55). В аденоме толстой кишки индекс площади гранул серебра составил 3,38 (2,91–3,83): тубулярного типа стро-eния – 3,29 (2,89–3,59), тубулярно-ворсинчатого – 3,67 (3,03–4,14). В очагах легкой, умеренной и выраженной дисплазии аденомы индекс площади гранул серебра равнялся – 2,88 (2,64–3,17); 3,59 (3,36–3,88) и 4,10 (3,78– 4,29) соответственно, в высокодифференцированной аденокарциноме – 4,50 (4,44–4,51). Определены статистически значимые отличия индекса площади гранул серебра в ядрах клеток между нижними 2/3 крипт неизмененной слизистой оболочки и легкой дисплазией (р=0,002), а также легкой и умеренной дисплазией (р<0,001); умеренной и выраженной дисплазией (р=0,008); выраженной дисплазией и высокодифференцированной аденокарциномой (р=0,02). Отсутствовали статистически значимые отличия между аденомой тубулярного и тубулярно-ворсинчатого типа строения (р=0,09). Индекс площади гранул серебра в ядрах эпителиальных клеток аденомы толстой кишки имел статистически значимую корреляцию с выраженностью дисплазии эпителия (r=0,82; р<0,001), с гистологическим типом строения корреляция не имела статистической значимости (r=0,25, p>0,05).

В ряду неизмененная слизистая оболочка (нижние 2/3 крипт) – легкая – умеренная – выраженная дисплазия – высокодифференцированная аденокарцинома происходит статистически значимое увеличение индекса площади яд- рышковых организаторов. Использование внутреннего контроля окрашивания, при определении площади ядрышковых организаторов в ядрах клеток эпителиальных опухолей толстой кишки, позволяет стандартизировать морфометрическое исследование. Определение индекса площади ядрышковых организаторов с использованием компьютерного анализа изображений и внутреннего контроля окрашивания может служить дополнительным, объективным критерием при дифференциальной диагностике дисплазии в аденоме и рака толстой кишки.